杨艳
- 作品数：12 被引量：33H指数：4
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- 三种结缔组织体外诱导胎儿骨髓间充质干细胞的分化被引量：2
- 2008年
- 目的比较胎儿肠黏膜下层、肠系膜与羊膜的结缔组织体外诱导胎儿骨髓间充质干细胞(BMSCs)分化为上皮细胞作用的差异及其可能机制。方法制备去上皮的3种结缔组织块,检测其中有无EGF和IGF-1表达。将4,6-联脒-2联苯基吲哚(DAPI)标记的P3-BMSCs滴加于3种结缔组织上培养,设结缔组织诱导组、结缔组织与表皮生长因子(EGF)和胰岛素样生长因子-1(IGF-1)联合组、EGF、IGF-1诱导对照组。于培养第8、10和12d收集组织块,比较各组诱导BMSCs向上皮细胞分化的差异。结果经3种结缔组织和生长因子诱导后的BMSCs均表达CK和EMA;联合诱导组作用强于单用结缔组织组(P<0.05);3种结缔组织中以羊膜的作用最强(P<0.05)。3种组织均表达EGF,肠黏膜下层及肠系膜还表达IGF-1。结论胎儿肠黏膜下层、肠系膜与羊膜的结缔组织以及EGF、IGF-1在体外均有诱导BMSCs分化为上皮的作用;EGF和IGF-1可协同增强3种结缔组织的诱导作用;结缔组织中的EGF或IGF-1可能是其诱导作用的内源性因素。
- 杨艳段征姜蓉汪维伟
- 关键词：胎儿结缔组织骨髓间充质干细胞分化
- 未知功能基因JAZF1过表达对3T3-L1脂肪细胞糖脂代谢的影响被引量：1
- 2010年
- 目的 观察JAZF1基因（Juxtaposed with another zincfinger gene 1）过表达对3T3-L1脂肪细胞糖脂代谢相关基因的影响.方法 采用实时荧光定量PCR（RT-QPCR）法检测JAZF1 mRNA在健康C57BL/6J小鼠多种组织表达分布情况;构建JAZF1真核表达载体并瞬时转染3T3-L1细胞,RT-QPCR法检测JAZF1、糖脂代谢相关基因mRNA的表达;用Western印迹法测定各组细胞JAZF1蛋白水平;油红O染色比色法检测细胞内脂质积聚的变化.结果 转染48 h后,JAZF1转染组脂肪细胞中,JAZF1 mRNA及蛋白表达明显高于阴性对照和空载组,激素敏感脂肪酶（HSL）mRNA表达水平明显增加（P〈0.05）,脂肪酸合成酶（FAS）、乙酰辅酶A羧化酶（ACC）、类固醇调节元件结合蛋白1（SREBP1）mRNA相对表达量明显降低（均P〈0.01）,脂肪细胞甘油三酯酶（ATGL）、葡萄糖转运子1（GLUT1）、GLUT4 mRNA表达并无明显改变;油红O染色显示JAZF1转染组细胞内脂质积聚明显降低（P〈0.05）.结论 JAZFl在C57BL/6J小鼠多种组织均有表达,提示其可能在维持正常生理功能中起着一定作用.3T3-L1细胞过表达JAZF1可减少脂质合成、增加脂解,并可明显改善脂质积聚,可能是肥胖和糖尿病治疗的一个潜在靶点.
- 杨艳李伶杨刚毅孙滨卢春敏苗宗玉
- 关键词：3T3-L1细胞糖代谢脂代谢
- 高脂喂养apoE^-/-小鼠组织成纤维细胞生长因子21及其受体的改变被引量：2
- 2010年
- 目的探讨在环境和遗传因素共同诱导的胰岛素抵抗状态下组织成纤维细胞生长因子21（FGF-21）及其受体（FGFR）的变化。方法雄性apoE^-/-小鼠，随机分为普通喂养组（NF组，n=20）和高脂喂养组（HF组，n=20），喂养16周。以3-[^3H]-葡萄糖为示踪剂的扩展胰岛素钳夹技术评价小鼠胰岛素敏感性和糖代谢变化。用实时荧光定量PCR法检测肝脏和脂肪组织FGF-21、FGFR1、FGFR2、FGFR3和FGFR4以及B—klothomRNA表达，用Western印迹法测定血浆和组织FGF-21蛋白水平。结果HF组小鼠空腹血糖、血浆胰岛素、甘油三酯、游离脂肪酸和胆固醇水平明显升高（均P〈0．01）。在钳夹稳态时，HF组血浆胰岛素水平明显高于NF组（P〈0．01），HF组葡萄糖输注率（GIR）明显低于NF组（P〈0．01）。在钳夹结束时，HF组葡萄糖清除率（GRd）明显低于NF组（P〈0．01）。钳夹稳态期，NF和HF组肝糖输出率（HGP）分别被抑制约70％和51％（均P〈0．01）。HF组肝和脂肪组织FGF-21和B—klothomRNA水平均明显高于NF组（均P〈0．01）。HF组肝和脂肪组织FGFR1和FGFR3mRNA的表达明显较NF组显著增高（P〈0．01和P〈0．05）。FGFR4mRNA水平在HF组肝组织中的表达明显高于NF组（P〈0．05）。HF组血浆FGF-21蛋白水平明显高于NF组（P〈0．01），肝和脂肪组织FGF-21蛋白水平也显著升高（均P〈0．05）。结论高脂喂养apoE^-/-小鼠FGF-21、β-klotho及FGFR1和FGFR3水平显著升高，它们可能是FGF-21调节糖脂代谢的主要作用靶点。
- 孙滨杨刚毅李伶程玉兰李钶杨艳卢春敏苗宗玉
- 关键词：成纤维细胞生长因子21成纤维细胞生长因子受体高脂喂养胰岛素抵抗
- 血浆脂肪甘油三酯脂酶水平与肥胖、胰岛素抵抗相关因素的关系研究被引量：9
- 2010年
- 目的探讨初诊2型糖尿病(T2DM)伴肥胖患者血浆脂肪甘油三酯脂酶(ATGL)水平变化及其与体重指数(BMI)、腰臀比(WHR)、血脂、血糖、血浆胰岛素水平等的关系。方法纳入T2DM患者及健康体检者共161例,分为4组:初诊T2DM患者(T2DM)组、初诊T2DM伴肥胖患者(T2DM-ob)组、正常糖耐量伴肥胖者(NGT-ob)组和正常对照(NGT)组。再根据胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)中位数将上述161例患者分为胰岛素抵抗(IR)组及胰岛素敏感(IS)组。采用酶联免疫法(ELISA)测定上述受试者血浆ATGL水平,并分析其与BMI、WHR、血脂、血糖、血浆胰岛素、HOMA-IR等的关系。结果 4组间血浆ATGL水平差异均无统计学意义,但4组中T2DM-ob组、T2DM组ATGL浓度分别与NGT-ob组、NGT组比较有降低的趋势。IR组ATGL水平(61.7±21.6μg/L)明显低于IS组(75.3±22.9μg/L,P<0.01)。血浆ATGL水平与高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)呈明显正相关(r=0.229,P<0.01),而与空腹胰岛素(FINS)、HOMA-IR呈明显负相关(r=-0.199,P<0.05;r=-0.234,P<0.01)。多元回归分析结果表明,HDL-C、BMI、体内脂肪百分比(FAT%)均为影响血浆ATGL水平的独立相关因素。结论血浆ATGL水平的改变与肥胖相关因素和IR等有关,并可能参与了肥胖、IR和T2DM的发生和发展。
- 刘颖李伶杨刚毅王毅陈文雯董靖李仁哲杨艳
- 关键词：脂肪甘油三酯脂酶肥胖症胰岛素抗药性
- 肺癌肿瘤抑制因子1基因过表达对肝细胞糖脂代谢相关基因表达的影响被引量：1
- 2011年
- 探讨肺癌肿瘤抑制因子1（TSLCI）基因表达上调对小鼠肝癌细胞Hepal-6糖脂代尉相关基因mRNA表达的影响；结果显示，TSLC1基因过表达降低脂代谢基因脂肪酸合成酶（FAS）、乙酰辅酶A羧化酶（ACC）的表达（P〈0．05或P〈0．01），增加脂肪组织甘油三酯水解酶（ATGL）的表达（P〈0．05），对激素敏感脂肪酶（HSL）、葡萄糖转运蛋白（GLUT）1和GLUT4的表达无显著影响，提示TSLC1过表达可能抑制肝细胞的脂肪生成，促进脂肪分解。
- 杜林杨刚毅李伶杨艳卢春敏苗宗玉
- 关键词：糖脂代谢基因表达
- 未知功能基因JAZF1过表达对脂肪细胞、肝细胞糖脂代谢的影响
- 第一部分小鼠JAZF1基因真核表达载体的构建及鉴定
目的:构建小鼠JAZF1真核表达载体/(pIRES2-EGFP-JAZF1/)。
方法:采用RT-PCR方法,从小鼠组织获得JAZF1 cDNA...
- 杨艳
- 关键词：基因真核表达载体基因3T3-L1前脂肪细胞实时荧光定量PCR3T3-L1细胞实时荧光定量PCR
- 文献传递
- 人NIRF蛋白与HBV核心蛋白相互作用的初步研究被引量：5
- 2011年
- 人NIRF蛋白在细胞内是否能与HBV核心蛋白发生相互结合,目前尚不清楚.构建pcDNA3-HBC质粒,采用基因共转染和共表达技术,在真核细胞内进行NIRF与HBc的免疫荧光共定位实验,并通过免疫共沉淀实验进一步验证两种蛋白是否发生相互结合.结果表明在细胞内,NIRF能与HBc发生相互结合.
- 金芳敏钱冠华杨艳段昌柱
- 关键词：HBC免疫荧光免疫共沉淀
- UHRF2结构域突变体的原核表达与纯化
- 2012年
- 目的构建UHRF2各个以结构域为基础的突变体原核表达载体，在大肠埃希菌中表达并对融合蛋白进行纯化和鉴定。方法以pCMV-3xFlag—UHRF2为模板，PCR扩增UHRF2的各个结构域基因片段，各PCR产物经酶切后连接到pGEX-4T-1载体上；将重组载体转化大肠埃希菌（BL21菌株），IPTG诱导表达各GST融合蛋白，超声波破碎细菌，离心收获蛋白并经谷胱甘肽琼脂糖凝胶4B（glutathione sepharose 4B）亲合纯化；纯化的蛋白经SDS-PAGE电泳后用考马斯亮蓝染色或免疫印记实验鉴定各蛋白表达情况。结果成功构建了UHRF2结构域突变体的原核表达载体，各突变体蛋白表达正确。结论UHRF2各结构域突变体的成功构建便于用GST pull—down实验研究UHRF2参与与其它蛋白相互作用的结构域，为了解UHRF2功能打下了基础。
- 白露胡斌杨艳段昌柱
- 关键词：GST融合蛋白表观遗传学
- 内脂素对改善胰岛素抵抗及相关基因的作用被引量：8
- 2009年
- 目的探讨内脂素(visfatin)基因过表达对高脂诱导的胰岛素抵抗(IR)大鼠胰岛素敏感性及其信号系统的影响。方法构建大鼠内脂素基因重组真核表达质粒pcDNA3.1(+)-visfatin。20只雄性SD大鼠分为3组。对照组(NC组,n=5):注射0.3mg空载体pcDNA3.1(+),普通饲料组(NT组,n=7)和高脂组(HT,n=8)大鼠注射0.3mg重组质粒pcDNA3.1(+)-visfatin。在实验前(基础值)、第1次钳夹后即刻、质粒处理后3d和第2次钳夹后即刻,分别自各组大鼠颈静脉取血,分离血浆,采用Westernbloting测定血浆内脂素蛋白表达。在转染前和转染后3d采用两次高胰岛素-正葡萄糖钳夹技术评价大鼠胰岛素敏感性的变化,并测定大鼠空腹血浆胰岛素(FIns)、血糖(BG)、血浆游离脂肪酸(FFA)、甘油三酯(TG)、胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)以及葡萄糖输注率(GIR)等指标。采用斑点印迹法检测胰岛素受体底物-1(IRS-1)酪氨酸磷酸化,采用RT-PCR法测定过氧化物酶体增生激活受体γ(PPARγ)mRNA表达水平的变化。结果内脂素质粒注射3d后及第2次钳夹术后,NT和HT组血浆内脂素水平较注射前均升高(P<0.01)。质粒注射后3d,NT、HT组大鼠TC和HDL-C均较注射前明显降低(P<0.05)。钳夹术中,NT和HT组大鼠GIR较注射前明显升高(P<0.01)。NT和HT组大鼠肝脏和肌肉组织中IRS-1酪氨酸磷酸化水平和肝脏中PPARγmRNA水平也较NC组均明显升高(P<0.05和P<0.01)。NT组脂肪组织中PPARγmRNA水平较NC组明显增高(P<0.01)。结论内脂素可能通过上调PPARγmRNA水平和IRS-1酪氨酸磷酸化水平使机体胰岛素敏感性增加。
- 杨艳杨刚毅李伶张凌苗宗玉卢春敏
- 关键词：PPARΓ高胰岛素-正葡萄糖钳夹技术
- 表皮生长因子、胰岛素样生长因子-1体外诱导胎儿骨髓间充质干细胞分化被引量：5
- 2008年
- 目的:研究表皮生长因子(EGF)和胰岛素样生长因子-1(IGF-1)体外诱导胎儿骨髓间充质干细胞(BMSCs)向上皮细胞的分化,及其对种植于羊膜上BMSCs的影响。方法:不同浓度EGF、IGF-1体外诱导第3代BMSCs培养7 d后,检测各组细胞角蛋白(CK)及上皮膜抗原(EMA)的阳性细胞率。检测去上皮羊膜有无EGF或IGF-1表达情况;观察生长因子对种植于羊膜上BMSCs的分化影响。结果:EGF 30 ng/ml或IGF-1 50 ng/ml组的CK及EMA阳性细胞率高于其余剂量组;两因子联合诱导组的CK及EMA阳性细胞率均高于各单因子组;30 ng/ml EGF和50 ng/ml IGF-1联合组的阳性细胞率最高;去上皮羊膜表达EGF,不表达IGF-1;BMSCs在羊膜上生长不受外源性生长因子影响。结论:EGF和IGF-1在体外均有诱导BMSCs向上皮细胞分化的作用;以30 ng/ml EGF和50 ng/ml IGF-1联合组的协同作用最强;种植于羊膜上的BMSCs可生长为复层上皮结构,羊膜中的EGF可能是其诱导作用的内源性因素。
- 杨艳段征姜蓉汪维伟
- 关键词：羊膜分化
