曹伟军
- 作品数：7 被引量：18H指数：3
- 供职机构：江苏省人民医院更多>>
- 发文基金：湖南省科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 可溶性耐药相关钙结合蛋白高表达在胃癌细胞耐药中的作用机制被引量：1
- 2008年
- 目的探讨可溶性耐药相关钙结合蛋白（Sorcin）在胃癌耐药中的作用及机制。方法采用逆转录（RT）PCR法扩增Sorcin cDNA片段编码区序列全长。DNA重组技术构建FLAG-Sorcin融合表达载体。经脂质体介导稳定转染胃癌SGC7901细胞。RT-PCR及Western印迹法分别检测转染细胞中Sorcin mRNA水平和蛋白水平的表达变化。高效液相色谱（HPLC）法检测Sorcin转染细胞（SGC7901-F-Sor）及对照细胞（SGC7901）内长春新碱（VCR）的浓度及维拉帕米（VRP）对其的影响。结果RT-PCR法成功扩增出Sorcin cDNA片段编码区序列全长，并构建FLAG-Sorcin融合表达载体。RT-PCR及Western印迹法证实，Sorcin在SGC7901转染细胞中高表达。HPLC检测显示Sorcin高表达的SGC7901细胞胞内VCR浓度较其亲本SGC7901细胞降低76．89％。VRP能增加VCR在细胞内的蓄积,VRP处理后，SGC7901-F-Sor细胞内VCR浓度增加2.41倍。结论Sorcin高表达可致胃癌SGC7901细胞内VCR蓄积减少，提示Sorcin可能通过改变细胞膜两侧药物转运参与胃癌耐药，VRP能部分逆转此作用。
- 何青春张桂英曹伟军陈承恒
- 关键词：胃肿瘤耐药长春新碱
- hTERT启动子的克隆及在胃癌细胞中的转录活性研究
- 2008年
- 目的:克隆人端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)核心启动子,研究hTERT启动子在人胃癌细胞SGC7901和正常人成纤维细胞HLF中的转录活性。方法:以Hela细胞的基因组DNA为模板,PCR扩增hTERT核心启动子片段,将其克隆入荧光素酶报告基因质粒pGL3-Basic构建hTERT-pGL3Basic表达载体。将该载体用脂质体转染法转染SGC7901和HLF细胞,检测hTERT启动子在这两种细胞中的转录活性。结果:成功克隆hTERT核心启动子;双酶切和PCR鉴定均显示hTERT-pGL3Basic表达载体构建成功;荧光素酶活性检测显示hTERT启动子在SGC7901细胞中的转录活性为阳性对照的21.5%,而在HLF细胞中无活性。结论:hTERT启动子具有肿瘤特异性,可以用于肿瘤的靶向基因治疗。
- 曹伟军张桂英何青春刘霆
- 关键词：人端粒酶逆转录酶启动子克隆靶向基因治疗胃癌
- hTERT启动子调控的融合自杀基因CD:UPRT载体的构建及其应用被引量：3
- 2008年
- 目的构建hTERT启动子调控的融合自杀基因CD:UPRT表达载体,研究其对人胃癌细胞SGC7901的体外靶向性杀伤作用。方法PCR扩增hTERT核心启动子片段,克隆入荧光素酶报告基因质粒pGL3-Basic,检测hTERT启动子在人胃癌细胞SGC7901和人成纤维细胞HLF中的转录活性。构建hTERT启动子调控的CD:UPRT基因表达载体hTERT-CD:UPRT,将其和CMV启动子调控的CD:UPRT基因表达载体pcDNA3.1-CD:UPRT用脂质体转染法分别转染入SGC7901和HLF细胞,筛选稳定表达细胞系,用RT-PCR和Western blot方法检测CD基因的表达,用MTT法检测5-FC对转染细胞的杀伤作用。结果成功克隆hTERT核心启动子;荧光素酶活性检测显示,hTERT启动子在SGC7901细胞中的转录活性为阳性对照的(21.50±2.15)%,而在HLF细胞中仅有背景活性。成功构建hTERT启动子调控的CD:UPRT基因表达载体,转染pcDNA3.1-CD:UPRT的SGC7901和HLF细胞以及转染hTERT-CD:UPRT的SGC7901细胞在mRNA和蛋白质水平均可检测到CD基因的表达,且对5-FC敏感;而转染hTERT-CD:UPRT的HLF细胞未检测到CD基因的表达,对5-FC不敏感。结论构建的hTERT启动子调控的融合自杀基因系统CD:UPRT/5-FC能在体外靶向性杀伤SGC7901细胞。
- 曹伟军张桂英刘霆何青春
- 关键词：人端粒酶逆转录酶启动子胞嘧啶脱氨酶尿嘧啶磷酸核糖转移酶靶向基因治疗
- Sorcin高表达与胃癌细胞株SGC7901多药耐药的关系被引量：10
- 2008年
- 背景与目的:长春新碱耐药胃癌细胞SGC7901/VCR是具有P-糖蛋白(P-gp)高表达的典型多药耐药细胞,但P-gp抑制剂维拉帕米(VRP)不能完全逆转其耐药,说明还存在其它耐药机制。我们运用差异蛋白质组学技术研究发现,可溶性耐药相关钙结合蛋白(Sorcin)在SGC7901/VCR中表达较SGC7901细胞明显上调。为进一步阐明Sorcin与胃癌细胞耐药的关系,本研究构建了FLAG-Sorcin融合表达载体,探讨Sorcin在胃癌多药耐药中的作用。方法:采用逆转录聚合酶链反应法(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)扩增Sorcin cDNA片段编码区序列全长,DNA重组技术构建FLAG-Sorcin融合表达载体,经脂质体介导稳定转染SGC7901细胞,RT-PCR及Western blot分别检测转染细胞Sorcin mRNA表达的变化;噻唑蓝(MTT)法测定转染细胞及对照细胞对化疗药物的敏感性。用Sorcin反义核苷酸转染SGC7901-F-SOR细胞,RT-PCR检测Sorcin表达水平的变化,MTT法测定转染后细胞对VCR敏感性的变化。结果:RT-PCR法扩增出616bp全长Sorcin cDNA片段,成功构建了FLAG-Sorcin融合表达载体;RT-PCR及Western blot证实,Sorcin在SGC7901转染细胞中高表达;Sorcin高表达的SGC7901细胞对长春新碱(VCR)、阿霉素(ADM)、紫杉醇(Taxol)、氟尿嘧啶(5-FU)分别产生了8.87倍、6.13倍、6.67倍和2.80倍耐药。Sorcin反义核苷酸转染SGC7901-F-SOR细胞后,RT-PCR验证Sorcin表达被抑制,MTT结果显示细胞对VCR敏感性增加。结论:Sorcin高表达可致SGC7901细胞产生低倍数的多药耐药,说明Sorcin与SGC7901细胞多药耐药密切相关,有望成为逆转胃癌多药耐药的靶点。
- 何青春张桂英曹伟军
- 关键词：SORCINFLAG多药耐药胃癌细胞株
- hTERT启动子调控的CD:UPRT/5-FC自杀基因对人胃癌裸鼠移植瘤的抑制作用被引量：1
- 2010年
- 目的:研究人端粒酶逆转录酶(hTERT)启动子调控的胞嘧啶脱氨酶:尿嘧啶磷酸核糖转移酶/5-氟胞嘧啶(CD:UPRT/5-FC)融合自杀基因系统在体内对人胃癌SGC7901细胞的杀伤作用。方法:构建胃癌皮下移植瘤模型,随机分成3组处理。观察30天,测量肿瘤体积,计算抑瘤率。肿瘤组织做常规病理检查,免疫组化检测CD蛋白的表达。结果:成功构建胃癌皮下移植瘤模型。治疗30天后,B组(瘤内注射hTERT-CD:UPRT+腹腔注射PBS)和C组(单纯腹腔注射PBS)的肿瘤生长迅速,肿瘤体积分别为(2.72±0.35)cm3、(2.67±0.30)cm3,A组(瘤内注射hTERT-CD:UPRT+腹腔注射5-FC)的肿瘤生长受到明显抑制,第30天体积为(1.10±0.13)cm3,与前两组相比差异有统计学意义(P<0.05),其抑瘤率为59.6%。裸鼠移植瘤病理切片镜检,A组可见大量肿瘤细胞排列稀疏,部分肿瘤细胞核固缩、核碎裂;B组和C组则见大量肿瘤细胞排列紧密,细胞形态和细胞核呈多形性,核大深染,核分裂像多见。免疫组化显示,A组和B组可见CD的表达,C组CD表达呈阴性。结论:hTERT启动子调控的CD:UPRT/5-FC融合自杀基因系统对裸鼠胃癌皮下移植瘤有显著的杀伤作用,为胃癌的基因治疗提供了一种可能的方法。
- 曹伟军张振玉张桂英
- 关键词：人端粒酶逆转录酶启动子胃癌
- CDH1 C-160A基因多态性与胃癌易感性的Meta分析被引量：4
- 2010年
- 目的:探讨CDH1C-160A基因多态性与胃癌易感性的关系.方法:检索中国生物医学文献数据库、万方数据库、中国期刊网和PubMed,获取CDH1C-160A基因多态性与胃癌易感性的病例-对照研究.以胃癌组与对照组人群基因型分布的OR值为效应指标,采用固定或随机效应模型进行合并分析,并进行偏倚评估.应用STATA10.0软件进行统计学处理.结果:共纳入文献13篇,研究14项,累计胃癌病例3144例,对照4221例.与野生基因型CC相比,(CA+AA)合并的OR值(95%CI)为0.98(0.84-1.15).按人群进行分层分析,亚洲人群OR值为0.92(0.81-1.04),高加索人群OR值为1.21(0.88-1.67).结论:CDH1C-160A基因多态性与胃癌易感性无关.
- 曹伟军张振玉岳巧艳
- 关键词：CDH1胃癌基因多态性META分析
- hTERT启动子调控的融合自杀基因CD：UPRT对人胃癌细胞的靶向性杀伤作用
- 目的克隆 hTERT 启动子,研究 hTERT 启动子调控的 CD：UPRT/5-FC 融合自杀基因系统对人胃癌细胞 SGC7901的靶向性杀伤作用。方法以 Hela 细胞的基因组 DNA 为模板,PCR 克隆 hTER...
- 曹伟军张桂英
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