高琳琳
- 作品数：3 被引量：4H指数：1
- 供职机构：华中科技大学同济医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 利用杆状病毒表达载体系统表达重组乙型肝炎病毒核心蛋白被引量：3
- 2007年
- 目的利用杆状病毒表达载体系统制备重组乙型肝炎病毒核心蛋白。方法构建含有HBV C基因的杆状病毒转移载体pFastBac Dual-HBV core,转化大肠埃希菌DH10Bac进行转座,提取重组Bacmid DNA转染昆虫细胞Sf9,获得含有HBV C基因的重组杆状病毒。用重组杆状病毒感染Sf9细胞进行乙型肝炎病毒核心蛋白表达,然后通过SDS-PAGE电泳和Western blot分析表达情况。结果成功构建了含HBV C基因的重组杆状病毒,而且在昆虫细胞Sf9中表达了乙型肝炎病毒核心蛋白。结论利用Bac to Bac杆状病毒表达系统,成功地表达了乙型肝炎病毒核心蛋白,为进一步研究奠定了基础。
- 高琳琳王晓燕张颖慧李岩邓菲张艳芳林菊生
- 关键词：昆虫细胞
- 乙型肝炎病毒多聚酶基因在重组杆状病毒系统中的表达被引量：1
- 2007年
- 目的利用杆状病毒-昆虫细胞表达系统制备乙型肝炎病毒多聚酶重组蛋白。方法构建含有乙型肝炎病毒多聚酶基因的杆状病毒转移载体pFastbac Dual-polymerase,转化大肠杆菌DH10Bac进行转座,提取重组Bacmid转染昆虫细胞获得含有HBVpol基因的重组杆状病毒。用重组杆状病毒感染昆虫细胞进行蛋白表达,用SDS-PAGE电泳分析表达情况。结果将所得Bacmid行PCR鉴定,结果表明成功构建了的含乙型肝炎病毒多聚酶基因的重组杆状病毒,SDS-PAGE分析表明该病毒能在昆虫细胞中高效表达重组的多聚酶蛋白。结论利用杆状病毒表达系统,构建的重组杆状病毒在昆虫细胞中高效表达乙型肝炎病毒多聚酶,为进一步的乙型肝炎病毒多聚酶的体外功能研究奠定了基础。
- 王晓燕高琳琳邓菲张艳芳林菊生
- 关键词：乙型肝炎病毒多聚酶杆状病毒昆虫细胞
- DNA聚合酶γ的提取、纯化和鉴定
- 2007年
- 目的:提取并纯化人宫颈癌细胞(HeLa)的线粒体DNA聚合酶γ(DNA polymeraseγ,Polγ),鉴定其纯度和活性.方法:运用离子交换层析等方法提取纯化HeLa细胞的线粒体Polγ,并用Bradford法检测蛋白浓度.经SDS-PAGE检测蛋白纯度和相对分子量,Western blotting验证蛋白.用α-^(32)P- dTTP掺入法,液体闪烁计数器进行放射性测量以确定Polγ的活性.结果:成功提取并纯化HeLa细胞的线粒体Polγ,经SDS-PAGE鉴定,有一个大约140 kDa的亚基单位,Western blotting证实为Polγ.对其进行150倍纯化,收得率为6%,酶的总活力为4.81 U,比活力为36.17 U/mg.结论:HeLa细胞的线粒体Polγ通过离子交换层析法提取和纯化后活性较高,可用于体外药物线粒体毒性的检测.
- 张颖慧林菊生李岩高琳琳王晓燕
- 关键词：人宫颈癌细胞线粒体离子交换层析
