李丛胜
- 作品数：3 被引量：1H指数：1
- 供职机构：西南大学药学院更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 幽门螺杆菌HP0762蛋白的原核表达纯化及多克隆抗体制备被引量：1
- 2010年
- 目的:表达和纯化幽门螺杆菌HP0762蛋白,并制备该蛋白的多克隆抗体。方法:从幽门螺杆菌SS1中经PCR扩增得到了hp0762基因,将其克隆至含有6×His编码序列的原核表达载体pET-28a(+)中,再将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),在IPTG诱导下进行蛋白表达;用HiTrap Chelating HP亲和柱纯化重组蛋白,Western印迹进一步鉴定;以纯化后的蛋白为抗原免疫新西兰大耳白兔,制备该蛋白的多克隆抗体;用ELISA和Western印迹检测抗血清。结果:目的蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)中获得了可溶性表达,纯化后纯度可达90%以上;制备了针对HP0762重组蛋白的抗血清,抗体ELISA效价为1:256000,Western印迹分析表明该抗体能特异性识别内源性HP0762。结论:完成了HP0762蛋白的原核高效表达与纯化,并制备了其高效价的多克隆抗体,为进一步对其进行疫苗研制与基因功能研究奠定了基础。
- 李丛胜邱炎王艳春韩秀萍陶好霞徐兴然刘纯杰
- 关键词：幽门螺杆菌原核表达多克隆抗体
- 幽门螺杆菌hp0596基因缺失突变体的构建
- 2010年
- 目的:构建幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)hp0596基因缺失突变体,为进行hp0596基因功能研究奠定基础.方法:利用PCR技术,从H.pylori 26695基因组分别扩增得到hp0596基因的上游同源臂和下游同源臂,与两端带有FRT位点的氯霉素抗性基因片段共同构建同源重组载体;以重组载体为模板扩增打靶片段,将其转化入H.pylori 26695;在抗生素选择压力下,打靶片段和菌体基因组发生同源重组,通过氯霉素抗性筛选得到带有抗性标记的重组菌.结果:构建的突变载体经限制性内切酶酶切分析显示,产生的条带与预计结果完全一致.PCR方法扩增突变株0596,cmr基因显示,0596基因已经被完全敲除,经DNA测序,RNA水平,蛋白质水平证实筛选得到了0596基因缺失的H.pylori26695△0596突变株.连续培养7代后,H.pylori26695△0596突变株具有良好的稳定性.结论:获得了H.pylori26695△0596基因缺失突变体.
- 韩秀萍展德文王芃李丛胜袁盛凌陶好霞张丽邱炎李家奎刘纯杰
- 关键词：幽门螺杆菌突变体
- 幽门螺杆菌HP0596的结构和功能关系的研究
- 幽门螺杆菌/(Helicobacter pylori, H.pylori/)是一种微需氧的革兰氏阴性菌,主要寄生在人胃粘膜表面的黏液层,可以导致慢性胃炎、胃溃疡、十二指肠溃疡、胃腺癌和胃淋巴瘤等胃部疾病,被世界卫生组织列...
- 李丛胜
- 关键词：幽门螺杆菌二聚体
- 文献传递
