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牛副流感病毒3型核衣壳蛋白基因的真核表达被引量：2: 2012年; 根据牛副流感病毒3型(BPIV-3)内蒙09株(NM09)全基因组序列(GenBank登录号:JQ063064)设计特异性引物,利用RT-PCR方法扩增出牛副流感病毒3型分离株的核衣壳蛋白(N)基因,通过NheI和NotI限制性内切酶位点亚克隆至真核表达载体pcDNA3.1/Zeo(+),获得真核重组质粒pcDNA3.1-N。采用Superfect转染试剂将重组质粒转染至BSR细胞中,转染后的BSR细胞经间接免疫荧光试验和RT-PCR方法检测,重组质粒pcDNA3.1-N在BSR细胞中能正确表达N蛋白。本研究结果为BPIV-3新型疫苗的研制奠定基础。; 师新川温永俊王凤雪王炜王建科程世鹏武华; 关键词：真核表达 N基因

副流感病毒基因工程研究进展被引量：2: 2013年; 副流感病毒是一类不分节段的单股负链RNA病毒,按基因型可分为1、2、3、4和5型,5个型之间有少量的交叉免疫,各型的生物学特性和结构类似。该病毒宿主谱广,可感染人、牛和犬等多种动物。副流感病毒具有许多优良的特性,可作为活病毒疫苗的候选载体,通过反向遗传操作系统可使其表达外源基因,研发新型疫苗。作者在综述副流感病毒病原学、基因组结构及主要蛋白质等生物学特征的基础上,着重介绍了副流感病毒作为病毒载体在基因工程方面的研究进展。; 曹丽师新川高维凡温永俊; 关键词：副流感病毒基因

犬瘟热病毒RT-LAMP检测方法的建立及初步应用被引量：10: 2012年; 环介导等温基因扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)是一种特异、灵敏、快速的检测方法。为提高犬瘟热病毒(CDV)检测效率、降低检测成本,针对犬瘟热病毒N基因保守区的8个位点设计了6条引物进行RT-LAMP一步法扩增。对反应体系及条件优化,检测特异性、敏感性,扩增产物通过凝胶电泳、显色反应和浑浊度比较进行判定。试验结果表明,该方法特异性强、敏感度高,操作简便、快速、便于观察,适用于门诊和现场检测。; 胡嘉欣温永俊霍志云师新川杨博超武华高维凡; 关键词：犬瘟热病毒 N基因

高致病性PRRSVNsp2基因RNA干扰对病毒复制的影响被引量：4: 2012年; 旨在构建针对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)TJ株Nsp2基因的siRNA的表达载体,研究Nsp2基因的表达抑制对PRRSV复制的影响。设计并合成针对PRRSV TJ株Nsp2基因的3对优势小发卡RNA(shRNA),连接到pRNAT-U6.1/Neo,构建shRNA表达载体,将鉴定正确的载体质粒转染Marc-145细胞,6 h后接毒,每日观察CPE;在接毒PRRSV TJ株后不同时间点取上清样品,测定样品TCID50;并以β-actin为内参,RT-PCR对PRRSV Nsp2 mRNA进行半定量。结果表明,选取的3条Nsp2基因的优势siRNA均能够抑制PRRSV TJ株在Marc-145细胞上增殖,其中shRNA载体S-1和S-2抑制效果明显,与空载体相比较差异极显著。本研究构建的PRRSV Nsp2基因特异性shRNA载体能够有效抑制PRRSV的复制,可使病毒滴度TCID50最多降低103.38。; 王凤雪师新川温永俊胡嘉欣刘准武华; 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒 RNA干扰

牛副流感病毒3型NM09株反向遗传系统的建立: 牛呼吸道综合症征(Bovine respiratory disease complex, BRDC)是引起世界范围内饲养牛呼吸道疾病的主要原因，每年都给养牛业带来巨大的经济损失。牛副流感病毒3型（Bovine parai...; 师新川; 文献传递

非结构蛋白2在猪繁殖与呼吸综合征病毒复制调控中的作用:基因沉默和过量表达的效果: 猪繁殖与呼吸综合征是养猪业面临的重要的一个传染病,已经发展了很多控制疾病的疫苗策略,但还未完全成功.建立一个细胞系来获得高产量的PRRSV疫苗是必需的.为了确定高致病性PRRSV(HP-PRRSV)在MARC-145细胞...; 王凤雪温永俊杨博超刘准师新川冷雪宋妮武华陈立志程世鹏

水貂肠炎病毒疫苗株和野毒株PCR-RFLP鉴别方法的建立被引量：1: 2012年; 为了建立水貂肠炎病毒(MEV)疫苗株与野毒株的鉴别检测方法,根据GenBank中的水貂肠炎病毒序列设计了1对引物,用来扩增包含水貂肠炎病毒NS1基因在内的2 013bp大小的片段。通过对国内疫苗毒MEVB株及其他细小病毒参考株的NS1基因序列比较发现,疫苗毒MEVB株NS1基因核苷酸1401位的碱基由T变为C,致使1399位～1404位的核苷酸构成由ATTGAT变异为ATCGAT,多了1个限制性内切酶ClaⅠ酶切位点,其他MEV分离毒株中均未出现此酶切位点。用特异性引物扩增出2 013bp的目的片段后,再用限制性内切酶ClaⅠ进行酶切分析,疫苗毒MEVB株被切割成1 404bp和609bp的2个片段,国内其他分离株均未出现上述片段。结果表明,所建立的PCR-RFLP方法可以区分疫苗毒MEVB株和野毒株。; 王建科程世鹏杨莘易立许红丽程悦宁师新川武华闫喜军; 关键词：水貂肠炎病毒疫苗株野毒株

貂源铜绿假单孢菌的分离鉴定及其致病性研究被引量：1: 2012年; 为确定山东威海某养殖场发病水貂的病原菌,从发病水貂肺中分离并纯化细菌,根据其形态特征、培养特性、生化试验结果及PCR鉴定,确定其为铜绿假单孢菌。致病性试验中,将8.0×1010CFU/mL的菌液10倍系列稀释后,感染60日龄健康昆明系小鼠,半数致死量和最小致死量分别为1.4×107 CFU/mL和8.0×106 CFU/mL。剖检死亡小鼠可见皮下和肺出血,并能从死亡小鼠的肺中分离出与感染菌株形态特征完全一致的菌落。药敏试验结果显示,该分离菌株对庆大霉素、环丙沙星、诺氟沙星、头孢哌酮等较为敏感,而对青霉素、链霉素不敏感。系统发育分析结果表明,该分离菌株与从小麦中分离的铜绿假单孢菌的亲缘关系最近,据此怀疑该发病水貂有可能是食用了污染的饲料引起的。; 孙见谭斌温永俊张淑琴胡嘉欣师新川武华; 关键词：铜绿假单孢菌药敏试验

牛副流感病毒3型RT-LAMP检测方法的建立及应用被引量：11: 2012年; 本试验根据GenBank中登录的牛副流感病毒3型(BPIV-3)基因序列,利用在线软件Primer Explorer V4Software和Primer Premier 5.0,针对BPIV-3 NP基因序列的保守区设计并筛选了一套环介导逆转录等温核酸扩增(RT-LAMP)引物,建立BPIV-3特异性检测的RT-LAMP方法。在Bst DNA聚合酶作用下,63℃恒温反应1h即可完成扩增过程,扩增产物通过浑浊度比较、凝胶电泳和肉眼可视化进行判定。结果表明,该方法比RT-PCR敏感度更高,最低检出量可达0.069fg/μL。该方法可用于牛副流感病毒3型的实验室检测和临床初步诊断。; 师新川温永俊王凤雪胡嘉欣杨博超王炜宋妮程世鹏武华; 关键词：N基因

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师新川