为获得藏灵菇马克斯克鲁维酵母M3菌株胆盐水解酶(BSH)的纯品,探讨了BSH粗品的分离纯化方法。粗酶液采用硫酸铵分级沉淀,再以DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换介质,分别考察缓冲液pH值、流速和洗脱方式等对BSH分离纯化的影响。结果表明,在40%～70%饱和度的硫酸铵条件下BSH提取效率最高。最佳层析条件为采用pH值为6.5、50mmol/L磷酸钠缓冲体系、1.5mL/min的流速,进行分步洗脱(100mmol/L、350mmol/L、500mmol/L～600mmol/L NaCl及50mmol/L磷酸盐缓冲液3步洗脱)。在优化纯化条件下BSH的比活力可达479.55AU/mg,是原粗酶液的23.66倍。
利用从藏灵菇中筛选的产胆盐水解酶(bile salt hydrolase,BSH)的马克斯克鲁维酵母菌K1(Kluyveromyces marxianus K1)研究提高酶活力的环境因素。针对主要影响胆盐水解酶合成的4个因素,采用4因素3水平L9(34)正交试验确定了高产胆盐水解酶优化发酵条件:发酵温度为32℃,发酵时间为24h,培养基的初始pH值为6.0,接种量为2%;在优化发酵条件下,K1菌株产BSH活力比优化前提高了52.4%,为开发研制降胆固醇功能食品及微生态制剂提供了试验基础。
