陈蓉
- 作品数：41 被引量：33H指数：3
- 供职机构：江苏省农业科学院更多>>
- 发文基金：江苏省农业科技自主创新基金国家自然科学基金江苏省自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学更多>>
- 鹅MyoG基因启动子活性及转录调控元件分析被引量：3
- 2021年
- 旨在分析鹅MyoG基因启动子活性区域和转录因子,探究该基因的转录调控机制。本研究首先通过PCR扩增泰州鹅MyoG基因5′侧翼区序列1245 bp并对其进行测序和生物信息学分析,其次,构建4个不同缺失片段的双荧光素酶报告载体,转染C2C12细胞系。进一步利用在线软件预测核心启动子区关键转录因子,对转录因子结合位点HNF4(-521~-503 bp)、USF(-379~-370 bp)和E2(-296~-281 bp)进行定点突变并构建突变报告基因载体,在C2C12细胞系内初步鉴定MyoG基因核心转录调控因子。最后,采集70日龄泰州鹅胸肌、腿肌、心、肝、脾、肺、肾和下丘脑组织样,利用荧光定量PCR检测MyoG基因和核心转录调控因子的组织表达谱。结果表明,扩增得到的鹅MyoG基因5′侧翼区序列包含启动子元件;利用双荧光素酶报告载体检测到鹅MyoG基因启动子区-624~-154 bp区域存在关键顺式调控元件;结合定点突变技术初步鉴定USF是鹅MyoG基因核心转录调控元件。组织表达谱研究进一步表明,MyoG和USF基因在鹅8个不同组织中均有表达,且在胸肌、腿肌和心组织中共同高表达(P<0.01)。鹅MyoG基因5′侧翼区具有启动子转录活性,-624~+37 bp是核心启动子区,USF是MyoG核心转录调控因子。试验结果为探究MyoG基因在鹅肌肉发育过程的调控机制提供理论依据。
- 陈哲陈蓉闫乐艳陈佳彬于建宁
- 关键词：MYOG基因启动子活性点突变转录调控
- 中华绒螯蟹螺原体铁蛋白的表达、纯化和初步晶体学研究
- 2024年
- 铁蛋白是普遍存在于各类有核生物、参与机体铁离子稳态调控的一类蛋白质,它可以自组装形成14 nm左右的中空笼状颗粒,常被作为药物和疫苗的递送载体。支原体铁蛋白的晶体结构显示,铁氧化活性中心和铁离子通道与其他物种存在结构上的差异。目前螺原体铁蛋白还未有相关研究。本研究发现,螺原体铁蛋白与包含支原体在内的其他物种铁蛋白均具有较低的同源性。利用大肠杆菌表达中华绒螯蟹螺原体铁蛋白(SeFer),经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导后,蛋白能以可溶的形式表达于大肠杆菌细胞内。分别通过二乙氨基乙基(DEAE)弱阴离子交换层析、分子筛层析,获得高纯度的SeFer。在4℃和18℃,用坐滴气相扩散法对SeFer进行晶体筛选,该蛋白在多种条件下能生长晶体,通过同步辐射光源衍射,其晶体最好衍射至2.90?,属于I432空间群,收集的数据可用于后继结构解析。非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(Native-PAGE)、动态光散射(DLS)以及SeFer分子筛出峰位置显示,经大肠杆菌重组表达的SeFer相对分子质量为400 kD左右,粒径大小为15 nm左右,与理论值接近。利用Alphafold 2对SeFer进行结构预测,发现其具有与其他铁蛋白类似的二十面体球状结构,但是其铁氧化活性中心与支原体铁蛋白保守位点存在差异。本结果不仅为研究SeFer的晶体结构提供了基础,也为疫苗载体提供了新的候选。
- 杨悦王慧王锐马可徐颖张水军张珍珍陈蓉陈蓉冯志新
- 关键词：铁蛋白蛋白纯化晶体结构
- 猪肺炎支原体抗体胶体金免疫层析检测方法的建立
- 目的 为了能够及时快速地对猪肺炎支原体的感染和免疫情况进行监测，本试验建立了猪肺炎支原体抗体胶体金免疫层析检测方法。方法 通过柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒，标记猪肺炎支原体特异性抗原P46蛋白，作为金标液;P46蛋白包...
- 赵肖白昀陈蓉田瑞雨邵国青雷治海冯志新
- 关键词：猪肺炎支原体血清抗体免疫胶体金
- 一种用于八角式孵化机的光照装置
- 本实用新型提供一种用于八角式孵化机的光照装置，所述孵化机包括孵化机箱体和蛋架，所述蛋架设于孵化机箱体内，所述蛋架包括旋转轴和从左往右间隔设置于旋转轴上的多片蛋托支架；所述光照装置包括旋转电机、支撑架和多根延伸支架，所述延...
- 陈哲于建宁陈蓉
- 文献传递
- 重组蛋白CTB-P97R1对猪支原体肺炎活疫苗滴鼻免疫效果的评价被引量：2
- 2019年
- 为提高滴鼻免疫条件下猪支原体肺炎活疫苗的免疫效果,本研究设计引物扩增猪肺炎支原体P97R1基因,融合至霍乱毒素B亚单位(CTB)基因下游,构建了重组质粒p ET-CTB-P97R1。重组菌经IPTG诱导表达、分离纯化得到r CTB-P97R1重组蛋白。利用体外神经节苷脂(GM1)结合试验检测r CTB-P97R1的佐剂活性。随后将r CTB-P97R1与活疫苗混合后滴鼻免疫小鼠,免疫后采血和收集小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF),分别检测其中的特异性Ig G抗体和s Ig A抗体的水平评价免疫效果。结果显示,r CTB-P97R1可以特异性结合GM1,具有生物学活性。小鼠免疫后的血清Ig G抗体显著高于活疫苗对照组(p<0.01),同时产生了高水平的P97R1特异性Ig G抗体(p<0.01);小鼠BALF中的s Ig A抗体也显著高于活疫苗对照组(p<0.05)。结果表明,r CTB-P97R1能够显著增强经滴鼻免疫的猪支原体肺炎活疫苗的免疫效力,同时可提升P97R1的免疫应答,有望作为经黏膜免疫的猪支原体肺炎活疫苗的新型佐剂。
- 韦艳娜张珍珍王丽王佳陈蓉冯志新邵国青熊祺琰
- 关键词：霍乱毒素B亚单位佐剂猪支原体肺炎活疫苗
- 基于串联亲和层析法纯化并鉴定猪初乳中SIgA
- 2023年
- 分泌型免疫球蛋白A(SIgA)是黏膜免疫的主要效应分子,在临床上常常作为疾病早期诊断的靶标,此外,基于SIgA的治疗性单抗和靶向SIgA产生的黏膜疫苗也越来越受到关注。分离并纯化出完整且具有活性的SIgA是产品研发的前提。为了提高猪初乳中SIgA的纯化效率,本研究采用串联亲和层析,强阴离子柱和精细分子筛层析进行纯化,从10 mL初乳中获得3 mg具有活性的SIgA。使用Western blot对纯化的SIgA进行鉴定,结果表明,纯化的SIgA与抗猪的重链蛋白单抗和抗SC单抗均具有良好的反应性。使用ELISA测试SIgA与抗猪的IgA重链单抗的反应性,结果发现使用本方法纯化的SIgA较原先方法(即硫酸铵沉淀,DEAE52弱阴离子层析,SephadexG-200凝胶层析和多次亲和层析的纯化方法)具有更高的反应性。最后使用质谱鉴定纯化的蛋白,结果表明为猪的SIgA。本研究为从猪初乳中纯化SIgA建立了一种高效的纯化方法,也为其它来源的SIgA的纯化提供参考。
- 杨悦王锐甘源郝飞郝飞张磊邵国青张磊陈蓉邵国青
- 关键词：SIGA纯化
- AMH及其相关基因在鸭不同等级卵泡中的表达被引量：7
- 2018年
- 本研究旨在分析AMH及其相关基因在鸭不同等级卵泡中的表达特征,为水禽卵泡发育的分子机制研究积累基础资料。以连城白鸭为研究对象,通过定量PCR技术分别检测了卵巢不同等级卵泡中AMH基因及其相关调控基因的表达情况。结果表明,随着卵泡的发育,AMH及其相关基因AMHR2、BMP6、SF1、GATA4和WT1的表达量逐渐降低,而CYP19A1基因的表达量逐渐升高,SOX9和FSHR基因的表达量保持不变。我们推测AMH基因在鸭等级前卵泡中的高表达量可能有助于维持颗粒细胞未分化的状态,且可能是通过抑制FSHR信号通路来实现的。
- 陈蓉应诗家陈哲于建宁施振旦
- 关键词：卵泡基因表达
- 蛋车式孵化器用光照装置
- 本实用新型提供一种蛋车式孵化器用光照装置，所述蛋车式孵化器包括箱体，箱体底部设有轨道，箱体内放置有多辆蛋车，所述蛋车滑设于轨道上，所述蛋车包括立方体框架，所述光照装置包括电机、轮毂、自所述轮毂向四周发散性延伸的多根辐条，...
- 陈哲于建宁陈蓉施振旦
- 文献传递
- 光照在禽蛋孵化期的应用和研究进展被引量：2
- 2018年
- 光照刺激具有改善禽蛋孵化性能的潜能。文章综述了光照对胚胎发育、孵化率、雏禽生长的影响,探讨了光色、光照周期对孵化效果的影响,以及生产中的优化选择,重点论述了光照影响胚胎认知能力、生物钟节律、生长轴基因表达和激素分泌三方面的研究成果,阐明了光照影响孵化的潜在作用机制,为光照在禽蛋孵化中的应用提供理论基础。
- 陈哲陈永霞于建宁陈蓉雷明明施振旦
- 关键词：光照孵化
- 半固体培养法制备非洲猪瘟病毒pA104R蛋白的单克隆抗体
- 2024年
- 为了快速、高效制备非洲猪瘟病毒(ASFV)单克隆抗体,本研究通过大肠杆菌系统表达并纯化了ASFV重组蛋白pA104R。以ASFV重组蛋白pA104R为抗原,分别比较了CpG ODN联合氢氧化铝佐剂和常规弗氏佐剂两种免疫策略,并重点比较半固体培养法和常规有限稀释法来制备ASFV pA104R单克隆抗体的效率。结果显示,本研究获得了相对分子质量为3.5×104的ASFV重组可溶性蛋白pA104R,通过其与CpG ODN联合氢氧化铝佐剂免疫小鼠,在第21 d即可达到融合要求,本试验方法(重组蛋白pA104R与CpG ODN联合氢氧化铝佐剂免疫)较重组蛋白pA104R与常规弗氏佐剂免疫节省14 d时间。通过半固体培养法筛选单克隆的试验周期比有限稀释法缩短28 d,并减少了亚克隆的工作量。半固体培养法获得5株阳性杂交瘤细胞,挑选效价较高的3株(9A4、9H6、11F5)进行鉴定,重链均为IgG,轻链均为KAPPA。纯化后的3株单克隆抗体针对pA104蛋白和全病毒蛋白质的效价分别达1∶160000~1∶320000和1∶200~1∶400。本研究优选了CpG ODN联合氢氧化铝佐剂结合半固体培养法筛选pA104R的单克隆抗体,为单克隆抗体制备提供了快速高效的新策略。
- 刘蓓蓓韦艳娜韦艳娜谢星陈蓉郝飞张珍珍倪博袁厅郝飞
- 关键词：非洲猪瘟病毒单克隆抗体
