王威
- 作品数：12 被引量：12H指数：2
- 供职机构：昆明医科大学更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 小胶质细胞与神经干细胞共同培养对神经干细胞向多巴胺能神经元分化的影响
- 2018年
- 目的 探讨小胶质细胞与神经干细胞（NSCs）共同培养条件下对NSCs向多巴胺能神经元分化的促进作用。方法 （1）原代培养新生SD大鼠的小胶质细胞并鉴定。原代培养孕14 d SD大鼠胚胎NSCs并鉴定。（2）取鉴定后细胞分为NSCs单独培养组和小胶质细胞与NSCs共同培养组。2组细胞培养6 d后，采用细胞免疫荧光法及Western blotting实验检测多巴胺能神经元分化与成熟相关因子酪氨酸羟化酶（TH）、多巴胺转运体（DAT）及炎症因子3（Pitx3）蛋白的表达，采用PCR技术检测2组细胞TH、DAT以Pitx3基因转录水平的差异。结果 （1）新生SD大鼠小胶质细胞CD11b/c染色阳性，所得到的小胶质细胞纯度〉95%。孕14 d SD大鼠NSCs巢蛋白染色阳性。（2）细胞免疫荧光染色结果显示：与单独培养组比较，共同培养组NSCs TH、DAT及Pitx3阳性蛋白明显增多。Western blotting实验结果显示：共同培养组细胞TH、DAT以及Pitx3蛋白的表达量明显高于单独培养组，差异有统计学意义（P〈0.05）。（3）PCR实验结果显示：共同培养组TH、DAT以及Pitx3基因转录水平均明显高于单独培养组，差异有统计学意义（P〈0.05）。结论 小胶质细胞与NSCs共同培养可促进NSCs向多巴胺能神经元分化。
- 王威李俊君林海徐蛟天陈孝祥宋晓斌杨智勇邓兴力
- 关键词：神经干细胞小胶质细胞多巴胺能神经元
- 一种原代小胶质细胞培养与纯化方法的改良被引量：4
- 2018年
- 目的建立一种简易高效的新生大鼠小胶质细胞的原代培养和纯化方法,提高小胶质细胞的产量以及纯度。方法在传统Miriam Mecha的混合胶质细胞培养方法的基础上通过改良操作,混合培养小胶质细胞,并分别采用手拍法、摇床法以及温和胰酶消化法,纯化小胶质细胞,通过差速贴壁进一步纯化细胞。荧光显微镜下标记小胶质细胞的特异性标记物Iba1、CD11b/c进行鉴定。结果 (1)分离培养第1天小胶质细胞呈不规则圆形,折光不均匀,继续培养3~5 d,小胶质细胞逐渐出现单极或多极突起,7 d时部分细胞转为静止状态,呈分枝状;(2)纯化后小胶质细胞多呈静息状态,细胞免疫荧光CD11b/c、Iba1双阳性;(3)不同纯化方法细胞免疫荧光并计数显示:手拍法纯化小胶质细胞,细胞阳性率(>96%)明显高于胰酶消化法(>90%,P<0.05),前者细胞产量明显高于摇床法(P<0.05)。结论通过改良传统Miriam Mecha的混合小胶质细胞的培养和纯化方法,可以提高小胶质细胞产量以及纯度。
- 徐蛟天边立功张琰王威陈孝祥陈鑫月李庆邓兴力
- 关键词：小胶质细胞细胞培养细胞纯化
- 神经干细胞在有或无Nurr1基因过表达的情况下均和小胶质细胞共培养移植对帕金森大鼠模型的治疗作用
- 林海王威徐蛟天陈孝祥邓兴力宋晓斌杨智勇
- 不同状态下小胶质细胞过表达Nurr1后对NSC分化的影响
- 陈孝祥徐蛟天宋晓斌林海王威杨智勇邓兴力
- 小胶质细胞对神经干细胞向多巴胺能神经元分化过程的影响
- 王威林海徐蛟天陈孝祥宋晓斌杨智勇邓兴力
- 孤儿核受体相关因子1修饰中脑神经干细胞联合小胶质细胞移植治疗帕金森病大鼠
- 陈孝祥林海徐蛟天王威宋晓斌杨智勇邓兴力
- 核受体相关蛋白1基因慢病毒载体的构建
- 2018年
- 目的构建使用绿色荧光蛋白(GFP)标记的核受体相关蛋白1 (nuclear receptor related 1 protein,Nurr1)慢病毒表达载体(DCE-Nurr1)并鉴定。方法使用引物设计软件Primier5设计基因Nurr1引物并采用聚合酶链反应(PCR)对其进行扩增,利用XbaI和Not I分别将基因Nurr1和载体pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP进行双酶切,利用T4链接酶将已酶切的基因Nurr1和已酶切的载体pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP连接起来,完成慢病毒表达载体的构建。结果通过PCR成功地扩增了Nurr1基因并连接到载体pCDHCMV-MCS-EF1-copGFP上,序列与GenBank登记的序列一致。结论成功构建DCE-Nurr1慢病毒表达载体,为进一步在体内或体外研究Nurr1基因功能及其对多巴胺神经元的保护作用提供了基础。
- 林海王向鹏王向鹏王威陈孝祥陈孝祥宋晓斌杨智勇
- 关键词：慢病毒载体帕金森病
- Nurr1基因修饰胚胎中脑神经干细胞移植治疗帕金森病
- 2021年
- 目的探讨移植Nurr1基因修饰胚胎中脑神经干细胞对帕金森大鼠的治疗效果。方法(1)建立SD大鼠帕金森病模型;(2)原代培养SD大鼠胚胎中脑神经干细胞,并于神经干细胞过表达Nurr1;(3)移植治疗分组:假手术组(A组),移植神经干细胞组(B组),移植Nurr1修饰神经干细胞组(C组);(4)在移植后3周、6周、9周和12周分别对各组大鼠进行行为学测试,观察各组症状改善情况;(5)移植12周后,分别检测各组中Nurr1、TH蛋白表达情况和Nurr1荧光情况。结果(1)原代培养大鼠胚胎中脑神经干细胞,并于神经干细胞成功过表达Nurr1基因。(2)免疫荧光、Western Blot证实过表达Nurr1可以促进神经干细胞向多巴胺能神经元转化(P<0.05)。(3)移植Nurr1修饰神经干细胞可以有效的改善帕金森大鼠的症状(P<0.05),Western Blot证实小胶质细胞可显著促进移植后的神经干细胞在分化为多巴胺能神经元(P<0.05)。(4)移植后Nurr1能促进神经干细胞向多巴胺能神经元转化,提高移植神经干细胞的存活,达到更好治疗效果。结论Nurr1基因可以促进神经干细胞向多巴胺能神经元转化;移植修饰Nurr1神经干细胞可以有效治疗帕金森大鼠。
- 乔奕胜陈孝祥徐蛟天王威张超宋晓斌杨智勇邓兴力
- 关键词：NURR1帕金森病
- 丙戊酸钠联合替莫唑胺对小鼠垂体腺瘤细胞AtT-20、GT1-1凋亡的促进作用及其机制研究
- [目的]探讨替莫唑胺联合丙戊酸钠对小鼠垂体腺瘤细胞AtT-20、GT1-1增殖的抑制作用以及凋亡的促进作用,并探讨其可能的分子机制。[方法]1.细胞培养:小鼠垂体腺瘤细胞AtT-20、GT1-1培养于含10%胎牛血清(f...
- 王威
- 关键词：垂体腺瘤替莫唑胺丙戊酸钠联合用药凋亡
- Nurr1对小胶质细胞联合神经干细胞共培养促进神经干细胞向多巴胺神经元分化作用研究被引量：5
- 2018年
- 目的探讨联合过表达核受体相关因子1(Nurr1)基因的小胶质细胞(MG)和神经干细胞(NSC)共培养对神经干细胞向多巴胺神经元分化的影响。方法原代培养SD大鼠神经干细胞和小胶质细胞,并过表达Nurr1基因。CCK-8法检测Nurr1过表达对神经干细胞以及小胶质细胞活率的影响。Transwell系统共培养神经干细胞和小胶质细胞,实验分为NSC组、NSC+MG组和N(NSC+MG)组。ELISA检测共培养后第3天、第6天和第9天各组脑源性神经营养因子(BDNF)、血小板源性神经营养因子(PDNF)和胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)表达变化;RT-PCR和Western Blot检测各组第9天酪氨酸羟化酶(TH)、多巴胺转运蛋白(DAT)DAT和Nurr1的表达变化;细胞免疫荧光鉴定神经干细胞的分化,并对TH和DAT阳性细胞计数,计算各组神经干细胞向多巴胺神经元的分化效率。结果原代培养小胶质细胞以及神经干细胞并成功过表达Nurr1基因。CCK-8法检测结果表明,Nurr1过表达对神经干细胞以及小胶质细胞活率无明显影响。ELISA检测结果表明,N(NSC+MG)组在不同时间点神经营养因子(BDNF、PDNF和GDNF)表达量明显高于其他各组(P<0.05)。RT-PCR和Westen Blot检测结果表明,N(NSC+MG)组TH、DAT和Nurr1的表达水平明显高于其他各组(P<0.05)。细胞免疫荧光鉴定结果表明,N(NSC+MG)组TH阳性细胞率明显高于其他各组(P<0.05)。结论Nurr1基因可促进神经干细胞和小胶质细胞共培养系统神经营养因子的分泌。过表达Nurr1基因的神经干细胞和小胶质细胞共培养可促进神经干细胞向多巴胺神经元的分化。
- 徐蛟天陈孝祥王威林海杨智勇宋晓斌邓兴力
- 关键词：多巴胺神经元
