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HLA-B*2704重链胞外功能区基因片段的克隆表达及其生物学功能的初步鉴定被引量：1: 2013年; 目的:克隆及可溶性表达HLA-B*2704重链胞外功能区,并对其生物学功能进行初步鉴定。方法:以HLA-B位点全长cDNA为模板,用PCR-SSP方法扩增HLA-B*2704重链胞外区cDNA,经测序鉴定后与pET32a可溶性原核表达载体构建其重组原核表达系统,并在大肠杆菌BL21中表达,采用Western印迹及微量淋巴细胞毒阻断实验初步鉴定该蛋白的特异性及其生物学特性。结果:扩增出HLA-B*2704重链胞外功能区cDNA片段,构建的HLA-B*2704 cDNA-pET32a可溶性原核表达载体可在大肠杆菌BL21表达系统中得到较好表达,表达量约占菌体总蛋白的40%;通过Western印迹鉴定了表达蛋白的特异性;通过微量淋巴细胞毒阻断实验发现该重组蛋白具有生物活性并可特异性阻断HLA-B27阳性细胞的微量淋巴细胞毒反应。结论:在大肠杆菌中表达了具有生物学活性的HLA-B*2704重链胞外功能区,为强直性脊柱炎的机理研究及特异性阻断药物的筛选提供了实验基础和新的靶标。; 于坤袁方代东发梁飞刘楠赵晓郝玉娜奚永志孙玉英

HLA-B* 2705分子结构对其在原核细胞可溶性表达影响的研究: 2013年; 目的研究人类白细胞抗原(human leukocyte antigen,HLA)-B* 2705分子结构对其在原核细胞可溶性表达的影响。方法采用RT-PCR法将HLA-B* 2705基因的全长、胞外区和α1、α2功能区分别进行克隆并连接到pET-32a(+)表达载体。经IPTG诱导表达,并经超声破碎、层析和透析纯化蛋白,再经体外微量细胞淋巴毒反应检测蛋白质活性。结果成功构建3种pET-32a(+)表达载体,经IPTG诱导后,HLA-B* 2705基因全长和胞外区主要以包涵体的形式表达,可溶性蛋白的量较低;而α1和α2功能区则以高效可溶性形式表达,通过体外微量细胞淋巴毒实验证实,HLA-B* 2705的α1和α2功能区可溶性蛋白可与HLA-B27抗体特异性结合,并成功阻断补体介导的细胞毒作用。结论α1和α2功能区能够在原核细胞中高效表达可溶性蛋白,并具有蛋白功能,而HLA-B* 2705基因全长和胞外区主要以包涵体的形式表达,表明蛋白质的大小和空间结构对于其可溶性表达具有重要影响。; 代东发袁方于坤梁飞刘楠龙娟赵晓奚永志孙玉英; 关键词：分子结构可溶性表达包涵体

基于鸡Ⅱ型胶原基因的全新型DNA疫苗的研制及其在治疗大鼠类风湿关节炎中的疗效观察: <正>业已证明II型胶原(CII)是类风湿性关节炎( RA)最主要的自身免疫抗原,采用口服鸡II型胶原蛋白(CCII)诱导免疫耐受治疗 RA标志着 RA治疗策略的重大进展之一。新近我们在国际上克隆成功鸡II型胶原蛋白基因...; 龙娟赵晓宋新强骆媛薛红袁方刘楠梁飞孙玉英奚永志; 文献传递

新型重组鸡Ⅱ型胶原特异性耐受原表位肽rcCTE1-2表达纯化及对CIA小鼠治疗效应的研究: <正>口服耐受是自九十年代国际上兴起治疗 RA的特异疗法之一。而研制小分子免疫活性肽诸如耐受原表位肽或变构肽进行其治疗则是该研究领域近年来的重大进展之一。这主要是因其具有空间结构较简单、稳定性较高、机体吸收利用快、无需消...; 谭刘欣刘楠梁飞赵晓龙娟袁方骆媛薛红孙玉英奚永志; 文献传递

氨甲蝶呤通过诱导Th1向Th2偏移提高CD4+CD25+T细胞比例调节机制治疗类风湿关节炎: 氨甲蝶呤(methotrexate,MTX)作为改变 RA患者病情药之一,被认为是治疗 RA的首选药,但MTX治疗 RA的机制目前仍不十分清楚。本研究以CIA为模型,以口服II型胶原治疗组为对照,观察MTX对CIA大鼠的...; 宋新强奚永志龙娟赵晓骆媛薛红衰方刘楠粱飞孙玉英

基于B7-2/CD28研制的全新型B7-2-PE40外毒融合基因疫苗及其在防治大鼠RA疗效与机理研究: 基于B7:CD28+/CTLA4共刺激信号途径在其发生发展的病理生理过程中发挥重要作用这一事实,选择性阻断B7:CD28+/CTLA4共刺激信号途径诱导免疫耐受已成为有效防治自身免疫性疾病的重要策略之一。然而,纵观目前国...; 薛红刘楠梁飞骆媛赵晓龙娟袁方孙玉英奚永志

PRDM9多态性与慢性粒细胞白血病的关联性研究: 2016年; 目的探究PRDM9多态性与慢性粒细胞白血病(CML)遗传易感性的关系。方法应用PCR直接测序技术与DNA单克隆测序技术,对116名Ph染色体及BCR-ABL融合基因阳性CML患者(CML组)和111名健康对照人群(对照组)的PRDM9多态性做DNA序列测定分析;对比CML患者与健康人群的PRDM9多态性分布差异,并通过卡方检验来探究二者之间的关联性。结果在对照组中共发现了7种PRDM9等位基因,其中已命名的有PRDM9-A、B、C、L3及L7,另外2个为新等位基因,分别命名为X1和X2。CML组中共发了10种PRDM9等位基因,除5个已命名等位基因与对照组一样,还发现了5个新等位基因X1、X2、X5、X12及X13。CML组与对照组中PRDM9-A及B等位基因分布为分别为68.10%vs 83.78%,19.40%vs 9.91%(P<0.01),AA基因型分布为41.38%vs 71.17%,AB基因型分布为33.62%vs 15.32%(P<0.01)。此外,PRDM9基因多态性分布在中国汉族与欧洲及非洲人群中存在明显差异(P<0.01)。结论 PRDM9多态性与CML具有关联性,A及AA是CML发生的保护等位基因及基因型,B及AB是CML发生的易感等位基因及基因型。PRDM9基因多态性分布具有人群特异性。; 王玲袁方代东发梁飞刘楠龙娟赵晓运松奚永志孙玉英; 关键词：慢性粒细胞白血病基因多态性遗传易感性保护基因

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赵晓