阳佑天
- 作品数：12 被引量：17H指数：3
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- 相关领域：农业科学文化科学医药卫生经济管理更多>>
- NoV P颗粒嵌合PEDV S1 基因多表位抗原的制备
- 2024年
- 为制备诺如病毒(Norovirus,NoV)P颗粒嵌合猪流行性腹泻病毒(Porcine Epidemic Diarrhea Virus,PEDV)S1基因多表位的抗原.本研究通过设计合成PEDV S1多表位基因序列,酶切后连接到诺如病毒P基因重组pGEX-4T-1载体,将载体转化至大肠杆菌DH5α感受态细胞后,提取质粒进行双酶切验证和测序.将测序正确的重组质粒转化至BL21表达菌体,使用不同浓度异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(Isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside,IPTG)在不同诱导时间下进行原核表达,确定最佳诱导条件,并对重组蛋白进行可溶性分析.使用鼠源谷胱甘肽-S-转移酶(Glutathione-S-transferase,GST)单抗和PEDV阳性血清通过蛋白免疫印迹试验检测纯化后的重组蛋白.重组质粒NoV P-partical-PEDV-SE经双酶切鉴定获得大小约510 bp的目的基因条带,进一步测序结果证明重组质粒构建成功.诱导表达的重组蛋白分子质量约为79 ku,与预期大小一致.使用1.0 mmol/L IPTG在37℃条件下培养2 h作为最佳诱导条件,对超声破碎后的菌体进行检测,试验结果显示重组蛋白可在上清液中表达.鼠源GST单抗与PEDV阳性血清均能特异性地识别纯化后的重组蛋白,表明该重组蛋白具有良好的反应原性.本研究通过对NoV P-partical-PEDV-SE蛋白原核表达及纯化,成功获得大量纯度较高的重组蛋白,为进一步制备猪流行性腹泻多表位口服疫苗,实现对PEDV的有效预防奠定基础.
- 章程罗沛周德荣付新亮阳佑天黄运茂刘文俊
- 关键词：猪流行性腹泻病毒
- 一种检测禽流感病毒的RPA-LFD可视化试剂盒及其应用
- 本发明提供了一种检测禽流感病毒的RPA‑LFD可视化试剂盒及其应用。所述试剂盒包含引物组、LF Probe和核酸检测试纸条；所述引物组包含AIV上游引物、AIV下游引物和LF Probe三条引物。该RPA‑LFD可视化试...
- 阳佑天刘文俊邓汝森刘芳
- 文献传递
- 医学生就业指导课程教学探究被引量：4
- 2017年
- 文章阐述了医学生就业指导课程的意义,分析了当前医学生就业指导课程的现状,提出了其中存在的问题,并从创新观念、改进教学方式、完善教学内容、提高师资队伍四个方面探讨了改革医学生就业指导课程的对策。
- 阳佑天刘文俊
- 关键词：互联网医学生就业指导课程
- 动物A型流感病毒RPA-LFD可视化检测方法的建立被引量：4
- 2019年
- 为建立动物A型流感病毒(IV)的重组酶聚合酶扩增-侧流层析试纸条(RPA-LFD)检测方法,本研究针对A型IV基质蛋白(M)基因保守序列设计了引物和探针,通过反应条件优化,建立了RPA-LFD检测方法。特异性试验结果显示,该方法检测动物A型IV呈阳性,与新城疫病毒、鸭坦布苏病毒、鸭肝炎病毒、小鹅瘟病毒等无交叉反应,特异性强;反应时间短、敏感性高,可以在35℃,20 min内检测到最低浓度为10拷贝/μL的重组质粒标准品。利用该方法对从化某活禽市场分离的鸭咽拭子样品共50份进行检测,结果3份为阳性,其余均为阴性,与PCR及病毒分离结果一致,准确性高。本研究首次建立了检测动物A型IV的可视化RPA-LFD检测方法,该方法不依赖任何仪器设备,操作简单、快速,可为基层实验室临床快速检测和流行病学研究提供帮助。
- 刘文俊阳佑天易华东邓汝森杨培洁付新亮黄运茂田允波
- 关键词：A型流感病毒
- 鹅新城疫病毒RT-LAMP可视化检测方法的建立被引量：6
- 2018年
- 本研究拟建立一种能在基层实时、便捷诊断鹅新城疫病毒(goose Newcastle disease virus,GNDV)的检测方法。根据GenBank中公布的GNDVF基因的高度同源保守序列设计特异性引物,并在反应体系中添加钙黄绿素/氯化锰指示剂,建立可视化RT-LAMP检测方法。结果显示,建立的方法能特异地检测出GNDV及NDV Lasota疫苗株,而小鹅瘟病毒(GPV)、禽流感病毒(AIV)、鸭坦布苏病毒(DTMUV)等其他病毒均为阴性。所建立的GNDV可视化RT-LAMP检测方法对RNA的最低检测限为10pg,反应过程不需PCR仪等复杂的仪器,50min即可完成反应,可经肉眼观察反应体系颜色判定结果。该方法特异性强、灵敏度高,且操作安全、简便、快捷,可满足基层筛查GNDV的需求。
- 刘文俊黄运茂阳佑天许丹宁曹楠周德荣田允波
- 关键词：钙黄绿素
- 鸭干扰素因子7基因克隆及组织表达特异性分析
- 2023年
- 【目的】构建樱桃谷鸭干扰素调节因子7(interferon regulatory factor 7,IRF7)基因CDS区序列的真核表达载体,分析IRF7蛋白结构和生物特性,检测不同组织内IRF 7基因的表达水平,为进一步对鸭天然免疫系统开展研究奠定基础。【方法】利用RT-PCR扩增樱桃谷鸭IRF 7基因的CDS区,构建真核表达质粒,利用Western blotting检测蛋白表达。使用荧光显微镜观察Poly(I∶C)对IRF7蛋白核移位的影响。对IRF 7基因序列进行核苷酸相似性比对,构建系统进化树,并通过生物信息学方法在线分析预测IRF7蛋白的分子和结构特征。实时荧光定量PCR检测不同组织中IRF 7基因的表达特异性。【结果】成功克隆樱桃谷鸭IRF 7基因CDS区,长1536 bp,共编码512个氨基酸,通过对重组质粒的真核表达,提取细胞总蛋白,Western blotting检测蛋白表达,结果显示重组蛋白大小约为110 ku。Poly(I∶C)处理鸭胚成纤维细胞促使pCMV-C-EGFP-IRF7的核内定位增加。核苷酸相似性结果显示,樱桃谷鸭与绿头鸭和鸡的IRF 7基因核苷酸序列相似性分别为99.1%和80.8%,与非洲爪蛙的相似性仅为41.8%。系统进化树结果显示,樱桃谷鸭与绿头鸭和鸡亲缘关系最近,与非洲爪蛙亲缘关系最远。IRF7蛋白表现为结构不稳定的疏水性蛋白,主要由α-螺旋、β-折叠和无规则卷曲构成。IRF 7基因在各个组织内均有表达,在胆囊中表达量最高,在肺脏中表达量最低。【结论】樱桃谷鸭IRF 7基因的CDS区序列大小为1536 bp,编码512个氨基酸,IRF7蛋白为结构不稳定的疏水性蛋白,Poly(I∶C)刺激可引起IRF7发生核移位,该基因在不同组织表达差异较大。
- 邓志超章程罗沛詹晓芝江丹莉阳佑天阳佑天
- 关键词：蛋白结构亚细胞定位
- 一种检测禽流感病毒的RPA-LFD可视化试剂盒及其应用
- 本发明提供了一种检测禽流感病毒的RPA‑LFD可视化试剂盒及其应用。所述试剂盒包含引物组、LF Probe和核酸检测试纸条；所述引物组包含AIV上游引物、AIV下游引物和LF Probe三条引物。该RPA‑LFD可视化试...
- 阳佑天刘文俊邓汝森刘芳
- 鹅Caspase-1基因的克隆与序列分析被引量：1
- 2017年
- 为系统了解鹅炎症系统,用Trizol法提取马岗鹅脾脏总RNA,采用兼并引物RT-PCR方法克隆了马岗鹅Caspase-1基因并进行了系统的生物信息学分析。测序结果显示,go-Caspase-1基因完整ORF区长813 bp,编码270个氨基酸(Gen Bank序列号为MG463109)。同源性分析显示,go-Caspase-1基因序列与鸭、鸡等禽类的同源性较高,与其他物种的差异较大。蛋白质功能结构域分析显示,不同物种间Caspase-1蛋白的Caspase结构域高度相似。蛋白三维结构预测比较显示,go-Caspase-1蛋白空间结构与鸡和人的Caspase-1主体结构相似。
- 刘文俊邱金辉阳佑天黄运茂许丹宁田允波
- 关键词：半胱氨酸蛋白酶-1基因克隆同源性分析分子进化
- 浅谈提高动物生物化学教学效果的探索被引量：1
- 2017年
- 本文介绍了在仲恺农业工程学院动物生物化学教学过程中,就提高课程教学效果进行的改革探索。包括课程的学习内容、教学方法、教学手段、考核办法的改革。探讨如何构建学生的知识网络体系、提高学生学习的兴趣和自主性、在理解的基础上增强学生的记忆并灵活运用。
- 刘文俊阳佑天黄运茂田允波许丹宁曹楠
- 关键词：动物生物化学教学改革教学效果
