易磊
- 作品数：7 被引量：24H指数：3
- 供职机构：同济大学医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 不同浓度血清对大鼠骨骺干细胞向软骨细胞分化的诱导效果比较被引量：6
- 2008年
- 背景:血清成分复杂,其中不仅存在促细胞生长因子,同时也存在细胞生长抑制因子,因此合适的血清浓度对于体外培养细胞的增殖和分化至关重要。目的:比较不同浓度的胎牛血清对大鼠骨骺干细胞向软骨细胞分化的影响。设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2007-03/10在华中科技大学同济医学院附属同济医院矫形外科研究室完成。材料:纯系清洁级新生24h内的SD大鼠8只,用于制备骨骺干细胞。胎牛血清为Gibco公司产品。方法:免疫磁珠分离纯化FGFR-3阳性的骨骺干细胞,稳定传至第3代后,分别用含1.25%,2.5%,5%,10%胎牛血清的软骨诱导培养基进行干预,诱导14d。主要观察指标:BrdU-ELISA法检测细胞增殖活性。应用免疫荧光染色和RT-PCR法检测细胞Ⅱ型胶原的表达。结果:骨骺干细胞向软骨细胞诱导14d后,10%胎牛血清组细胞增殖活性显著高于1.25%,2.5%,5%胎牛血清组(P<0.05);10%胎牛血清组Ⅱ型胶原免疫荧光染色阳性程度及Ⅱ型胶原mRNA的表达均明显强于其他3组。结论:含10%胎牛血清的软骨诱导液更有利于骨骺干细胞向软骨细胞方向分化。
- 张树威陈安民宋登新谢伯臻王江祁军易磊郭风劲
- 关键词：骨骺干细胞血清浓度分化软骨细胞
- 大鼠PTHrP亚基因的克隆及其真核反应质粒的构建被引量：2
- 2008年
- 目的:克隆甲状旁腺相关肽(PTHrP)亚基因PTHrP(1-36)、PTHrP(38-94)和PTHrP(107-139)并构建四环素反应性元件调控的反应质粒pTRE-PTHrP(1-36)、pTRE-PTHrP(38-94)和pTRE-PTHrP(107-139),为调控PTHrP亚克隆在软骨前体细胞中的表达打下基础。方法:提取骨骺干细胞的总RNA,以RT-PCR方法获得带有酶切位点的PTHrP(1-36)、PTHrP(38-94)和PTHrP(107-139)基因片段,扩增的DNA片段分别与含潮霉素筛选标记的四环素反应性元件载体pTRE-2Hyg双酶切后连接,转化扩增后对重组质粒进行提取和酶切、测序鉴定。结果:经酶切图谱分析和DNA序列测定证实目的基因已经插入重组质粒。结论:成功克隆出PTHrP亚克隆基因PTHrP(1-36)、PTHrP(38-94)和PTHrP(107-139)并构建了反应质粒pTRE-PTHrP(1-36)、pTRE-PTHrP(38-94)和pTRE-PTHrP(107-139),为进一步精确调控PTHrP亚基因的表达奠定了基础。
- 张树威陈安民郭风劲谢柏臻祁军王江易磊李昆朋
- 关键词：骨骺干细胞
- C端甲状旁腺相关肽的克隆及其对骨骺干细胞的调控作用被引量：2
- 2009年
- 目的探讨C端甲状旁腺相关肽（PTHrp107-139）对体外培养的骨骺干细胞的调控作用以及与其他调控因子的关系。方法采用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）方法克隆大鼠PTHrp全长中的107～139片段，并将其亚克隆至质粒pTRE2hyg上，构建新的质粒pTRE2hyg—PTHrp107-139，并将其与质粒pTet—on共转染分离纯化的骨骺干细胞，放入含有维生素c和地塞米松的全培养基中进行培养，分别加入0．1、0．5、2．0mg／L的强力霉素（Doxycycline）进行诱导，并设置空白对照。48～72h后抽提各组细胞的RNA进行逆转录，然后通过半定量PCR的方法检测增殖细胞核抗原（PCNA、SOX9等基因的表达变化，流式细胞仪检测细胞周期和凋亡。结果加入DOX组的PCNA、ColⅡ、血管内皮细胞生长因子（VEGF）、SOX9表达增加，骨骺干细胞数量明显增多，而Ptc、ColX、骨形态发生蛋白（BMP）-6表达减少。结论C端甲状旁腺相关肽可能有促进骨骺干细胞增殖并抑制其分化的作用，但对细胞凋亡无明显影响。
- 李明辉郭风劲张树威宋登新王江易磊
- 关键词：甲状旁腺骨骺干细胞软骨形成
- 行骨水泥型人工全髋关节置换老年患者骨水泥注入过程中血流动力学变化被引量：9
- 2008年
- 回顾性分析39例骨水泥型人工全髋关节置换治疗的老年股骨颈骨折患者,男13例,女26例;年龄70～87岁。观察骨水泥注入中的血流动力学的改变及注入后随访情况。注入骨水泥即刻,收缩压和舒张压下降剧烈,维持5～7min在较低水平,在10min恢复正常;注入3min时,心率变化最快,10～15min恢复正常;注入3min时,血氧饱和度略有下降,其余时刻变化不大。术后1年患者Harris评分,优14例,良15例,中10例。结果表明,骨水泥型人工全髋关节置换治疗老年股骨颈骨折效果确切,安全可靠。
- 谢虎郭风劲雷波祈军易磊
- 关键词：骨水泥股骨颈骨折人工假体
- 低分子量肝素对骨肉瘤细胞增殖和survivin表达的影响被引量：3
- 2007年
- [目的]研究低分子量肝素对骨肉瘤细胞增殖和survivin表达的影响。[方法]体外培养骨肉瘤细胞系MG-63,应用MTT法检测不同浓度低分子量肝素不同时间段对骨肉瘤细胞系MG-63生长的影响,流式细胞仪检测细胞凋亡率的变化,免疫组化和RT-PCR法分析低分子量肝素对骨肉瘤细胞survivin基因表达的影响。[结果]低分子量肝素可抑制骨肉瘤细胞系MG-63生长,且随着低分子量肝素剂量的增加,MG-63细胞凋亡率明显增加。免疫组化和RT-PCR显示,骨肉瘤细胞系MG-63中survivin的表达较用药前明显下降。[结论]低分子量肝素对骨肉瘤细胞系MG-63有明显的抑制作用,其作用可能通过抑制抗凋亡基因survivin的表达,促进肿瘤细胞的凋亡而实现。
- 易磊郭风劲陈安民祝文涛宋登新张树威胡伟华李明辉
- 关键词：低分子量肝素骨肉瘤SURVIVIN细胞凋亡
- 受强力霉素调控的永生化骨骺干细胞株的建立被引量：3
- 2007年
- 目的:建立受强力霉素调控高表达外源基因的真核表达体系-永生化骨骺干细胞株,为调控甲状旁腺相关肽的不同片断在骨骺干细胞中的表达打下基础。方法:实验于2006-09/2007-03在同济医学院矫形外科实验室完成。①实验材料:SD大鼠的乳鼠由华中科技大学同济医学院动物实验中心提供,雄鼠4只,雌鼠6只。②实验方法:取SD大鼠的乳鼠10只,显微镜下选取LaCroix环处的软骨及软骨前体细胞(骨骺干细胞),采用磁性细胞分选的方法,分离出原代骨骺干细胞,并用PCMVSV40质粒将其永生化。用脂质体介导法将pTet-on质粒转染已永生化的骨骺干细胞,通过G418筛选并经有限稀释法进行单克隆化,得到稳定转染的抗性克隆并将其分别扩增培养。将pTRE2hyg-luc质粒瞬时转染扩增后的单克隆细胞,加入终浓度为1mg/L的强力霉素诱导剂培养,48h后逐一检测每个细胞株的荧光素酶表达活性,逐一筛选强力霉素调控高表达外源基因的永生化骨骺干细胞株。③实验评估:将挑选出的第23号克隆扩增培养,加入0.01,0.1,0.5,1,5mg/L强力霉素进行诱导培养,并设置3组对照,一组为空白对照(蒸馏水),一组为未转染Tet-on系统的骨骺干细胞(均加入1mg/L0.1mg/强力霉素诱导),另一组为转染后的骨骺干细胞不加入强力霉素诱导。观察强力霉素对骨骺干细胞的最优诱导质量浓度。结果:第23号克隆的细胞经诱导后荧光素酶的表达活性为85790,而非诱导状态下该细胞株的活性为437,诱导后的活性增加196.3倍。强力霉素质量浓度梯度实验提示,强力霉素的最优诱导质量浓度是1mg/L左右,质量浓度过高可导致细胞死亡,过低时诱导效率降低。结论:永生化骨骺干细胞株可用于真核调控高表达,为研究甲状旁腺相关肽的不同功能片断与骨骺干细胞的分化机制的关系打下了基础。
- 李明辉郭风劲张树威宋登新王江易磊
- 关键词：基因表达调控干细胞强力霉素
- 低分子量肝素对骨肉瘤细胞生长与凋亡的影响研究被引量：1
- 2008年
- 目的研究低分子量肝素(LMWH)体外抗肿瘤生长及诱导肿瘤细胞凋亡的作用,初步探讨低分子量肝素抗肿瘤作用机制,为该药的抗肿瘤作用开发和临床应用提供试验依据。方法在体外培养的骨肉瘤系(MG-63)细胞培养基中加入不同浓度的LMWH,对照组加完全培养基,用MTT法检测不同浓度LMWH在干预不同时间后对骨肉瘤细胞生长的影响,流式细胞仪检测不同浓度干预组细胞凋亡率的变化。结果LMWH可抑制骨肉瘤细胞系MG-63生长,并具有时间剂量依赖性,在LMWH浓度为200 U.mL-1时,对细胞生长有明显的抑制作用。流式细胞仪检测显示,随着LMWH剂量的增加,MG-63细胞凋亡率明显增加。结论LMWH在体外具有抗肿瘤活性,其作用可能通过抑制细胞增殖和促进肿瘤细胞凋亡而实现。
- 易磊郭风劲陈安民祝文涛陈剑锋谢虎
- 关键词：低分子量肝素人骨肉瘤细胞凋亡
