覃君君
- 作品数：2 被引量：0H指数：0
- 供职机构：湖南农业大学生物安全科学技术学院更多>>
- 发文基金：北京市自然科学基金国家现代农业产业技术体系建设项目中央级公益性科研院所基本科研业务费专项更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 基于pHY300PLK的分泌表达载体的构建及外源基因的表达
- 穿梭载体pHY300PLK常作为出发质粒被用于构建表达载体。我们将地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)高温a-淀粉酶基因(amy)表达单元(包括启动子、信号肽及淀粉酶基因)克隆到pHY300PLK...
- 覃君君
- 关键词：表达质粒Α-淀粉酶纤维素酶
- 文献传递
- 基于pHY300PLK的分泌表达载体的构建
- 2013年
- 用PCR、酶切、连接方法将地衣芽孢杆菌耐高温α淀粉酶基因(amy)表达单元(包括启动子、信号肽及淀粉酶基因)克隆到pHY300PLK中,并用反向PCR、同源重组方法,去除重组质粒的氨芐抗性基因,以利用α淀粉酶基因的启动子和信号肽高效表达自身蛋白及外源蛋白。结果表明:连入了α淀粉酶表达单元的pHY300PLK,即pAMY质粒能够分泌表达α淀粉酶,且去除了氨苄抗性基因的pAMY质粒,即pAMY1质粒能更有效的表达α淀粉酶;将纤维素酶基因连接到pAMY1质粒中淀粉酶信号肽的下游,得到的重组质粒pCEL能分泌表达纤维素酶,表明α淀粉酶基因的启动子和信号肽不仅能启动自身蛋白的表达,也能启动外源蛋白的表达;重组菌的生长情况与质粒拷贝数的比较表明,与PAMY质粒相比去除了氨苄抗性基因的pAMY1质粒对重组菌的生长没有影响,且pAMY1质粒在重组菌的复制效率更高,能更高效的表达蛋白,以上结果证明pHY300PLK克隆质粒已成功改造成表达质粒,下一步可用于更多外源基因的分泌表达。
- 覃君君江均平李春红戴良英
- 关键词：地衣芽孢杆菌Α淀粉酶同源重组表达质粒纤维素酶分泌表达
