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Spata1在雄性小鼠各组织中的表达及其与纤毛内转运蛋白IFT20的相互作用初探: 目的:观察SPATA1在雄性小鼠各组织中的表达及其在细胞内的定位，并初步探讨精子发生相关蛋白SPATA1与鞭毛内转运蛋白IFT20是否存在直接的相互作用。　　方法:提取成年雄性小鼠的心、脑、脾、肺、肝、肾、肌肉、睾丸8个...; 闵洁; 关键词：细胞定位; 文献传递

精子相关抗原6与速激肽1相互作用关系的探讨被引量：3: 2016年; 目的:构建速激肽1(Tac1)基因真核表达载体并探讨其与精子相关抗原6(SPAG6)之间的相互作用。方法:提取10只昆明雄性小鼠的心、肝、脾、肺、肾、脑、肌肉、睾丸8个组织的RNA,逆转录成c DNA后,用RT-PCR法观察Tac1在各组织中的表达。构建Tac1/p GADT7、Tac1/p EGFP-N2重组质粒,将Tac1/p EGFP-N2转染至CHO和COS-1细胞,采用免疫荧光染色及Western印迹检测TAC1在细胞中的定位和蛋白表达。将Tac1/p GADT7与Spag6/p GBKT7进行酵母双杂交实验,提取酵母蛋白用Western印迹检测TAC1与SPAG6之间是否存在相互作用。结果:Tac1主要在睾丸、脑、心脏中表达。酶切和测序鉴定表明Tac1重组质粒构建成功,酶切鉴定片段390 bp。TAC1单独转染时,定位于CHO细胞的整个胞体,与SPAG6质粒共转染后,TAC1被募集至细胞微管中表达,用Western印迹检测到相对分子质量约为40 000的融合蛋白表达。与SPAG6的酵母双杂交实验显示TACl/SPAG6在缺少3种氨基酸(Leu、Trp、His)的培养板上有菌落生成,经Western印迹证实酵母融合蛋白中含有TAC1和SPAG6。结论:成功构建Tac1重组质粒,并利用该质粒证实了TAC1与SPAG6之间存在相互作用关系。; 闵洁李梦颖柳赟昊刘晙玭双超凡张玲张志兵; 关键词：细胞定位酵母双杂交雄性小鼠

重组小鼠Parkin共同调节基因在昆虫细胞系统中的表达: 2016年; 目的:构建小鼠Parkin co-regulated gene(Pacrg)/GFP-p Fast Bac1重组杆状病毒载体,并在Sf9昆虫细胞中表达。方法:PCR扩增小鼠全长Pacrg编码c DNA序列,通过TA克隆、连接等方法将该基因插入到携带e GFP的供体质粒p Fast Bac1中,获得重组载体rp FBac-Pacrg-GFP,然后转化到DH10Bac宿主菌中。筛选获得的重组杆状病毒载体r Bacmid-Pacrg-e GFP经脂质体转染至Sf9昆虫细胞中,荧光显微镜及Western印迹检测分析重组蛋白。结果:经测序及酶切鉴定显示构建的Pacrg/GFP-p Fast Bac1重组杆状病毒载体正确,Western印迹结果显示PACRG/e GFP融合蛋白在Sf9昆虫细胞中表达且携带绿色荧光。结论:成功构建了Pacrg/GFP-p Fast Bac1重组杆状病毒载体,且该重组蛋白在Sf9昆虫细胞中大量表达,为进一步研究PACRG蛋白的结构及其在精子发生中的调控作用奠定了基础。; 刘晙玭李洪涛李为刘红张玲闵洁周婷周磊张志兵; 关键词：杆状病毒载体昆虫细胞真核表达精子发生

精子相关抗原6(SPAG6)与TCTE3蛋白间相互作用探讨被引量：2: 2017年; 目的:探讨精子相关抗原6(sperm associated antigen 6,Spag6)和T复合体相关睾丸表达3(T-complex associated testis expressed 3,TCTE3)之间的相互作用。方法:PCR法观察Tcte3在雄性小鼠各组织中的表达;以小鼠睾丸c DNA为模板,扩增Tcte3序列,构建Tcte3/p GADT7、Tcte3/p EGFPN2重组质粒;以Tcte3/p EGFPN2转染CHO细胞和COS-1细胞,免疫荧光染色及Western blot检测TCTE3在细胞中的定位和表达;以Spag6/p GBKT7和Tcte3/p GADT7进行酵母双杂交实验,提取酵母蛋白后采用Western blot检测TCTE3与SPAG6之间是否存在直接的相互作用。结果:Tcte3在睾丸、脑、肝、肾、肺、脾、肌肉中均有表达;酶切和测序鉴定证实Tcte3/p GADT7和Tcte3/p EGFPN2重组质粒均构建成功;体外实验发现TCTE3主要在CHO和COS-1细胞质中表达,当与SPAG6质粒共转染后,TCTE3被募集至细胞微管中表达;酵母双杂交实验显示TCTE3/SPAG6组合后,在缺少SD/-Leu/-Trp/-His的培养板上有菌落生成,Western blot显示菌落中TCTE3、SPAG6蛋白表达显著,分子量正确。结论:精子相关抗原SPAG6与TCTE3之间存在直接的相互作用,SPAG6可募集TCTE3至细胞微管中表达。; 双超凡柳赟昊刘晙玭闵洁李梦颖桂媛黄金宇张玲张志兵; 关键词：男性不育酵母双杂交蛋白表达

Spag6L基因真核表达质粒的构建及细胞内的蛋白表达与定位被引量：1: 2016年; 目的:构建小鼠Spag6L基因真核表达质粒,并研究其在细胞内的表达与定位。方法:以小鼠睾丸cDNA基因文库为模版,PCR扩增Spag6L基因全长序列,测序正确后亚克隆至pEGFP-N2和pcDNA3真核表达载体中并酶切鉴定,将构建成功的重组表达质粒转染至COS-7与CHO细胞中,Western blot法检测COS-7细胞中SPAG6L蛋白表达,激光共聚焦扫描显微镜观察SPAG6L蛋白在CHO细胞内的定位。结果:重组质粒pEGFPSpag6L和pcDNA3-Spag6L经双酶切后产生的1.5kb的目的插入片段,经测序证实与Spag6L基因一致。GFPSPAG6L融合蛋白分子质量为82kU,SPAG6L蛋白分子质量为56kU。SPAG6L蛋白在CHO细胞中主要定位于细胞质,以微管和囊泡表达为主。结论:构建的pEGFP-Spag6L和pcDNA3-Spag6L真核表达质粒成功,为进一步探究Spag6L基因与Spag6基因的关系以及Spag6L基因在精子发生中的功能与作用奠定了基础。; 芦帷张玲石玉琴唐啸双超凡闵洁张志兵; 关键词：精子发生质粒构建细胞定位

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闵洁