郑和忠
- 作品数：2 被引量：8H指数：1
- 供职机构：遵义医学院附属医院更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 内脏内胚层样END-2细胞体外诱导鼠胚胎干细胞分化为心肌细胞的实验研究被引量：7
- 2006年
- 目的 探讨内脏内胚层样END-2细胞体外诱导胚胎干细胞（embryonic stem cells，ESCs）分化为心肌细胞的特征。方法 用鼠胚胎成纤维细胞（mouse embryonic fibroblasts，MEF）作为饲养层促进ESCs增殖并抑制其分化，先将ESCs悬浮培养形成2～3d的拟胚体（embryoid bodies，EBs），再和END-2细胞共培养诱导向心肌细胞分化。实验分4组。第1，2组EBs分别和END-2细胞或END-2细胞条件培养液共培养；第3组EBs和表面铺有一层琼脂糖的END-2细胞共培养；第4组自然分化组为对照组。相差显微镜下观察分化细胞的形态学变化，免疫细胞荧光技术检测心肌细胞特异性肌钙蛋白T（TnT）的表达；透射电镜观察分化心肌细胞的超微结构。结果 各实验组均可见自发节律性收缩的拟胚体。随着培养的延长。自发节律性收缩的拟胚体数目也增加，均表达心肌细胞特异性蛋白TnT，以及观察到心肌样超微结构。在和END-2细胞直接接触的诱导条件下，分化的细胞形态较单一。结论 END-2细胞通过分泌可溶性细胞因子可诱导ESCs向心肌细胞分化，直接接触在END-2细胞诱导作用中并不是必要的。但可诱导出较单一的细胞。
- 曾彬林国生郑和忠蔡军罗浩
- 关键词：胚胎干细胞心肌细胞共培养
- TGF-β_1联合内脏内胚层END-2细胞诱导胚胎干细胞分化为心肌细胞及与凋亡的关系被引量：1
- 2007年
- 目的:探讨体外诱导胚胎干细胞(ESCs)向心肌细胞分化过程中分化与凋亡的关系,为优化组织工程的种子细胞提供依据。方法:先将ESCs悬浮培养形成2-3 d拟胚体(embryoid bodies,EBs),再向培养液中添加转化生长因子-β1(TGF-β1),以及与内脏内胚层样END-2细胞条件培养液共培养联合诱导ESCs向心肌细胞分化。以自然分化为对照组。激光共聚焦显微技术检测心肌细胞特异性肌钙蛋白T(TnT)的表达,透射电镜观察分化心肌细胞的超微结构。用AnnexinⅤ/PI双染后,在流式细胞仪上检测ESCs分化过程中的凋亡情况。结果:EBs经TGF-β1诱导后,有(43.00±2.08)%的拟胚体出现自发节律性收缩,表达心肌细胞特异性蛋白TnT,以及观察到心肌样超微结构,尤其是联合TGF-β1和END-2细胞条件培养液诱导,自发性收缩的拟胚体高达(88.00±1.42)%(P<0.01),收缩区域较大且拥有较成熟的心肌样结构。然而自然分化组发生自发节律性收缩的拟胚体只有(12.00±1.53)%。经2种诱导条件诱导后,检测两者的凋亡率分别为(5.58±0.65)%,(9.60±0.75)%(P<0.05)。结论:联合TGF-β1和内脏内胚层样END-2细胞条件培养液对心肌细胞分化有较高的诱导率,两者发挥协同诱导作用,可能机制是直接诱导ESCs分化或促进不向心肌细胞分化的ESCs凋亡。
- 曾彬林国生郑和忠蔡军罗浩
- 关键词：胚胎干细胞心肌细胞
