曾林立
- 作品数：15 被引量：43H指数：4
- 供职机构：第三军医大学西南医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金重庆市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 白藜芦醇抑制A549人肺腺癌细胞增殖与IGF-ⅠR的关系被引量：2
- 2011年
- 目的探讨白藜芦醇对人肺腺癌A549细胞增殖的抑制效应及其与IGF-ⅠR的关系。方法以人肺腺癌A549细胞株为研究对象,采用MTT方法测定细胞增殖,用RT-PCR与免疫印迹方法测定IGF-Ⅰ受体mRNA与蛋白表达水平。结果 2.5～15 nmol/L IGF-Ⅰ可显著促进A549细胞增殖(P<0.05),给予12.5、25.0、50μmol/L白藜芦醇对A549细胞增殖具有明显抑制作用(P<0.05)。白藜芦醇(6.25～50μmol/L)与10 nmol/L IGF-Ⅰ共作用于A549细胞,均可抑制IGF-Ⅰ的促A549细胞增殖作用,其中尤以25、50μmol/L白藜芦醇的抑制增殖作用显著(P<0.05),白藜芦醇可有效降低IGF-ⅠR mRNA与蛋白表达。结论白藜芦醇可通过降低IGF-ⅠR mRNA与蛋白表达有效抑制IGF-Ⅰ介导的A549肺癌细胞增殖。
- 朱剑武夏蕾杨剑罗维李娟周芊曾林立王东杨镇洲
- 关键词：白藜芦醇胰岛素样生长因子-1胰岛素样生长因子-1受体人肺腺癌细胞A549
- RNA干扰骨髓基质细胞和/或骨髓瘤细胞APE1表达对共培养骨髓瘤细胞增殖及凋亡的影响
- 2011年
- 目的探讨RNA干扰骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)及骨髓瘤细胞株U266 APE1表达对共培养的U266细胞增殖、凋亡的影响。方法将构建的APE1 siRNA表达载体分别导入BMSCs及U266细胞中。Westernblot法检测2种细胞中APE1蛋白表达;2株细胞经APE1 siRNA处理后采用Transwell插入式培养皿构建BMSCs与骨髓瘤细胞共培养模型,采用MTT法、Annexin V-PE/7-AAD双染法、RT-PCR分别检测U266细胞增殖、凋亡及细胞中IL-6/IL-8 mR-NA表达水平。结果 APE1 siRNA可明显降低BMSCs及U266细胞APE1蛋白表达,与对照组相比差异具有统计学意义(P<0.01);在APE1 siRNA同时处理BMSCs和U266细胞后的共培养体系中,U266细胞增殖抑制及细胞凋亡明显高于单一细胞APE1敲低组及APE1 siRNA未处理组(P<0.01);U266细胞中IL-6及IL-8 mRNA表达水平亦降低(P<0.01)。结论抑制APE1在BMSCs和/或骨髓瘤细胞株U266的表达,可明显抑制共培养体系中U266细胞的增殖活性并促进其凋亡。
- 谢家印杜佳李梦侠卿毅关伟曾林立王东
- 关键词：多发性骨髓瘤RNA干扰
- 人脱嘌呤脱嘧啶核酸内切酶hAPE1融合蛋白的构建、纯化及其功能的初步研究被引量：6
- 2009年
- 目的构建人脱嘌呤脱嘧啶核酸内切酶(hAEP1)原核表达载体,在大肠杆菌中表达并纯化融合蛋白,对其活性进行初步分析。方法用PCR法扩增hAEP1基因,克隆入pET28a载体中,获得重组质粒pET28a-hAPE1。将重组质粒转化入E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达并鉴定。用His亲和层析技术进行蛋白纯化,得到hAPE1融合蛋白。用Western blot及电泳迁移率变动分析实验分析hAPE1融合蛋白的抗原性及活性。结果所构建的重组质粒pET28-hAPE1经双酶切及DNA测序鉴定表明构建正确。IPTG诱导表达后,经SDS-PAGE及Western blot鉴定均在预期位置出现阳性条带,His亲和层析纯化后得到hAPE1融合蛋白经SDS-PAGE及Western blot鉴定正确。Western blot及电泳迁移率变动分析实验证明hAPE1融合蛋白具有抗原性、AP修复及氧化还原活性。结论成功构建了人脱嘌呤脱嘧啶核酸内切酶的原核表达载体pET28a-hAPE1,并在E.coli BL21(DE3)中高效表达和纯化得到有抗原性及活性的hAPE1融合蛋白。
- 戴楠王东李梦侠曹晓静曾林立廖玲杨宇馨
- 关键词：原核表达蛋白纯化
- 口服二乙基亚硝胺诱导建立同系小鼠肝硬化模型被引量：1
- 2015年
- 目的尝试采用二乙基亚硝胺(DEN)喂饲小鼠成功诱导和建立小鼠肝硬化模型。方法选取纯系C57BL/6小鼠60只,随机分为实验组和对照组,各30只。实验组小鼠喂饲含DEN的饮水诱发肝硬化,对照组小鼠喂饲蒸馏水。采用HE染色、Masson染色等方法观察两组小鼠肝脏组织形态、纤维化,并连续30 d监测两组小鼠体质量变化,用行为学方法观察两组小鼠的自主运动差异判断其精神状态变化。结果随着喂饲DEN时间的增加,HE染色和Masson染色均显示实验组小鼠肝脏纤维化组织增生,肝硬化程度逐渐加重,各时间点的半定量评分系统评分与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。实验组小鼠的体质量随着DEN喂饲时间的增加而明显降低,而对照组小鼠的体质量却略有增加,两组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。实验组小鼠的运动总路程少于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 DEN喂饲可诱发C57BL/6小鼠逐渐从肝纤维化到肝硬化,最终成功建立了前所未有的可作为研究人类肝硬化的一种理想动物模型。
- 谭嘉鑫游逾曾林立赖洁娟张玉君别平白莲花
- 关键词：二乙基亚硝胺小鼠
- APE1在PDT治疗非小细胞肺癌中的表达变化及疗效的关系被引量：2
- 2009年
- 目的探讨光动力疗法(PDT)治疗非小细胞肺癌对脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶(APE1)表达的影响及疗效的关系。方法以Western blot分析PDT处理调控作用影响A549细胞APE1表达变化的时效关系,构建Ad5/F35-APE1 siRNA腺病毒干扰载体,通过Western blot检测其对APE1蛋白的敲低作用,设空白对照组、Ad5/F35-APE1 siRNA感染组、PDT组和Ad5/F35-APE1 siRNA+PDT组,采用MTT法观察不同组对A549细胞的增殖抑制作用。结果PDT诱导A549细胞APE1蛋白表达增强在24h达到高峰,10MOI Ad5/F35-APE1 siRNA重组腺病毒感染A549细胞48h抑制APE1表达最为显著,MTT检测显示随光照剂量的增加增殖抑制作用显著增强,同时Ad5/F35-APE1 siRNA+PDT组对A549细胞具有明显的增殖抑制作用。结论Ad5/F35-APE1 siRNA重组腺病毒能有效抑制PDT诱导的肺癌细胞APE1表达增加,明显增强PDT对肺癌细胞的杀伤效应。
- 杨镇洲曾林立张云嵩李梦侠李增鹏王东王阁
- 关键词：APE1光动力疗法肺腺癌
- 多器官源性成体NG2阳性干细胞群的分离纯化方法
- 本发明公开了一种从成体多器官中分离纯化NG2阳性干细胞群的有效方法，先从成体中枢神经系统、眼虹膜、骨髓、心脏、肝脏、胰腺、肺脏或肾脏组织中消化分离获得悬浮单个细胞群，再通过30%和70%percoll分离液离心分离获得N...
- 白莲花帅领赖洁娟曾林立张玉君李瑶琛张宏宇别平
- 文献传递
- APE1/Ref-1表达在小鼠放射性肺损伤形成中的变化特点被引量：3
- 2009年
- 目的观察小鼠放射性肺损伤过程中DNA损伤修复关键酶脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶/氧化还原因子(apurinic/aprimidinic endonuclease/redox factor-1,APE1/Ref-1)表达的动态变化,初步探讨APE1/Ref-1在放射性肺损伤发生、发展中的作用。方法雌性昆明小鼠30只,随机分为照射组18只和对照组12只。照射组用8MV直线加速器给予小鼠全胸20Gy单次照射,对照组佯装照射。在照射后1、3、7、14、28、56d共6个时相点,分批活杀小鼠(照射组3只,对照组2只),观察其全肺大体形态改变,取右肺组织,光镜下观察组织形态学变化,免疫组化SP法检测APE1/Ref-1;取左肺组织,Western blot方法检测APE1/Ref-1蛋白表达。结果正常小鼠肺组织上皮细胞和内皮细胞中APE1/Ref-1呈胞核表达为主,而在小鼠放射性肺损伤不同阶段肺组织上皮细胞和内皮细胞中APE1/Ref-1表达特征有所改变,呈核浆共同表达和胞浆表达为主;并且APE1/Ref-1表达呈现先增高后降低的趋势,照射后1d开始升高,3d达高峰,且明显高于对照组,此后随着小鼠放射性肺损伤发展逐渐降低,28d降至对照组水平,56d明显低于对照组。结论电离辐射可以刺激APE1/Ref-1蛋白的表达并使其表达发生由核内转向浆内和先增高后降低的特征改变,表明APE1/Ref-1可能在放射性肺损伤修复过程中起着重要作用。
- 余舒亮王东林俐卿毅杨宇馨廖玲李梦侠曾林立李增鹏
- 关键词：APE1/REF-1电离辐射放射性肺损伤
- 小鼠放射性肺损伤动物模型的建立与鉴定被引量：11
- 2010年
- 目的建立放射性肺损伤小鼠模型和有效的定量评价方法。方法雌性昆明种小鼠72只,完全随机分为对照组(18只)、照射组(54只)。全肺单次照射20Gy,于照射后1、3d和1、2、4、8周取照射组及相同鼠龄对照组小鼠肺组织和静脉血,分别用HE、Masson染色,在光镜下观察组织病理改变和胶原纤维沉积情况,用酶联免疫(ELISA)法测定血清转化生长因子-β1(TGF-β1)含量。结果与对照组比较,照射组小鼠肺组织早期以渗出为主,表现为肺间质及肺毛细血管充血、水肿,照射后期以肺泡间隔及部分肺泡腔内可见纤维素样渗出物为特征。同时,ELISA法显示照射后7d血清TGF-β1含量[(18.46±1.678)ng/mL]明显增高,与对照组[(9.61±2.027)ng/mL]比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论通过病理形态学和血清学指标证实成功地建立了放射性肺损伤小鼠模型,该模型较好地模拟了放射性肺损伤的发生、发展过程。
- 周芊王东李梦侠曾林立王阁杨镇洲
- 关键词：放射性肺损伤小鼠动物模型转化生长因子-Β1
- 肿瘤转移抑制基因Nm23-H1融合蛋白的表达纯化及其功能的初步研究被引量：4
- 2010年
- 目的利用人Nm23-H1基因原核表达载体,在大肠杆菌中表达并纯化融合蛋白,并对蛋白其活性进行初步分析。方法将重组质粒pET28a-Nm23-H1转化入E.coliBL21(DE3),IPTG诱导表达并鉴定。用金属螯合层析技术进行蛋白纯化,得到Nm23-H1融合蛋白,用SDS-PAGE及Western blot鉴定纯化蛋白,并用RP-HPLC法、电泳迁移率变动分析实验检测Nm23-H1融合蛋白的核苷二磷酸激酶(NDPK)活性及核酸内切酶(AP)修复活性。结果转化溶原菌后能够表达目的蛋白,蛋白表达量高,为可溶性蛋白。Ni2+柱纯化后得到Nm23-H1融合蛋白经SDS-PAGE及Western blot鉴定正确。RP-HPLC法就及电泳迁移率变动分析实验证明所纯化的Nm23-H1融合蛋白具有NDPK活性,不具有AP修复活性,但可以增加APE1蛋白的AP修复活性。结论利用原核表达载体pET28a-Nm23-H1在E.coliBL21(DE3)中高效表达和纯化得到具有NDPK活性,但无AP修复活性的Nm23-H1融合蛋白,此蛋白可以增强APE1蛋白的AP修复活性,共同参与细胞的DNA损伤修复。
- 张志敏杨雪琴许文戴楠曾林立李增鹏王东王阁
- 关键词：NM23-H1基因原核表达蛋白纯化
- 三羟基异黄酮联合放疗对人肺腺癌细胞增殖凋亡的影响
- 2011年
- 目的观察三羟基异黄酮(Genistein)联合放疗对人肺腺癌细胞A549增殖凋亡及其Ape1/Ref1蛋白的影响。方法 1组单用0、10、30、60、90μmol/L的Genistein处理A549细胞48 h,另1组用同样浓度的Genistein预处理24 h后予以直线加速器放疗8 Gy,继续培养24 h后用噻唑蓝比色法(MTT)检测各组活细胞数,确定最适Genistein联合放疗的浓度。用流式细胞仪检测对照组、单纯放疗组(IR 8 Gy)、单纯Genistein组(GEN 30μmol/L)、Genistein+IR组(GEN30μmol/L+IR 8 Gy)的细胞凋亡;采用Western blot法检测各组细胞中Ape1/Ref1蛋白表达。结果 30、60、90μmol/L的Genistein联合放疗比单用相应浓度的Genistein处理细胞增殖抑制率高(P<0.05),但低浓度10μmol/L联合放疗与单纯放疗比较差异不明显[(26.67±1.26)%vs(24.70±0.72)%,P=0.102]。IR组、Genistein+IR组早期凋亡率较对照组明显增高[(30.88±7.63)%、(42.98±1.46)%vs(6.80±0.98)%,P<0.05],加药组较对照组无明显统计学差异[(12.96±4.99)%vs(6.80±0.98)%,P=0.143)];与对照组、单纯放疗组、单纯加药组比,Genistein+IR组中Ape1/Ref1的表达明显下调。结论三羟基异黄酮可增加放疗对A549细胞的增殖抑制作用,可能与减少Ape1/Ref1蛋白的表达有关。
- 周芊李少林杨镇洲王东李梦侠曾林立
- 关键词：三羟基异黄酮人肺腺癌A549细胞
