牛登元
- 作品数：11 被引量：49H指数：4
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- 猪腹泻大肠杆菌LTa(R210G)和LTb原核表达及其在小鼠的免疫反应
- 2009年
- 大肠杆菌不耐热性肠毒素(LT)具有免疫增强作用,是良好的免疫佐剂。为了更好的研究其免疫增强效果,本研究将LT的两个亚基LTa(R210G)和LTb克隆到pGST中,原核表达LTa(R210G)和LTb,经Western-blotting分析,表达蛋白具有免疫原性。对表达蛋白进行大量纯化后,以卵清蛋白为模式蛋白(OVA)为模式蛋白,免疫小鼠,ELISA结果表明,OVA+LTa(R210G)佐剂组小鼠的抗体滴度最高,OVA+LTb和OVA+LTa+LT组抗体滴度相似,高于OVA+氢氧化铝组,而OVA+氢氧化铝组高于无佐剂OVA组。因此,LTa(R210G)和LTb具有良好的免疫增强作用,是一种极有希望的免疫佐剂。
- 袁秀芳王一成徐丽华刘邓牛登元王朝文
- 关键词：原核表达免疫反应
- 猪流行性腹泻病毒和猪传染性胃肠炎病毒双重RT-PCR鉴别方法的建立被引量：12
- 2009年
- 根据GenBank发表的猪流行性腹泻病毒(PEDV)CV777株和猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)Purdue P115株的基因序列,针对其基因保守区,设计1条共用的下游引物和2条各自病毒的上游引物,可特异扩增出大小分别为213 bp和546 bp目的条带。经过对TaqDNA聚合酶和Mg2+浓度、退火温度(Tm)等PCR反应条件的优化,最终确定该双重RT-PCR的最佳条件为TaqDNA聚合酶浓度为0.03 U/μL,Mg2+浓度为0.05 mmol/L,dNTP浓度为200μmol/L,Tm为51℃。特异性和敏感性检测结果显示,所建立的检测方法具有很好的特异性以及较高的敏感性。
- 刘邓袁秀芳徐丽华牛登元王朝文王一成
- 关键词：猪流行性腹泻病毒猪传染性胃肠炎病毒
- 纳米金载体增强PRRSV GP5蛋白免疫原性的研究
- 猪繁殖与呼吸系统综合征是由猪繁殖与呼吸系统综合征病毒/(porcine respiratory and reproductive syndrome virus, PRRSV/)引起的一种以母猪繁殖障碍和仔猪呼吸道疾病为特...
- 牛登元
- 关键词：猪繁殖与呼吸系统综合征GP5纳米金体液免疫
- 文献传递
- 猪流行性腹泻病毒CH/ZJ分离株S基因的克隆、原核表达和免疫原性分析被引量：11
- 2010年
- 为了获得具有免疫活性的猪流行性病毒S蛋白,试验参照GenBank中所收录的猪流行性腹泻病毒(PEDV)CV777株S基因序列设计1对特异性引物,去除信号肽,以PEDVCH/ZJ株为模板,通过RT-PCR扩增出目的基因,克隆入原核表达载体pET28a(+),转化到Top10感受态细胞中,测序并分析。结果表明:目的基因含有1个长966bp、编码322个氨基酸残基组成的多肽;与CV777株相比较,同源性为96.0%,但在398bp处缺失编码1个异亮氨酸的密码子,将重组质粒命名为pET-P-SP1;将pET-P-SP1转化到大肠杆菌E.coliBL21-DL3(Rosetta)中,在IPTG诱导下表达;通过SDS-PAGE表达出与预期大小相符的约35.6ku的重组蛋白,重组蛋白以包涵体形式存在;表达产物占菌体蛋白的80%;表达蛋白能与抗猪流行性腹泻病毒高免血清反应,说明该重组蛋白具有免疫活性。
- 刘邓冉多良袁秀芳徐丽华牛登元张存王朝文王一成
- 关键词：猪流行性腹泻病毒S基因原核表达免疫学活性
- TaqMan荧光定量PCR检测猪流行性腹泻病毒方法的建立与初步应用被引量：22
- 2010年
- 根据GenBank中公布的猪流行性腹泻病毒Ⅳ基因序列，设计了一对特异性引物和探针，扩增长度为186bp的片段。以克隆Ⅳ基因的质粒作为阳性标准品，建立了一种快速检测猪流行腹泻病毒含量的TaqMan荧光定量PCR方法。该方法在10^9-10^1copies／μL范围内具有良好的线性关系，可检测到初始模板中10copies／μL的质粒DNA，以猪圆环病毒、猪乙脑病毒、猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪伪狂犬病毒和猪细小病毒为模板时，均检测不到荧光信号，而重复性实验中其变异系数均小于2％，表明此方法具有很好的特异性和重复性。应用此方法对采集的60份，陆床样品进行检测，其阳性检出率为92％，而用常规RT-PCR方法进行检测，阳性检出率仅为80％。表明荧光定量RT-PCR方法的敏感性明显高于常规PcR检测方法。
- 刘邓袁秀芳冉多良徐丽华牛登元王朝文王一成
- 关键词：猪流行性腹泻病毒荧光定量RT-PCR
- 纳米金增强PRRSV GP5蛋白在小鼠体内的免疫效果研究
- 为了研究纳米金的免疫增强效果，以PRRSV GP5重组表达蛋白为目标蛋白，将纳米金包被GP5重组表达蛋白，免疫小鼠，同时设弗氏佐剂对照以及纳米金对照组。ELISA试验结果表明：纳米全能够显著提高GP5重组表达蛋白的抗体水...
- 牛登元王一成袁秀芳徐丽华张存李军星
- 关键词：纳米金MTT
- 文献传递
- 猪传染性胃肠炎诊断技术研究进展被引量：4
- 2008年
- 猪传染性胃肠炎是一种由冠状病毒引起的以仔猪呕吐、腹泻和脱水为特征的传染病,对养猪业造成了巨大的损失。为此,众多学者对该病的诊断与检测方法进行了大量的研究,建立了临床诊断、病原分离等传统诊断方法,以及大量的免疫学、分子生物学诊断方法等。研究猪传染性胃肠炎的诊断与检测方法对防控该病的暴发和传播有重要意义。
- 刘邓袁秀芳徐丽华张存叶伟成牛登元王一成
- 关键词：传染性胃肠炎免疫学分子生物学
- 纳米金增强PRRSV GP5蛋白在小鼠体内的免疫效果研究
- 为了研究纳米金的免疫增强效果,以PRRSVGP5重组表达蛋白为目标蛋白,将纳米金包被GP5重组表达蛋白,免疫小鼠,同时设弗氏佐剂对照以及纳米金对照组。ELISA试验结果表明:纳米金能够显著提高GP5重组表达蛋白的抗体水平...
- 牛登元王一成袁秀芳徐丽华张存李军星
- 关键词：纳米金MTT
- 文献传递
- pCI-LT(R210G)基因疫苗的免疫原性研究
- 2009年
- 袁秀芳徐丽华王一成牛登元刘邓王朝文
- 关键词：产肠毒素大肠杆菌免疫原性基因疫苗PCI不耐热肠毒素仔猪黄痢
- 猪大肠杆菌LT基因位点突变、真核表达及小鼠免疫效果
- 2010年
- 大肠杆菌不耐热性肠毒素具有免疫增强的作用,为了更好的研究LT免疫增强效果,我们从临床分离大肠杆菌,提取基因组DNA,扩增出大肠杆菌不耐热性肠毒素基因LT,经位点突变,将LT210位的A突变为G,突变后的LT克隆到真核表达载体pCI质粒中,命名为pCI-LT(R210G),磷酸钙共沉法转染IBRS细胞证实LT(R210G)体外获得表达。将pCI-LT(R210G)免疫小鼠,ELISA结果表明:免疫小鼠两周后体内检测到特异性抗LT抗体,4周达到最高值。同时,MTT试验结果表明免疫小鼠产生强烈的淋巴细胞增殖反应。研究结果证明已成功构建pCI-LT(R210G)真核表达质粒,是一种极有发展前景的基因疫苗。
- 袁秀芳王一成徐丽华刘邓牛登元王朝文
- 关键词：位点突变真核表达免疫反应
