刘世海
- 作品数：36 被引量：63H指数：5
- 供职机构：青岛大学更多>>
- 发文基金：山东省自然科学基金国家自然科学基金中国科学院西部之光基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 一种检测细胞NF-κB信号通路的PCR试剂及其应用
- 本发明提供了一种检测细胞NF-κB信号通路的PCR试剂及其应用，本发明所述检测试剂包括检测CD40基因、IL10基因、CD83基因、EGFR基因等相关基因和内参ACTB基因、GAPDH基因、HPRT1基因的PCR反应引物...
- 刘世海梁军潘华政王丽萍刘相萍梁晔姚如永隋爱华刘自民
- 文献传递
- 腺病毒携带IL-12增强抗原致敏树突细胞在肝癌基因治疗中的研究
- 2014年
- 目的:近年来通过应用白介素-12治疗肿瘤取得良好效果,因此对国内外应用腺病毒携带IL-12增强抗原致敏树突细胞在肝癌基因治疗中的研究进展进行总结,以探索更为可行治疗方法。方法:运用Pubmed、Elsevier Sciencedirect、CNKI及万方全文数据库检索系统,以腺病毒,IL-12,肝癌,树突细胞为关键词,检索2008-01至2012-11月发表的文献。纳入标准:1)IL-12的生物学特性,在抗肿瘤过程中的免疫作用,2)应用腺病毒携带IL-12对抗肝癌治疗研究,3)肿瘤抗原致敏树突细胞对肿瘤的影响。根据纳入标准分析文献26篇。结果:通过腺病毒携带IL-12可以增强肿瘤抗原致敏树突细胞的免疫应答。并通过诱导肿瘤细胞的凋亡,减少新生血管的生成而对肿瘤产生直接抑制,有效抑制肝癌的生长和转移。结论:本文通过对IL-12的生物学特征、抗肿瘤通路、作用机制及在腺病毒介导下肿瘤抗原致敏树突细胞研究进展的概述,为腺病毒携带IL-12作为肝癌的基因治疗进一步提供理论依据和探索,期待在将来应用IL-12为基础的基因治疗一定会为包括肝癌在内的肿瘤治疗提供新的途径。
- 崔清昱王静秦万民刘世海冯玉洁孙传东
- 关键词：腺病毒IL-12肝癌树突细胞
- N-乙酰葡萄糖胺在制备用于诱导非小细胞肺癌细胞凋亡的制剂中的用途
- 本发明提供了N-乙酰葡萄糖胺在制备用于诱导非小细胞肺癌细胞凋亡的制剂中的用途，本发明从动物水平、细胞水平和分子水平的实验明确了N-乙酰葡萄糖胺能够与肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体协同作用，从而增强TRAIL对非小细胞肺癌的...
- 梁晔徐文华周泉王丽萍刘世海迟静薇隋爱华王哲颖
- 一种检测肝癌核心信号分子的PCR检测试剂及其应用
- 本发明提供了一种检测肝癌核心信号分子的PCR检测试剂及其应用，本发明所述PCR检测试剂包括检测ADAM17基因、AKT1基因、ANGPT2基因、BAX基因、BCL2基因和BCL2L1基因等相关基因和内参基因等的PCR反应...
- 刘世海贺桂芳刘畅畅蔡铎潘华政
- BMP2和TGFβ3双基因真核表达载体的构建被引量：2
- 2011年
- [目的]构建骨形态发生蛋白BMP2和转化生长因子TGFβ3双基因真核表达载体。[方法]从人胚胎组织提取总RNA,反转录成cDNA,以pGEMT/BMP2和反转录的cDNA为模板,PCR扩增出BMP2和TGFβ3两个基因全长,将两个基因片段分别定向连入双基因真核表达载体pIRES;用酶切的方法筛选出阳性重组质粒,并进行测序鉴定。[结果]酶切鉴定证明已将BMP2和TGFβ3两个基因连入载体中,测序结果完全正确。[结论]成功构建pIRES-BMP2/TGFβ3双基因真核表达载体。
- 马小松刘金钊王昌耀王英振刘世海刘相萍
- 关键词：BMP2TGFΒ3真核表达载体
- 人同源盒基因HoxB4真核表达载体的构建及鉴定
- 2011年
- 本研究旨在构建人同源盒基因HoxB4真核表达载体并进行鉴定,为进一步研究HoxB4的作用提供物质基础。采用RT-PCR的方法从健康产妇脐血单个核细胞中扩增出该基因,并将HoxB4的PCR产物用EcoRI和BamHI双酶切后连接到用EcoRI和BamHI双酶切的带有EGFP编码序列和内部核糖体转入位点(IRES)的真核表达载体pIRES2-EGFP中,重组质粒在大肠杆菌DH5α内扩增后,对其进行双酶切及测序鉴定以证实载体构建成功。结果表明,双酶切和质粒测序结果证明HoxB4基因正确的连接到真核表达载体pIRES2-EGFP中,开放阅读框架正确,pIRES2-EGFP/HoxB4真核表达载体构建成功。结论 :利用PCR,DNA重组等分子生物学技术,成功构建了pIRES2-EGFP/HoxB4真核表达载体,为探讨HoxB4基因在造血干细胞的增殖和分化的调控功能提供了实验基础。
- 李田兰赵春亭张忠广刘竹珍刘世海孟冬梅张元峰
- 关键词：同源盒基因HOXB4重组质粒真核表达载体
- 重组分泌型TRAIL腺病毒载体的构建及鉴定被引量：3
- 2011年
- 目的构建表达分泌型肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）基因的重组腺病毒载体。方法采用PCR技术从人肝脏cDNA文库中扩增出编码114-281位氨基酸的TRAIL基因片段。将扩增的TRAIL插入含有分泌性信号肽IL-2的腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV-IL-2中,将其命名为pAdTrack-CMV-IL-2-TRAIL。pAdTrack-CMV-IL-2-TRAIL经PmeⅠ线性化后,电转化入转化了pAdEasy-1的BJ5183细胞。筛选重组腺病毒质粒pAd-sTRAIL。经HEK293细胞包装后得到复制缺陷型重组腺病毒Ad-sTRAIL,氯化铯密度梯度离心纯化Ad-sTRAIL病毒,并测定病毒滴度。采用RT-PCR法和免疫荧光技术分别检测目的基因的表达。结果纯化后的Ad-TRAIL病毒滴度为3.12×10^15pfu/L。经RT-PCR扩增出长104 bp的基因片段。免疫荧光检测到了目的基因在U251细胞的高效表达。结论成功构建了重组分泌型TRAIL腺病毒载体,为下一步应用于脑肿瘤的基因治疗打下了基础。
- 王衍刚窦以河刘世海姚如永隋爱华刘相萍
- 关键词：TNF相关凋亡诱导配体重组腺病毒聚合酶链反应
- 转化生长因子-β1通过诱导上皮-间充质转化促进乳腺癌细胞侵袭转移的研究被引量：7
- 2015年
- 目的 探讨转化生长因子-β1（TGF-β1）通过诱导乳腺癌细胞上皮-间充质转化（EMT）影响细胞侵袭迁移能力及相关分子机制.方法 5μg/L TGF-β1作用于人乳腺癌细胞株MDA-MB-435S,诱导细胞发生EMT后,应用脂质体2000瞬时转染小干扰RNA（siRNA）沉默Smad2的表达,观察乳腺癌细胞的形态学变化,并通过Western blot检测Smad2静默前后细胞角蛋白、E-钙黏素、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、波形蛋白、Smad2、磷酸化Smad2（p-Smad2）的表达变化;通过Transwell实验检测细胞侵袭迁移能力的改变.结果 TGF-β1作用72h后,乳腺癌细胞株MDA-MB-435S部分细胞由多角形转变为成纤维样细胞形态,间充质细胞标志物α-SMA、波形蛋白表达分别上调了3.86倍和1.17倍（P＜0.01）;上皮细胞标志物细胞角蛋白、E-钙黏素蛋白表达分别下降了63％和70％ （P ＜0.01）,p-Smad2表达明显上调1.2倍（P＜0.01）;侵袭的细胞数（79.20 ±7.35）明显多于空白组（48.93±5.43）,差异有统计学意义（P＜0.05）.沉默Smad2的表达后细胞角蛋白表达升高了44％（P＜0.01）,波形蛋白表达下降了59％ （P ＜0.01）,干扰组细胞侵袭数目（54.34 ±6.09）显著低于对照组（75.09 ±4.98）,差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 体外TGF-β1能够诱导乳腺癌细胞EMT,增强乳腺癌细胞侵袭转移能力;Smad2信号转导通路在乳腺癌细胞EMT中起重要作用.
- 张琳吕志栋刘相萍刘世海姚如永孙明王海波
- 关键词：乳腺癌上皮-间充质转化转化生长因子-Β1SMAD2
- 人同源盒基因HOXB4慢病毒载体的构建及其在人脐带间充质干细胞中的表达(英文)被引量：4
- 2012年
- 本研究构建人同源盒基因(homeobox gene)HOXB4的慢病毒载体,探讨慢病毒介导的HOXB4感染人脐带间充质干细胞后的变化。利用PCR扩增获得HOXB4,并克隆入慢病毒穿梭载体lenti-shuttle;运用4质粒慢病毒包装系统转染HEK293T细胞,48 h收获慢病毒lenti-HOXB4,并测定慢病毒滴度;将lenti-HOXB4感染人脐带间充质干细胞,在倒置荧光显微镜下观察细胞感染效果,确定最佳的病毒感染复数(MOI);同时,利用RT-PCR、免疫荧光染色、CCK-8、流式细胞术检测HOXB4的表达情况及对细胞生长的影响。结果表明:利用四质粒共转染293T细胞,成功获得lenti-HOXB4,测定的病毒滴度为3×108TU/ml;当MOI为20时,lenti-HOXB4对人脐带间充质干细胞具有较高的转染效率,达80%以上;感染lenti-HOXB4的人脐带间充质干细胞,在mRNA和蛋白水平上均检测到了目的基因的表达,其能促进脐带间充质干细胞的增殖;流式细胞术检测结果显示,HOXB4基因并未明显影响间充质干细胞的表面标志。结论:成功获得带有HOXB4基因的慢病毒并实现在脐带间充质干细胞中表达,HOXB4基因能促进脐带间充质干细胞的大量增殖,并未明显影响脐带间充质干细胞表面标志的表达。
- 乔艳赵春亭刘竹珍冯献启王丽刘世海
- 关键词：HOXB4人脐带间充质干细胞慢病毒载体
- CA19-9与K-ras基因突变联合检测诊断胰腺癌的价值被引量：1
- 2014年
- 目的探讨外周血糖链抗原19-9(CA19-9)及胰腺癌组织K-ras基因突变联合检测早期诊断胰腺癌的价值。方法选择31例胰腺癌行手术治疗的患者作为胰腺癌组,22例胰腺良性病变行手术治疗的患者作为良性组。采用电化学发光法检测两组外周血CA19-9水平,比较外周血CA19-9阳性(>39 U/mL)率。采用突变等位基因特异性扩增(PCR-MASA)法检测两组病变组织K-ras基因12密码子点突变情况,计算K-ras基因突变率。计算CA19-9、K-ras基因突变单一检测及联合检测对胰腺癌的诊断效能。结果胰腺癌组CA19-9阳性率为74.2%(23/31),K-ras基因突变率为80.6%(25/31)。胰腺癌组CA19-9阳性率及K-ras基因突变率均明显高于良性组(P均<0.05);CA19-9与K-ras基因联合检测诊断胰腺癌的特异性、阳性预测值及诊断准确性均高于CA19-9与K-ras基因单一检测。结论 CA19-9与K-ras基因联合检测诊断早期胰腺癌的价值高于二者单一检测。
- 刘香吉刘福国赵洁刘世海江月萍
- 关键词：胰腺肿瘤
