张利
- 作品数：25 被引量：88H指数：6
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- 微小RNA-23靶向线粒体分裂蛋白1调控炎症反应和氧化应激保护脓毒症肾小管上皮细胞损伤
- 2024年
- 目的探讨微小RNA-23(microRNA-23,miR-23)和线粒体分裂蛋白1(fission protein 1,FIS1)在脓毒症肾小管上皮细胞中的作用关系以及miR-23靶向FIS1对细胞炎症反应和氧化应激的调控。方法体外培养人肾小管上皮细胞(human kidney-2,HK-2),用脂多糖(lipopolysaccha-ride,LPS)诱导建立脓毒症模型;利用双荧光素酶报告基因验证miR-23和FIS1的相互作用。将HK-2细胞采用随机数字表法随机分组,用miR-23的模拟物/抑制物和FIS1的真核表达载体/小干扰RNA单独或联合处理,细胞计数试剂检测细胞增殖,流式细胞技术检测细胞凋亡和活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平、丙二醛(malondialdehyde,MDA)试剂盒检测细胞MDA水平,酶联免疫吸附试验检测肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素(interleukin,IL)1β、IL-6和IL-10水平。结果LPS诱导的HK-2细胞miR-23 mRNA表达量为对照组的(0.60±0.12)倍(P<0.05),FIS1 mRNA表达量为对照组的(2.16±0.21)倍(P<0.05),FISI蛋白表达水平是对照组的(2.69±0.28)倍(P<0.05)。miR-23可以与FIS1的3'-UTR区形成互补结合,负向调控FIS1。miR-23 mimic组的TNF-α、IL-1、IL-6分别为(0.021±0.003)、(0.0310±0.007)和(0.017±0.006)ng/ml,FIS1 siRNA组的TNF-α、IL-1、IL-6分别为(0.015±0.004)、(0.043±0.007)和(0.020±0.008)ng/ml,均低于空白对照组(P<0.05),两组的IL-10分别为(0.325±0.011)和(0.376±0.018)ng/ml,高于空白对照组(P<0.05)。miR-23 inhibitor组的TNF-α和IL-6分别为(0.117±0.015)和(0.096±0.007)ng/ml,pcD-NA3.1-FIS1组TNF-α和IL-6分别为(0.168±0.024)和(0.147±0.030)ng/ml,均高于空白对照组(P均<0.05),miR-23 inhibitor组和pcDNA3.1-FIS1组的IL-10分别为(0.149±0.012)和(0.121±0.024)ng/ml,均低于空白对照组(P<0.05)。miR-23 mimic+pcDNA3.1-FIS1组TNF-α、IL-1、IL-6分别为(0.060±0.010)、(0.084±0.009)和(0.048±0.008)ng/ml,均高于miR-23 mimic组的(0.021±0.003)、(0.0310±0.007)和(0.017±0.006)ng/ml(P<0.05),IL-10为(0.149±0.025)ng/ml,低于miR-2
- 张利张利葛亮马菁菁张阳孙林春
- 关键词：脓毒症肾小管上皮炎症微小RNA
- 细胞壁锚定蛋白SasX调控RNAⅢ参与金黄色葡萄球菌ST239克隆生物膜形成及致病性相关研究
- 2023年
- 目的探讨金黄色葡萄球菌(SA)细胞壁锚定蛋白SasX对RNAⅢ转录表达的调控,揭示其对SA的生物膜(BF)形成和致病过程的作用。方法收集2022年4~6月南京医科大学附属儿童医院住院患儿临床样本中分离的SA ST239克隆,采用基因敲除和回补技术建立突变株△SasX和回补株△SasX(pRB473-SasX),经RNAⅢ抑制肽(RIP)处理,再采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测SasX基因对RNAⅢ转录水平的影响,绘制增殖曲线观察菌株生长速度,镜下观察菌株聚集能力,半定量实验观察BF形成,并采用qPCR验证BF形成相关基因表达。结果△SasX株的RNAⅢ水平显著低于野生株(t=4.273、P=0.037)。△SasX株BF形成能力较野生株显著减弱(t=4.619、P=0.032),△SasX(pRB473-SasX)+RIP株BF形成能力显著低于△SasX(pRB473-SasX)株(t=7.874、P=0.011)。△SasX株icaA(t=5.324、P=0.027)、sarA(t=6.250、P=0.016)和fnbA(t=4.833、P=0.031)mRNA水平显著低于野生株;△SasX(pRB473-SasX)+RIP株icaA(t=4.386、P=0.034)和sarA(t=5.531、P=0.023)mRNA水平较△SasX(pRB473-SasX)株显著降低。镜下可见野生株有大片聚集成团,△SasX株多为单个散在分布或小范围聚集,△SasX株的聚集能力较野生株显著减弱;△SasX(pRB473-SasX)株的聚集能力和野生株相当,△SasX(pRB473-SasX)+RIP株的聚集能力较△SasX(pRB473-SasX)株减弱。结论SA SasX通过调控RNAⅢ的转录表达,促进细菌的聚集和BF形成能力,从而参与其致病过程。
- 张利张利张阳喻哲昊葛亮葛亮
- 关键词：金黄色葡萄球菌群体感应系统生物膜
- 儿童腹泻病原学检测及流行病学分析被引量：4
- 2015年
- 目的 了解南京及周边地区儿童腹泻病的病原学分布、对抗生素耐药情况及流行病学情况.方法 选择2012年1月至2014年12月我院就诊的2 847例腹泻患儿,取粪便进行培养,分离并鉴定病原菌,用纸片扩散法进行药敏试验,采用胶体金法检测轮状病毒抗原,对患者的流行病学资料汇总分析.结果 腹泻患儿粪便中病原菌的检出率为58.00％(1 672/2 847),排名前5位的病原菌依次为轮状病毒894例(53.47％),志贺菌属471例(20.04％)、沙门菌属139例(16.21％)、大肠埃希菌属68例(4.07％)、弧菌属49例(2.93％).病原菌对抗生素的耐药情况复杂,且耐药率呈上升趋势.随着年龄增长,轮状病毒引起腹泻所占比例逐渐降低,细菌性腹泻发生比例逐渐增高.腹泻病在6-10月份高发,1-5月份和11、12月份发病率较低.结论 腹泻病的发生有季节性,轮状病毒和革兰阴性菌是儿童感染性腹泻的主要病原菌.不同年龄段病原体种类和所占比例不同;临床上应根据药敏试验结果合理使用抗生素,避免过度滥用造成耐药情况加重.
- 张利孙林春
- 关键词：儿童腹泻病原菌药敏试验流行病学
- 手足口病患儿外周血T淋巴细胞亚群在病程中的变化及临床意义被引量：3
- 2013年
- 目的 观察386例手足口病（HFMD）患儿外周血T淋巴细胞亚群数量在整个病程中的变化，探讨其临床意义。方法用流式细胞仪对386例手足口病患儿（手足口病组）和78名健康儿童（健康对照组）外周血T淋巴细胞亚群进行检测。386例手足口病患儿按病情轻重程度分，325例为普通型（普通型手足口病组），61例为重症型（重型手足口病组）；按病程的不同阶段分，264例为发病期（发病期手足1：3病组），122例为恢复期（恢复期手足口病组）。统计分析手足V：I病患儿与健康儿童，普通型与重症型手足口病患儿，恢复期与发病期手足口病患儿外周血T淋巴细胞亚群数量的差异。结果手足口病组外周血CD3＋、CD4＋、CD8＋细胞相对计数和CD4＋／CD8＋比值依次为（47．4±10．6）％、（24．0±8．0）％、（23．2±7．4）％和1．0±0．5，与健康对照组各项指标[（68．4±7．5）％、（38．2±6．9）％、（18．8±4．6）％和2．0±0．4]比较差异均有统计学意义（￡值分别为3．16、4．62、2．23、2．51，P均〈0．05）；普通型手足口病组外周血CD3＋、CD4＋、CD8＋细胞相对计数和CD4＋／CD8’比值分别为[（53．0±9．8）％、（26．5±7．9）％、（20．4±7．5）％和1．3-t-0．6，与重型手足口病组各项指标[（42．3±10．9）％、（18．7±4．7）％、（24．2±7．4）％和0．7±0．4]比较差异均有统计学意义（t值分别为2．25、2．47、1．91、2．32，P均〈0．05）；发病期手足口病组外周血CD3＋、CD4＋细胞相对计数和CD4’／CD8’比值分别为（45．3±10．5）％、（21．6±8．4）％和0．9±0．5，与恢复期手足口病组[（54．7±9．9）％、（27．5±9．1）％和1．4±0．6]比较差异均有统计学意义（t值分别为2．41、1．87、2．92，P均〈0．05）。结论手足口病患儿的细胞免疫受损，T淋巴细胞功能处于抑制状态，且抑�
- 孙林春张兰芳张利胡正
- 关键词：手足口病T淋巴细胞亚群流式细胞仪
- Caspase依赖的氧化应激对脓毒症肾小管上皮细胞损伤的作用及机制被引量：4
- 2022年
- 目的:观察不同活性氧(reactive oxygen species,ROS)及氧化应激水平对脓毒症肾小管上皮细胞增殖、凋亡、周期等生物学效应的影响,探索氧化应激水平和线粒体-Caspase途径能否作为脓毒症肾小管上皮损伤的治疗靶点。方法:用终浓度为10μg/mL的脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)处理人肾小管上皮HK-2细胞12 h建立脓毒症细胞模型,将细胞模型随机分为H_(2)O_(2)组(H_(2)O_(2),300μmol/L)、Caspase抑制剂组(Ac-DEVD-CHO,15μmol/L)、Caspase抑制剂+H_(2)O_(2)组(H_(2)O_(2),300μmol/L+Ac-DEVDCHO,15μmol/L)和阴性对照组(不处理);另以正常培养的HK-2细胞为空白对照组。Western blot检测Cleaved-Caspase 3和Cleaved-多聚ADP核糖多聚酶(poly ADP-ribose polymerase,PARP)蛋白表达,MTT检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞ROS水平、细胞凋亡和细胞周期。结果:阴性对照组细胞ROS水平、凋亡率、凋亡相关蛋白Cleaved-Caspase 3和Cleaved-PARP水平以及G1期细胞比例均较空白对照组升高(P均<0.05),增殖率较空白对照组降低(P<0.05)。H_(2)O_(2)组细胞ROS水平、凋亡率、Cleaved-Caspase 3和Cleaved-PARP水平以及G1期细胞比例均较阴性对照组升高(P均<0.05),而增殖率较阴性对照组降低(P<0.05)。Caspase抑制剂+H_(2)O_(2)组细胞ROS水平、凋亡率、Cleaved-Caspase 3和Cleaved-PARP水平以及G1期细胞比例均较H_(2)O_(2)组降低(P均<0.05),但均高于阴性对照组(P均<0.05));增殖率较H_(2)O_(2)组升高(P<0.05),但仍低于阴性对照组(P<0.05)。结论:脓毒症细胞模型中存在异常升高的氧化应激反应。ROS能通过线粒体-Caspase凋亡途径抑制脓毒症肾小管上皮细胞增殖,促进细胞凋亡和引起细胞周期G1期阻滞。抑制Caspase对ROS引起的脓毒症肾小管上皮细胞损伤有一定保护作用。
- 孙林春刘建璟刘建璟
- 关键词：脓毒症肾损伤氧化应激线粒体凋亡
- 核糖体蛋白S29与人肝癌细胞Bel-7402耐5-氟尿嘧啶的关系
- 2016年
- 目的探讨核糖体蛋白S29(RPS29)与人肝癌细胞Bel-7402耐5-氟尿嘧啶(5-FU)的关系。方法采用大剂量冲击法和逐渐增加剂量法构建人肝癌Bel-7402/5-FU耐药细胞系;用荧光定量PCR和Western blot检测RPS29基因和蛋白在敏感和耐药细胞中的表达;用siRNA干涉耐药细胞的RPS29,CCK-8法检测细胞存活率变化。用肝癌Hep G2/5-FU耐药细胞株验证阻断RPS29表达与5-FU耐药的关系。结果 Bel-7402/5-FU耐药细胞对5-FU的IC50为62μmol/L,耐药指数为22.7。RPS29基因和蛋白在耐药细胞中高表达,分别为敏感细胞的(2.21±0.19)倍和(1.79±0.28)倍(P<0.01)。干涉RPS29后,耐药细胞在一系列浓度梯度的5-FU作用下存活率分别比对照组下降(15.1±6.5)%、(24.3±4.2)%、(19.2±5.1)%、(16.3±6.8)%(P<0.05)。干涉RPS29表达后,肝癌Hep G2/5-FU耐药细胞株在一系列浓度梯度的5-FU作用下存活率分别比对照组下降(8.4±1.2)%、(13.0±2.3)%、(17.1±3.1)%和(12.2±1.5)%(P<0.05)。结论 RPS29基因和蛋白均在Bel-7402/5-FU耐药细胞高表达;低表达RPS29可提高Bel-7402/5-FU耐药细胞对5-FU的敏感性。低表达RPS29可提高Hep G2/5-FU耐药细胞对5-FU的敏感性。RPS29与肝癌细胞对5-FU的耐药性有关。
- 孙林春张利张兰芳
- 关键词：BEL-7402肿瘤耐药5-氟尿嘧啶
- 陈皮多甲氧基黄酮类成分对人乳腺癌MCF-7、肝癌HepG2细胞株增殖抑制作用及其敏感性比较被引量：5
- 2007年
- 目的:研究陈皮多甲氧基黄酮类成分(CM)对人乳腺癌、肝癌细胞株的增殖抑制作用并对其敏感性进行比较。方法:采用MTT法观察CM对人乳腺癌MCF-7、肝癌HepG2细胞株的增殖抑制作用。结果:不同剂量CM(10mg/L、20mg/L、40mg/L)作用于MCF-7细胞株,24h细胞抑制率分别为18.75%、19.79%、34.38%,48h细胞抑制率分别为17.39%、36.96%、40.22%,72h细胞抑制率分别为35.57%、47.08%、50.69%;作用于HepG2细胞株,24h细胞抑制率分别为5.51%、11.81%、29.92%,48h细胞抑制率分别为13.54%、38.54%、51.04%,72h细胞抑制率分别为13.21%、43.40%、55.67%。结论:CM可以抑制人乳腺癌MCF-7、肝癌HepG2细胞株的生长并对两细胞株的增殖抑制呈现时间、浓度依赖性。同等条件下,在小剂量、短时间作用时,MCF-7对于CM作用的敏感性较高;在大剂量、长时间作用时,HepG2表现出比MCF-7更高的敏感性。
- 王志国李兰英张利
- 关键词：人肝癌细胞株人乳腺癌细胞株体外实验
- MR LAVA动态增强扫描技术在壶腹周围病变中的应用价值研究被引量：3
- 2013年
- 目的:探讨MR LAVA多期动态增强扫描技术在壶腹部病变的临床应用价值。材料与方法:对26例患者在常规MR扫描基础上行低张MRCP及十二指肠低张后LAVA多期动态增强扫描,观察病变间接及直接征象,评估LAVA技术对壶腹部病变的显示价值。结果:26例患者肝脏三维容积超快速多期动态增强图像能清晰显示壶腹部病变的形态及动态变化,达到诊断要求。重建图像能清晰显示肝内外血管形态及其与壶腹病变的关系。结论:LAVA动态增强扫描能全面、直观显示壶腹病变,显示壶腹部病灶内外血管及其与病灶的关系,具有较高的应用价值。
- 孙胜禄张利魏红梅
- 关键词：LAVAMRCPMIP
- 蛋白酶体β亚单位6作为蚊对溴氰菊酯抗性检测的靶标的应用
- 本发明公开了蛋白酶体β亚单位6（PSMB6）作为蚊对溴氰菊酯抗性检测的靶标的应用，当待测品系的蛋白酶体β亚单位6基因的表达量达到敏感品系的1.60倍时，可认为待测品系对溴氰菊酯具有抗性。本发明发现了一个蚊对溴氰菊酯抗性检...
- 沈波孙海波张东辉贺骥孙林春于婧张利马磊孙艳朱昌亮
- 文献传递
- 3种转染试剂介导siRNA转染蚊细胞的比较研究被引量：1
- 2011年
- 目的比较3种不同转染试剂介导siRNA转染蚊细胞的优缺点,选择最优方法用于转染后细胞存活率检测试验。方法分别用FuGENE HD,X-tremeGENE和siPORT Amine 3种转染试剂介导特定siRNA转染蚊细胞,转染48 h后采用实时荧光定量PCR检测目的基因的表达。比较3种方法的干涉效率,转染试剂对细胞的毒性和不同方法的操作步骤对实验结果的影响。结果 FuGENE HD、X-tremeGENE和siPORT Amine转染后的干涉效率分别为70%、85%和29%;FuGENE HD和siPORT Amine对蚊C6/36抗性细胞毒性较小,X-tremeGENE对蚊细胞毒性较大;FuGENE HD的转染过程需要更换一次细胞培养液,X-tremeGENE的转染过程需要更换2次细胞培养液,siPORT A-mine的转染过程不需要更换培养液。结论转染试剂的转染效果对于实验结果有显著影响。在蚊细胞转染siRNA的实验中,FuGENE HD转染效率尚可,对细胞毒性小,转染过程只需1次换液操作;X-tremeGENE转染效率较高,对蚊细胞毒性较大,有2次换液操作;siPORT Amine毒性小且不需换液操作,但转染效率较低。综合评价:FuGENE HD更适用于转染siRNA后细胞存活率实验。
- 孙林春孙海波沈波张利于婧朱昌亮
- 关键词：转染RNA干涉GENEAMINE
