郭东升
- 作品数：6 被引量：11H指数：2
- 供职机构：华北煤炭医学院预防医学系更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 核转录因子TR3小干扰RNA载体的构建及其效果鉴定
- 2008年
- 目的:构建核孤儿受体TR3的小干扰RNA(siRNA)真核表达载体,并进行沉默效果测定。方法:根据TR3 mRNA序列和载体psiSTRIKE的粘性末端,设计合成TR3的干扰RNA序列,退火后克隆至psiSTRIKE,经测序鉴定后用阳离子脂质体将重组子和TR3高表达载体TR3-pcDNA共转染至HEK293细胞中,以Western blotting检测干扰后HEK293细胞内TR3表达的变化。结果:Western blotting检测结果证实构建的TR3 siRNA表达重组载体可显著抑制HEK293细胞内TR3的高表达。结论:构建了核孤儿受体TR3 siRNA真核表达载体。
- 王新兴郭东升冯红战锐钱令嘉
- 关键词：小干扰RNAHEK293细胞
- 人热休克因子1对抗增殖蛋白基因启动子转录调控的研究被引量：2
- 2009年
- 目的:研究人热休克因子1(hHSF1)对抗增殖蛋白(prohibitin)启动子转录活性的影响。方法:采用PCR方法扩增hHSF1全长编码序列,构建pcDNA3.1(+)-hHSF1真核表达载体,将pcDNA3.1(+)-hHSF1和人prohibitin基因启动子表达载体pGL3-prohibitin共同转染HEK293细胞,采用双荧光素酶报告基因检测系统,检测双荧光素酶活性,分析hHSF1对抗增殖蛋白基因启动子的转录调控作用。结果:成功构建pcDNA3.1(+)-hHSF1真核表达载体,荧光素酶活性测定发现hHSF1明显上调pGL3-prohibitin转录。结论:hHSF1对prohibitin具有转录调控作用。
- 刘晓华郭东升王新兴张志清战锐王晓明钱令嘉
- 关键词：PROHIBITIN转录调控
- 大鼠热休克蛋白70的融合表达及纯化鉴定
- 2008年
- 目的:在大肠杆菌中高效表达并纯化大鼠热休克蛋白(HSP)70与麦芽糖结合蛋白(MBP)的融合蛋白,以进一步研究细胞外HSP70的生物学功能。方法:用RT-PCR方法扩增目的基因,并将其克隆到原核表达载体pMAL-c2X中,酶切鉴定并进行DNA测序;将该重组表达载体转化大肠杆菌BL21,用IPTG在不同温度及时间下进行诱导表达,建立最佳诱导表达条件;采用Amylose树脂预装柱对目的蛋白进行亲和纯化,并对不同表达条件下的产物进行SDS-PAGE及Western blot分析。结果:克隆出目的基因,构建了融合表达载体pMAL-c2X/hsp70;诱导表达后经SDS-PAGE检测表明获得了目的条带,并纯化出纯度较高的融合蛋白;免疫印迹鉴定表明其具有抗原活性。结论:在大肠杆菌中高效表达并纯化了融合蛋白MBP-HSP70,为进一步研究细胞外HSP70的生物学效应提供了有用的材料。
- 战锐刘晓华王晓明冷雪闫立成郭东升王立群钱令嘉
- 关键词：热休克蛋白70纯化
- Prohibitin——肿瘤与代谢性疾病治疗的新靶标被引量：5
- 2007年
- Prohibitin(PHB)是一种高度保守、分布广泛的蛋白质。PHB不仅是一类新型的分子伴侣蛋白,而且参与调节细胞周期、维持线粒体结构和功能,具有抗细胞凋亡、衰老和增殖的作用。PHB的多种功能和不同定位,以及在多种疾病中存在表达差异的现象提示,PHB可能参与疾病的发生与发展过程。因此,PHB在多种疾病如:肿瘤、糖尿病和肥胖等的治疗方面将会成为有用的药物靶标。
- 郭东升钱令嘉袁聚祥
- 关键词：PROHIBITIN肿瘤代谢性疾病
- 核转录因子TR3及其缺失突变体在酵母双杂交系统中转录激活作用的检测被引量：3
- 2008年
- 目的:检测TR3及其转录活性域缺失突变体在酵母双杂交系统中的转录自激活作用。方法:采用PCR方法扩增TR3全长序列及其缺失突变体,构建酵母双杂交系统的诱饵载体pGBKT7-TR3和pGBKT7-TR3/Δ1～690,将pGBKT7-TR3转化感受态酵母菌AH109后培养于含缺失培养基的平板上,检测β-半乳糖苷酶活性,判定其是否具有转录自激活作用。结果:构建了包含TR3全长序列和TR3/Δ1～690序列的诱饵载体,转化酵母菌AH109后在双缺和三缺培养基上未能使β-半乳糖苷酶活性滤纸片变蓝,说明β-半乳糖苷酶报告基因未被激活。结论:TR3及其转录活性域缺失突变体没有转录自激活作用,可用于酵母双杂交系统。
- 王新兴杨志华刘晓华郭东升钱令嘉
- 关键词：酵母双杂交
- Prohibitin特异性MiRRNAi表达载体构建及其干扰效果测定被引量：1
- 2009年
- 目的:构建携带prohibitin(PHB-1)基因的MiR RNAi真核表达载体pcDNA^(TM)6.2-GW/EmGFP-MiR,并观察其转染HEK293细胞株前后PHB-1的表达变化。方法:根据GenBank中prohibitin的序列,设计特异的两条互补的单链寡核苷酸退火后形成双链,克隆至pcDNA^(TM)6.2-GW/EmGFP-MiR质粒缺口末端,连接在质粒上生成含MiR RNAi pcDNA^(TM) 6.2-GW/EmGFP-MiR-PHB载体,测序鉴定后,用脂质体将重组子转染至HEK293细胞中,用Western blotting检测干扰后HEK293细胞内PHB-1表达的变化。结果:将目的序列成功连接到载体上,并经测序分析证实载体构建成功。Western blotting检测结果证实构建的PHB-1 MiR RNA表达重组体可显著抑制HEK293细胞内PHB-1的表达。结论:成功构建了携带PHB-1基因的MiR RNAi真核表达载体。
- 郭东升王新兴刘晓华战锐袁聚祥钱令嘉
- 关键词：PROHIBITINHEK293细胞RNA干扰
