王加兰
- 作品数：5 被引量：50H指数：4
- 供职机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划哈尔滨市科技攻关计划项目更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生更多>>
- 光滑型布鲁杆菌抗体竞争ELISA检测方法的建立被引量：10
- 2009年
- 用提纯的布鲁杆菌疫苗株M5-90光滑型脂多糖(S-LPS)作为包被抗原,以针对S-LPS C表位的单抗16C5为竞争抗体,建立了检测光滑型布鲁杆菌血清抗体的cELISA方法。通过对临床507份牛血清样本进行检测,结果经统计分析表明,cELISA与RBT和IDEXX公司的iELISA试剂盒符合率分别为84.7%和91.2%。其中142份样品与Svanova公司的cELISA试剂盒和黑龙江省动物监察所提供的iELISA试剂盒的符合率分别为97.2%和94.4%。κ统计显示,该cELISA方法与RBTI、DEXX公司的iELISA试剂盒、Svanova公司的cELISA试剂盒和黑龙江省动物监察所提供的iELISA试剂盒的κ值均大于0.5,符合率很高。该cELISA方法为布鲁菌病的检测提供了一种有效的血清学方法,并且能够有效地排除常见的革兰阴性菌引起的假阳性结果。
- 王加兰胡森高红霞郑孝辉步志高
- 关键词：布鲁杆菌单克隆抗体
- 流产布氏杆菌S19突变株构建及在小鼠感染模型中的免疫保护评估被引量：9
- 2009年
- 通过构建标记疫苗株来解决流产布氏杆菌(B.abortus)鉴别诊断方面的缺陷,本研究以bp26基因作为重组靶位点,S19为亲本,利用bp26基因ORF外侧序列作为同源重组序列,卡那霉素抗性基因(Kanr)为抗性筛选标记,通过双交叉重组筛选获得bp26基因缺失突变的重组S19株,命名为S19-△26。小鼠感染结果表明,突变株S19-△26的残留毒力与亲本株S19相比较没有发生明显改变,康复时间约为15周,突变株S19-△26、亲本株S19和B.abortus强毒株S544接种小鼠后的第3周能检测出"O"抗原的特异性抗体,而第6周开始S19和S544接种小鼠BP26特异性抗体明显升高,S19-△26接种的小鼠一直没检测到BP26特异性抗体。小鼠免疫保护试验显示,脾脏分离CFU数比空白对照要低3log10,S544攻击后脾脏细菌分离数表明突变株具有与亲本疫苗株免疫保护性无明显差异。结果表明,S19-△26免疫能够通过血清学方法与野生型B.abortus感染后的免疫反应相区别,具备作为标记疫苗的潜力。
- 郑孝辉胡森王加兰刘林涛高红霞步志高
- 关键词：S19小鼠模型
- 马耳它布氏杆菌bp26基因缺失株的构建及鉴定被引量：17
- 2009年
- 为了建立马耳他布氏杆菌M5-90株弱毒疫苗株与野生株的鉴别诊断,本研究以bp26基因作为重组靶位点,以M5-90为亲本,利用bp26基因ORF外侧序列作为同源序列,将卡那霉素抗性基因(Kanr)整合到细菌基因组中,双交叉重组阳性菌株,经SDS-PAGE和western blot试验表明迁移率约为29ku的BP26蛋白在亲本菌中表达并可被鼠抗BP26高免血清识别,而突变株M5-90-26反应结果为阴性,表明BP26蛋白在突变疫苗株M5-90-26中未表达。M5-90-26具备从血清学角度区分M5-90-26免疫与野生型布氏杆菌感染,对布氏杆菌病防制、监测及净化具有重要的意义。
- 胡森郑孝辉王加兰张倩刘文兴王喜军乔祖建刘林涛高红霞王君伟步志高
- 关键词：突变株
- 光滑型布鲁氏菌LPS单克隆抗体的制备及鉴定被引量：17
- 2009年
- 为制备抗布鲁氏菌单克隆抗体(MAb),本研究用灭活的布鲁氏菌疫苗M5-90株免疫BALB/c小鼠,利用细胞融合技术获得杂交瘤细胞。以布氏杆菌疫苗株M5-90、S-19及小肠结肠炎耶尔森菌O∶9的脂多糖(LPS)分别作为抗原包被酶标板,对杂交瘤细胞进行筛选,获得两株稳定分泌抗光滑型布氏杆菌LPS(S-LPS)MAb的细胞4G6和16C5。特异性分析表明,MAb 4G6除与耶尔森O∶9全菌体有轻微的交叉反应外与其它革兰氏阴性菌无交叉,而16C5完全排除了与其他各菌的交叉反应。Ig亚型分析表明,所制备MAb的轻链亚类均为κ,4G6重链为IgM,16C5重链为IgG3。用Protein G亲和层析纯化MAb 16C5腹水并初步用于竞争ELISA方法,检测布氏杆菌抗体水平,结果表明了该实验方法的有效性。本研究制备的MAb 16C5具有高度的特异性和敏感性,排除了与其他革兰氏阴性菌的交叉反应,为建立一种诊断布鲁氏病的快速、有效、敏感的方法奠定了有力的基础。
- 王加兰胡森郑孝辉范蕾步志高
- 关键词：布鲁氏菌单克隆抗体
- 光滑型布鲁氏菌LPS单克隆抗体的制备及竞争ELISA方法的建立
- 动物感染光滑型(S)布鲁氏菌后针对其表面脂多糖(Lipopolysaccharides,LPS)产生的抗血清可用于人类及动物的布鲁氏菌病的诊断。S-LPS O-链的化学结构是一种4,6-双脱氧-4甲酰胺基-α-D-吡喃甘...
- 王加兰
- 关键词：布鲁氏菌脂多糖单抗竞争ELISA
- 文献传递
