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MK对人脐静脉内皮细胞增殖及迁移的影响被引量：1: 2013年; 目的通过研究midkine(MK)蛋白对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖、迁移的影响,阐明MK蛋白在血管生成中的作用。方法选择HUVEC为研究对象进行细胞常规培养,分为5组分别给予不同浓度MK进行干预,实验组MK浓度分别为0.5、5、50和500 ng/ml,以未处理组作为对照组。利用CCK-8试剂盒检测MK对HUVEC增殖能力的影响,利用Transwell技术检测MK对HUVEC迁移能力的影响。结果与对照组相比,5 ng/ml的MK作用24 h和48 h可以促进细胞增殖,差异有统计学意义(P<0.05);5 ng/ml的MK作用24 h可以促进细胞迁移,差异有统计学意义(P<0.05)。结论一定浓度的MK作用于内皮细胞,可以促进其增殖和迁移,提示MK在血管生成中具有重要作用。; 张鹏王庆苓; 关键词：MK 人脐静脉内皮细胞增殖迁移

双歧杆菌Ⅱ型毒素-抗毒素系统-MazEF的分子进化分析: 2014年; 目的:对双歧杆菌属编码的Ⅱ类毒素-抗毒素(TA)系统MazEF进行分子进化分析。方法:利用PSI-BLAST在NCBI中搜索获得双歧杆菌编码的MazF分子序列,在NCBI蛋白数据库、核酸数据库分别下载其他菌属基因组编码的MazF蛋白序列和本研究所涉及菌属的16 S rRNA序列,应用Clustal X2和MEGA4软件对Maz F做分子进化分析。结果:共搜索到双歧杆菌株染色体编码毒素蛋白MazF 26个。分子进化分析显示:整个双歧杆菌属的MazF保守性不好;MazF与16 S rRNA的共进化仅在个别菌种中发现,大部分MazF的聚类结果与相应菌种16 S rRNA的聚类结果不同。结论:双歧杆菌中的TA系统MazEF可能是通过基因的水平转移整合入基因组中,属于菌株非核心基因组部分。; 韦艳霞刘佃滨郑纪伟尤红娟张鹏李阳汤仁仙; 关键词：毒素-抗毒素系统分子进化双歧杆菌

Toll样受体4及相关炎性信号分子在高脂饮食诱导的肥胖小鼠肾脏组织水平升高被引量：4: 2015年; 目的探讨Toll样受体4(TLR4)、髓样分化因子88(My D88)、核因子κBp65(NF-κBp65)在高脂饮食(HFD)诱导的肥胖小鼠肾脏组织中的表达。方法 45只健康C57BL/6雄性小鼠随机分为HFD组(n=39)和对照组(n=6)。HFD组给予高脂高糖饲料,对照组给予普通饲料,均喂养20周。每周测量小鼠体质量,取体质量增长值最高的13只为饮食诱导肥胖(DIO)组,称量内脏脂肪质量。检测血清肌酐、尿素氮(BUN)及内毒素水平。HE染色、显微镜观察肾脏形态。实时定量PCR(qRT-PCR)检测小鼠肾脏组织TLR2、TLR4、My D88、NF-κBp65及TNF-αmRNA水平,Western blot法检测小鼠肾脏组织TLR4、My D88、NF-κBp65蛋白水平。结果成功构建DIO小鼠模型;与对照组相比,DIO小鼠血内毒素水平升高,血肌酐、BUN水平无显著性差异,2组小鼠肾脏结构未见明显异常;与对照组小鼠相比,DIO小鼠肾脏TLR4、My D88、NF-κBp65、TNF-αmRNA水平升高,TLR2 mRNA水平无显著性差异;DIO小鼠肾脏TLR4、My D88、NF-κBp65蛋白水平升高。结论 TLR4及相关炎性信号分子在饮食诱导肥胖小鼠肾脏组织表达水平增加。; 张曼曼张蓓蓓王林李向阳华慧汤仁仙张鹏郑葵阳; 关键词：肥胖肾脏 TOLL样受体4 髓样分化因子88

人Midkine基因RNAi慢病毒载体的构建与鉴定: 2014年; 目的构建人Midkine(MK)基因RNA干扰(RNA interference,RNAi)慢病毒载体并鉴定,为其体内外实验研究提供基础。方法设计针对人MK基因序列的4条RNAi靶点序列,分别与慢病毒载体进行连接,获得GV115-MK-1、GV115-MK-2、GV115-MK-3和GV115-MK-4质粒,转染感受态细菌,经PCR及测序技术的鉴定,然后与pHelper 1.0和pHelper 2.0共转染293T细胞,进行慢病毒包装并测定病毒滴度。4种病毒载体感染人乳腺癌MDA-MB-231细胞后,用RT-PCR检测MK mRNA的表达。结果 PCR和测序检测结果证实,插入的MK RNAi核苷酸序列正确,共转染293T细胞后可见大量绿色荧光。浓缩病毒后测定其滴度分别为6×108、5×108、5×108和6×108TU/ml。感染MDA-MB-231细胞后,RT-PCR检测结果表明,GV115-MK-1干扰效果明显,MK基因敲减效率达87.2%(P<0.05)。结论成功构建人MK RNAi慢病毒表达载体,并可有效抑制MDA-MB-231细胞MK基因的表达。; 王庆苓张鹏; 关键词：MIDKINE RNA干扰慢病毒载体

人缺失型Midkine重组蛋白的原核表达及活性鉴定: 2012年; 目的构建人缺失型Midkine（tMK）的原核表达载体，以得到具有生物学活性的重组蛋白。方法从测序正确的pMD18-T-trekVector重组质粒上切下tmk序列，重组至pET30（a＋）载体中，转化BL21（DE3），IPTG诱导蛋白表达，HeparinSepharose4B纯化蛋白，CCK-8检测其促NIH3T3和BGC823细胞增殖的活性。结果成功构建了tMK的原核表达载体，纯化得到重组tMK蛋白。该蛋白在0．03125-0．5mg／L范围时能明显促进NIH3T3细胞增殖（P〈0．05或P〈0．01），在0．0625-2mg／L范围时能明显促进BGC823细胞增殖（P〈0．05）。结论获得了具有生物学活性的重组tMK蛋白。; 张鹏王庆苓; 关键词：蛋白纯化细胞增殖

干扰人胃癌MGC803细胞EPCR表达对内皮细胞增殖、迁移及脉管形成的影响: 2016年; 目的：探讨内皮细胞蛋白C受体（endothelial protein C receptor，EPCR）在肿瘤血管形成中的作用。方法采用RNA干扰方法降低人胃癌MGC803细胞中EPCR的表达，利用Western blot 技术检测干扰EPCR效果。EPCR小干扰RNA（ siRNA）片段、无关序列片段分别转染胃癌MGC803细胞，以未转染的MGC803细胞为对照；收集培养液上清，制备相应肿瘤条件培养基。人脐静脉内皮细胞（ HUVECs）经不同肿瘤条件培养基作用后， CCK－8法检测HUVECs增殖能力，Transwell小室检测HUVECs迁移能力，Matrigel检测HUVECs脉管形成能力。结果与对照组及无关序列组相比，EPCR干扰组HUVECs的增殖、迁移及脉管形成能力均明显降低（ P＜0．05）。结论干扰胃癌MGC803细胞EPCR的表达能够抑制HUVECs增殖、迁移及脉管形成能力，提示EPCR可能在胃癌血管形成中起重要作用。; 王田嫄张鹏杨红丽徐炎炎王庆苓; 关键词：胃癌细胞人脐静脉内皮细胞迁移

shRNA靶向抑制MK表达对MDA－MB－231细胞裸鼠体内成瘤能力的影响被引量：3: 2016年; 目的：探讨中期因子（Midkine，MK）基因表达对人乳腺癌MDA－MB－231细胞株裸鼠体内成瘤性的影响。方法将转染pSilencer－3．1－H1－MK（MK KD组）和pSilencer－3．1－H1－NC（NC组）质粒的乳腺癌细胞分别接种于雌性BALB／c裸鼠右侧前肢腋部皮下，然后于接种第7、14、21、28和35天观察测量肿瘤大小。结果与NC组相比，MK KD组裸鼠肿瘤形成时间长，并且肿瘤生长速度慢，瘤体重量轻、体积小（P＜0．05）。结论抑制MDA－MB－231乳腺癌细胞MK基因的表达，可以抑制裸鼠体内成瘤能力。; 韩正杰张鹏孙卓巩玉森刘慧王庆苓; 关键词：MDA-MB-231细胞裸鼠移植瘤

转染Zbtb7a基因对人胃癌SGC7901细胞增殖、凋亡的影响及其机制被引量：2: 2013年; 目的观察转染Zbtb7a基因对人胃癌细胞系SGC7901增殖及凋亡的影响,并探讨其机制。方法将pcDNA3.1-Zbtb7a和pSilencer 3.1-H1-mk用Lipofectamine2000转染SGC7901细胞,采用RT-PCR和Western Blot法检测MK mRNA及蛋白表达,CCK-8试剂盒和平板克隆法检测细胞增殖,流式细胞仪Annexin V-PI染色检测细胞凋亡。结果转染Zbtb7a后,SGC7901细胞中MK表达水平明显升高,细胞增殖能力明显增强(P<0.05),并且0.5ng/mL TRAIL诱导的细胞凋亡受到抑制(P<0.05)。Zbtb7a高表达后干扰MK的表达,细胞增殖及克隆能力则明显降低(P<0.05),TRAIL诱导的细胞凋亡数也明显增加(P<0.05)。结论 Zbtb7a可以通过上调MK的表达,促进SGC-7901细胞增殖以及抑制TRAI诱导的细胞凋亡。; 张鹏王庆苓; 关键词：胃癌细胞增殖细胞凋亡

TRAIL联合白藜芦醇协同诱导人肝癌Huh7细胞凋亡的机制初探被引量：4: 2013年; 目的观察肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumor necrosis factor related to apoptosis inducing ligand,TRAIL)联合白藜芦醇(resveratrol,Res)对人肝癌细胞凋亡的影响。方法流式细胞术检测细胞凋亡;CCK8法检测细胞增殖;Western blot检测细胞内Bax、Bcl-2蛋白的表达;分光光度法检测细胞内caspase3、caspase8的相对活性。结果 TRAIL联合Res作用Huh7细胞,联合用药组与对照组及单独用药组相比:肝癌细胞Huh7的凋亡率明显增加;促凋亡蛋白Bax表达明显增加,而凋亡抑制蛋白Bcl-2表达明显减少;caspase3、caspase8的相对活性明显升高。结论 TRAIL联合Res对诱导人肝癌Huh7细胞凋亡具有明显的协同效果,其机制可能与Bax表达增加、Bcl-2表达减少及caspase活性升高有关。; 刘雯尤红娟徐志辉赵金金李向阳刘晓梅周峰张鹏郑葵阳汤仁仙; 关键词：TRAIL 白藜芦醇肝癌凋亡

胰腺实性假乳头状瘤的临床误诊原因分析及其对策被引量：1: 2015年; 目的对胰腺实性假乳头状瘤的临床误诊原因进行分析,并结合相关文献提出相应对策.方法回顾性分析10例被临床误诊的胰腺实性假乳头状瘤患者的临床资料.10例患者中男1例,女9例,平均年龄29.3岁.患者均无特异性临床表现.结果所有患者均接受手术治疗,术后病理确诊为胰腺实性假乳头状瘤.术后均获随访,未发现肿瘤复发、转移.结论胰腺实性假乳头状瘤属于临床少见疾病,只要临床医生对本病的临床特点和影像学特征有充分的认识,即可提高其术前临床诊断率.; 张鹏杨小勇李文美; 关键词：误诊胰腺实性假乳头状瘤

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张鹏

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