卢伟东
- 作品数：9 被引量：45H指数：3
- 供职机构：重庆医科大学附属第一医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 姜黄素对人结肠癌耐药细胞HCT-8/VCR蛋白质双向电泳图谱的影响被引量：2
- 2011年
- 目的探讨姜黄素处理对人结肠癌耐药细胞HCT-8/VCR蛋白质表达谱的影响。方法实验分两组,姜黄素处理组用25μmol/L的姜黄素作用于人结肠癌耐药细胞HCT-8/VCR 24h,对照组加入相应体积的生理盐水。应用固相pH梯度双向凝胶电泳技术分离姜黄素处理组与对照组人结肠癌耐药细胞HCT-8/VCR的总蛋白,凝胶银染显色,采集凝胶图像,用PDQuest 8.0软件分析并比较两者之间差异表达的蛋白质。结果获得了背景清晰、分辨率高、重复性好的HCT-8/VCR细胞系2-DE图谱,姜黄素处理组和对照组图像的平均蛋白质点数分别为1030±69和1070±96,两者的差异点共33个,姜黄素处理组有8个蛋白点表达上调,18个表达下调,2个在姜黄素处理组特异表达,5个在对照组特异表达。结论建立了经或不经姜黄素处理的人结肠癌耐药细胞HCT-8/VCR的双向凝胶电泳图谱,识别了33个差异表达的蛋白质点,对这些差异蛋白点的进一步分析有助于研究姜黄素逆转结肠癌多药耐药的分子机制。
- 李雷傅仲学覃勇卢伟东王学虎陈旺盛
- 关键词：蛋白质组学多药耐药相关蛋白质类姜黄素结肠肿瘤
- Prdx2在结直肠癌细胞增殖、凋亡中的作用及其机制研被引量：6
- 2014年
- 目的观察Prdx2基因对结直肠癌细胞SW480增殖及凋亡的影响并初步探讨其可能的机制。方法将干扰片段(Prdx2-shRNA)及空载体(阴性对照)经慢病毒转染结直肠癌细胞株SW480,1.25μg/ml嘌呤霉素筛选,建立稳定细胞株,以野生型SW480细胞作为空白对照。采用MTT法检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡情况,qRT-PCR及Western blotting检测Prdx2及survivin的mRNA和蛋白表达情况。结果沉默Prdx2基因对结直肠癌细胞株SW480的生长和增殖有明显抑制作用。与阴性对照(5.59%±0.63%)及空白对照(5.79%±0.60%)比较,Prdx2基因沉默后,细胞凋亡率明显增加(26.60%±4.39%,P<0.05)。qRT-PCR、Western blotting结果显示,干扰Prdx2基因明显降低了survivin mRNA及蛋白表达。结论沉默Prdx2基因可抑制结直肠癌细胞增殖,增加凋亡,其机制可能与下调survivin的表达有关。
- 王昊傅仲学卢伟东魏锦来黄镇谢勇
- 关键词：结直肠肿瘤RNA干扰细胞凋亡
- Peroxiredoxin 2基因慢病毒载体的构建及对结直肠癌SW480细胞增殖的影响
- 2014年
- 目的:构建Peroxiredoxin 2(Prdx2)基因慢病毒表达载体,建立能够稳定高表达Prdx2的结直肠癌SW480细胞株,研究Prdx2的高表达对SW480细胞生长增殖的影响。方法:利用PCR扩增Prdx2编码区片段,克隆插入载体Ubi-MCS-EGFP-IRES-Puromycin(GV218)中,构建Ubi-Prdx2-EGFP-Puromycin(LV-Prdx2)慢病毒表达载体,包装产生慢病毒颗粒,鉴定后将其转染SW480细胞,荧光显微镜观察细胞绿色荧光蛋白表达;应用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)和Western blot方法检测SW480细胞中Prdx2的mRNA和蛋白水平表达情况;MTT法检测细胞生长情况;平板克隆形成实验检测细胞克隆形成能力。结果:构建的重组慢病毒表达载体Ubi-Prdx2-EGFP-Puromycin(LV-Prdx2)经鉴定正确;慢病毒转染SW480细胞后,细胞中Prdx2在mRNA和蛋白水平高表达。MTT法及平板克隆形成实验结果显示Prdx2高表达的SW480细胞增殖能力显著增强(P<0.05)。结论:成功构建Prdx2基因慢病毒表达载体Ubi-Prdx2-EGFP-Puromycin,筛选出稳定高表达Prdx2的SW480细胞株;高表达的Prdx2分子可显著促进结直肠癌SW480细胞增殖。
- 冯继红傅仲学文坤明张寿儒卢伟东王昊吴星烨
- 关键词：结直肠癌SW480慢病毒表达载体
- 姜黄素逆转结肠癌裸鼠移植瘤多药耐药的研究被引量：23
- 2011年
- 目的探讨姜黄素体内对人结肠癌耐长春新碱细胞株HCT-8/VCR多药耐药的逆转作用及其可能机制。方法将HCT-8/VCR种植于裸鼠皮下,建立肿瘤耐药模型。移植瘤裸鼠20只依据治疗方法的不同分为对照组(PBS)、长春新碱(Vincristine,VCR;2 mg/kg)组、姜黄素(50 mg/kg)组、姜黄素联合VCR(50 mg/kg姜黄素+2 mg/kg VCR)4组,每组5只。治疗2周后收集标本,称量各组瘤体质量,采用RT-PCR、Western blot分别检测瘤组织内MDR1 mRNA、survivin mRNA和P-gp、survivin蛋白的表达水平,HE染色观察瘤组织细胞形态学变化,评估姜黄素在不同处理因素中逆转肿瘤多药耐药的效果。结果姜黄素联合VCR能显著抑制瘤体的生长,姜黄素联合VCR组瘤质量[(0.42±0.23)g]明显低于对照组[(1.21±0.25)g]、VCR组[(1.13±0.27)g]、姜黄素组[(0.75±0.27)g](P<0.05)。RT-PCR、Western blot结果显示姜黄素能够下调MDR1 mRNA、survivin mRNA和P-gp、survivin蛋白的表达,姜黄素联合VCR组MDR1 mRNA(0.18±0.05)、survivin mRNA(0.63±0.04)、P-gp(0.15±0.02)、survivin(0.31±0.09)和姜黄素组MDR1 mRNA(0.39±0.11)、survivinmRNA(0.80±0.12)和P-gp(0.34±0.07)、survivin(0.40±0.11)蛋白表达明显低于对照组MDR1 mRNA(0.99±0.23)和survivin mRNA(1.19±0.32)表达,以及P-gp(0.71±0.23)、survivin(0.88±0.15)蛋白表达(P<0.05)。HE病理切片显示姜黄素组和姜黄素联合VCR组较其他2组有较多的淋巴细胞浸润,核固缩较多,核分裂相少,坏死更为广泛。结论多种机制参与姜黄素体内逆转肿瘤多药耐药,姜黄素可能通过下调MDR1、survivin mRNA表达和P-gp、survivin蛋白的表达,促进肿瘤细胞凋亡等多种途径逆转肿瘤的多药耐药性。
- 卢伟东傅仲学覃勇李雷杨闯
- 关键词：姜黄素逆转
- 姜黄素逆转人结肠癌细胞HCT-8/VCR的双向凝胶电泳技术的建立及优化
- 2011年
- 目的建立并优化姜黄素逆转人结肠癌细胞HCT-8/VCR蛋白质组的双向电泳技术。方法姜黄素作用于人结肠癌细胞HCT-8/VCR,提取蛋白质。对双向凝胶电泳中蛋白质样品的处理,蛋白上样量,IPG胶条的选择,以及聚焦条件等进行调整和优化。结果采用瓶内刮取的方法裂解细胞,pH3-10NL的胶条,上样量200 ug,延长除盐时间,聚焦60 000伏小时,可以得到分辨率较高、重复性较好的双向电泳图谱。结论初步建立了分辨率较高且重复性较好的姜黄素逆转人结肠癌细胞HCT-8/VCR蛋白质双向凝胶电泳图谱。
- 李雷傅仲学覃勇卢伟东吴星烨汤为学
- 关键词：蛋白质组学双向凝胶电泳姜黄素多药耐药结肠癌
- Prdx2通过Wnt/β-catenin信号通路调控结肠癌细胞生长的研究
- 第一部分:Prdx2在结肠癌的表达及临床意义 目的:检测Prdx2在结肠癌组织及细胞株中的表达，探讨Prdx2与临床病理特征之间的关系及与β-catenin表达的相关性。 方法:1.免疫组织化学方法检测Prdx2和β...
- 卢伟东
- 关键词：WNT/Β-CATENIN信号通路结肠癌免疫组织化学法
- 文献传递
- 姜黄素逆转人结肠癌细胞株HCT-8/VCR多药耐药的研究被引量：16
- 2011年
- 目的探讨姜黄素对人结肠癌耐药细胞株HCT-8/VCR多药耐药性的逆转作用及可能机制。方法运用MTT法进行药敏试验,流式细胞仪检测细胞内罗丹明123(Rh123)的表达,RT-PCR法检测多药耐药基因mdr1 mR-NA水平的变化,Western blot法检测mdr1基因蛋白产物P糖蛋白(P-gp)表达水平的变化。结果经25μmol/L姜黄素处理后,增强了HCT-8/VCR细胞对VCR的敏感性,其逆转倍数为4.58倍,增加了细胞内Rh123的蓄积(P<0.05),明显抑制了多药耐药基因mdr1 mRNA及其蛋白的表达(P<0.05)。结论本研究结果提示姜黄素能抑制耐药基因的表达及功能,提高细胞对化疗药物的敏感性,从而逆转结肠癌细胞的多药耐药性。
- 覃勇傅仲学卢伟东李雷汤为学
- 关键词：姜黄素结肠癌多药耐药逆转
- Peroxiredoxin 2基因RNAi慢病毒载体构建及对SW480细胞增殖的影响
- 2015年
- 目的构建Peroxiredoxin2(PRDX2)基因RNA干扰(RNA interference,RNAi)慢病毒表达载体,探讨PRDX2基因干扰后对结直肠癌SW480细胞增殖的影响。方法设计、合成靶向PRDX2的RNA干扰的序列,构建pGC-EGFP-shPRDX2慢病毒载体并进行鉴定,同时应用qRT-PCR和Western blot方法观察转染的SW480结肠癌细胞PRDX2 mRNA和蛋白表达的抑制效果,并通过MTT、平板克隆形成实验检测细胞增殖变化。结果成功构建PRDX2基因慢病毒载体并经测序证实;pGCEGFP-shPRDX2可有效抑制结直肠癌SW480细胞PRDX2的表达,感染慢病毒的SW480细胞中PRDX2 mRNA和蛋白表达水平明显降低(P<0.05);SW480细胞经PRDX2 RNA干扰后其生长和增殖能力显著降低(P<0.05)。结论 PRDX2基因RNAi慢病毒表达载体在SW480细胞中表达稳定可靠,PRDX2基因干扰后有效抑制了结直肠癌SW480细胞的增殖和生长,为进一步探讨PRDX2在结直肠癌发生、发展及转移中的作用奠定基础。
- 冯继红傅仲学文坤明卢伟东王昊陈旺盛郭金宝张寿儒
- 关键词：绿色荧光蛋白质类慢病毒载体
- 姜黄素逆转结肠癌裸鼠移植瘤多药耐药的实验研究
- 目的：探讨姜黄素在裸小鼠体内对人结肠癌耐长春新碱细胞株HCT-8/VCR多药耐药的逆转作用及其可能机制,为姜黄素用于临床治疗结肠癌提供理论依据。
方法：将HCT-8/VCR细胞种植于裸小鼠皮下,建立肿瘤耐药模型。移...
- 卢伟东
- 关键词：姜黄素裸鼠移植瘤VCRSURVIVIN蛋白WESTERNBLOT淋巴细胞浸润
