刘勤
- 作品数：15 被引量：43H指数：5
- 供职机构：第三军医大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技攻关计划重庆市自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生农业科学文化科学更多>>
- 转hCTLA4-IgG基因小鼠移植皮肤在糖尿病大鼠创面存活的延长
- 2006年
- CTLA4-IgG是呈分泌性表达的CTLA4胞外区与人IgG恒定区的融合分子,可有效阻断T细胞B7CD28共刺激信号通路,从而抑制T细胞活化、延长移植物存活.糖尿病溃疡创面难愈合是其高致病力和高致残率的主要原因,而及时有效的封闭创面是创面愈合的关键.异种(异体)皮肤是应用广泛的创面覆盖物,但免疫排斥反应是移植皮肤存活的主要障碍.通过建立糖尿病大鼠溃疡创面模型,研究表达人CTLA4IgG蛋白的转基因小鼠皮肤在糖尿病大鼠溃疡创面的存活及对创面愈合的影响.结果发现:糖尿病大鼠溃疡创面的自然愈合时间显著长于正常大鼠(41.7±7.4dvs18.5±6.9d,P<0.01),说明糖尿病大鼠及其溃疡模型已建立;在糖尿病大鼠创面,转基因皮肤存活时间为22.2±5.8d,显著长于野生型皮肤(8.2±1.8d,P<0.01);在转基因皮肤移植后27d,糖尿病大鼠创面已完全愈合,显著快于其自然愈合过程;在供、受体混合淋巴细胞反应(MLR)中,转基因皮肤移植受体的淋巴细胞对供体抗原的应答能力与野生型皮肤移植受体无显著差异.上述结果表明,移植皮肤表达人CTLA4IgG蛋白可显著延长其在糖尿病大鼠创面的存活时间,进而促进创面愈合,并对受体免疫系统无显著的全身性影响.
- 王勇葛良鹏倪勇刘勤魏泓
- 关键词：皮肤移植糖尿病大鼠
- 慢病毒介导HLA-G转基因小鼠的建立被引量：1
- 2012年
- 目的以慢病毒作为载体建立HLA-G转基因小鼠,为研究HLA-G与移植免疫提供模型动物。方法利用FUW载体,构建含有HLA-G编码序列的慢病毒表达载体FUW-HLA-G。用磷酸钙沉淀法将包装质粒psPAX2、PMD2.G与重组慢病毒载体质粒FUW-HLA-G共转染293FT细胞,包装成慢病毒。通过同步转染含有绿色荧光标记基因的慢病毒质粒FUGW为参照,测定FUW-HLA-G病毒液的滴度。用显微注射法将浓缩后的病毒液注射至FVB/N小鼠1-细胞期胚胎透明带下,建立HLA-G转基因小鼠。PCR鉴定转基因小鼠的基因整合,用RT-PCR检测转基因在转录水平的表达,用Western blot检测HLA-G蛋白的表达。结果载体BamHⅠ、EcoRⅠ双酶切结果和测序结果显示重组的慢病毒质粒与所设计的序列一致。浓缩和纯化后的病毒液滴度达到109TU/ml以上,符合用慢病毒制备转基因小鼠的要求。PCR筛选出阳性鼠6只,RT-PCR与Western blot检测结果表明HLA-G基因在F0和F1代转基因小鼠中均有表达。结论通过慢病毒介导的基因转移,成功建立了表达人HLA-G蛋白的转基因小鼠,为研究HLA-G的功能及其在器官或组织移植中的效应提供了动物模型。
- 王露露刘勤周晓杨刘昌峨王勇魏泓
- 关键词：HLA-G慢病毒转基因小鼠
- 医学实验动物学教学的改革与创新
- 2009年
- 医学实验动物学的学科特点和学科历史决定了其教学是一个长期摸索的过程，本教研室在平时教学过程中通过明确教学目标，完善教学大纲坚持教材改革不断充实教学内容，指定课程标准，统一课件，注重教学与科研相结合等手段对医学实验动物的教学进行了有益的改革收到良好效果。
- 刘昌峨刘勤曾本华王勇牛荣魏泓
- 关键词：医学实验动物学
- 重组慢病毒滴度的检测方法
- 本发明公开了慢病毒载体的滴度检测方法，具体为运用流式细胞分选法检测对照病毒滴度，将待测病毒与对照病毒在相同条件下同时感染相同数量的靶细胞，分别提取待测病毒与对照病毒感染后的靶细胞的总DNA，通过相对定量PCR检测获得待测...
- 魏泓王勇刘宇郭科男刘昌峨江雯周晓杨刘勤王露露
- 文献传递
- 敲低小鼠内源性CYP3A酶的shRNA分子、重组表达载体及其制备方法和应用
- 本发明公开了敲低小鼠内源性CYP3A酶的shRNA分子，其核苷酸序列如SEQIDNo.6所示，还公开了含有该shRNA分子的重组表达载体pRIME-CMV-eGFP-miR-shRNA以及该载体的制备方法，还公开了该sh...
- 王勇魏泓庞浩周晓杨王露露刘昌峨刘勤
- 文献传递
- 重组慢病毒滴度的检测方法
- 本发明公开了慢病毒载体的滴度检测方法，具体为运用流式细胞分选法检测对照病毒滴度，将待测病毒与对照病毒在相同条件下同时感染相同数量的靶细胞，分别提取待测病毒与对照病毒感染后的靶细胞的总DNA，通过相对定量PCR检测获得待测...
- 魏泓王勇刘宇郭科男刘昌峨江雯周晓杨刘勤王露露
- FQ-PCR在转基因产品检测中的应用研究进展被引量：7
- 2008年
- 实时荧光定量PCR(real-time fuorescent quantitative PCR,FQ-PCR)是近年来定量PCR技术中兴起的最新定量检测技术,因其具有灵敏性高、特异性强、结果精确、反应快速、安全可靠等优点,现已广泛应用于医学和生命科学的各个研究领域,论文就实时荧光PCR技术的主要原理、分类方法以及在转基因产品检测中的应用等进行简要综述。
- 宋勇涛王勇刘勤王露露刘昌峨魏泓
- 关键词：实时荧光定量PCR转基因产品
- 人sCD40L转基因小鼠模型的构建
- 2012年
- 目的研究阻断CD40-CD40L共刺激信号通路对移植皮肤免疫排斥反应的影响。方法通过RT-PCR技术克隆了呈可溶性表达的CD40L分子胞外区(sCD40L),利用K14启动子构建了sCD40L皮肤特异性表达载体,并利用该载体制备了转基因小鼠。结果所克隆的CD40L胞外区片段其大小及序列符合预期;以哺乳动物表达载体PCI为骨架,通过DNA重组,获得了含K14启动子和sCD40L编码区的皮肤特异性表达载体K14-sCD40L;通过显微注射和胚胎移植,PCR筛选检测:49只G0代小鼠有1只小鼠扩增出特异性条带,阴性对照无条带。结论成功建立sCD40L转基因阳性小鼠。
- 艾必燕樵星芳周晓杨王露露杨扬陈建康刘勤
- 关键词：转基因小鼠SCD40L
- 山羊发情后期三种不同超排方法的比较被引量：10
- 2004年
- 目的 研究在山羊发情后期三种不同超排方法的超排效果。方法 实验以 2 0只本地山羊为实验材料 ,以氯前列烯醇二次注射法进行同期发情 ,研究了于发情后期 (发情结束后第 2天 )进行 3种不同的超排方法 (对照组 :3 0 0IUFSH 6次减量法 ,F -pvp组 :3 0 0IUFSH溶于 3 0 %PVP一次注射 ,F -pmsg组 :先注射 2 0 0IUFSH ,2 4h后结合 3 3 0IUPMSG一次注射法 )的超排效果。结果 二次注射氯前列烯醇在 60h内同期率为 80 % (16 2 0 ) ,3种超排方法平均获黄体数分别为 9 75± 4 65,11 75± 8 3 4 ,11± 9 13 ;平均获可用胚数分别为 7± 2 94,8± 5 48,7 5± 5 80 ;胚胎回收率分别为 62 16% ,68 0 8% ,61 3 6%。t检验证明实验组 (F pvp组和F pmsg组 )平均获黄体和平均可用胚与对照组差异有显著性 (P <0 0 5) ,而胚胎回收率 (卡方检验 )差异无显著性 (P >0 0 5)。结论 山羊发情周期的发情后期进行超排能取得很好的卵巢反应 ,而且FSH一次注射法 (溶于 3 0 %PVP或 2 4h后结合少量PMSG)与多次减量法的超排效果一致 ,这表明 。
- 陈兵刘勤魏泓
- 关键词：山羊发情发情周期超数排卵
- 通过双原核显微注射提高转基因小鼠研制效率的实验研究被引量：10
- 2005年
- 目的建立高效的转基因小鼠制备技术,为开展遗传工程动物模型研究奠定技术基础。方法通过向小鼠受精卵原核中注入不同浓度的DNA分子,筛选最适注射用DNA浓度;将K14/hCTLA4-Ig基因表达载体分子通过显微注射分别导入小鼠受精卵雌、雄原核,并设立单原核注射对照组;利用输卵管腹壶部穿刺移植法将注射后的小鼠受精卵移植于同期发情的受体母鼠;利用PCR对出生的转基因首建小鼠进行筛选。结果最适DNA分子浓度为10ng/μl;在单、双原核注射组胚胎2细胞卵裂率分别为52.3%(132/253)和45.0%(108/240),差异有显著性(P<0.05);注射胚胎移植后体内存活率分别为18.1%(24/132)和16.7%(18/108),差异无显著性;转基因首建小鼠阳性率分别为3/24和5/18,转基因阳性小鼠占总注射胚胎的比例为1.2%(3/253)和2.08%(5/240),差异有极显著性(P<0.01)。结论尽管双原核注射对胚胎的2细胞卵裂率有一定影响,但通过双原核注射可有效提高转基因小鼠的制备效率。
- 王勇刘勤倪勇魏泓孙新民赵永聚
- 关键词：转基因技术小鼠动物模型胚胎发育
