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负载肿瘤抗原的DC疫苗体外诱导的特异性抗膀胱癌效应研究被引量：3: 2012年; 目的探讨负载膀胱癌抗原成分树突状细胞(dendritic cells,DC)疫苗的制备和体外诱导T淋巴细胞特异性杀伤膀胱癌细胞的作用。方法冻融法制备EJ细胞裂解物抗原成分,体外培养的人外周血单个核细胞(hu-PBMC)在rhGM-CSF、rhIL-4、TNF-α诱导下分化出DC,负载EJ细胞裂解物抗原后制备膀胱癌DC疫苗;免疫磁珠分离法从人免疫重建Balb/c裸小鼠脾脏组织中分离CD3+T淋巴细胞,3H-TdR掺入试验测定DC疫苗刺激自体T淋巴细胞增殖的能力,51Cr释放试验检测DC疫苗诱导的T细胞对EJ细胞的杀伤作用。结果 Hu-PBMC在细胞因子rhGM-CSF、rhIL-4和TNF-α的刺激下分化为成熟DC,负载EJ抗原的DC疫苗体外可使同源T淋巴细胞活化,增殖指数增加,活化的T淋巴细胞对EJ细胞的杀伤率为(62.58±6.13)%,和对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论负载膀胱癌冻融抗原的DC疫苗体外可诱导人T淋巴细胞活化增殖,对EJ细胞有明显的杀伤作用。; 颜汝平王剑松李翀周海滨赵献; 关键词：癌症疫苗树突细胞

小鼠膀胱癌细胞系BBN1617的建立及荧光素酶标记人膀胱癌细胞系EJ-LUC的构建: 目的：目前我国现有的可移植瘤株及用于药效试验的小鼠瘤株有限,特别是小鼠膀胱肿瘤瘤株稀缺。实验一是通过喂饲OH-BBN方法诱发Balb/c小鼠膀胱癌,初步建立Balb/c小鼠膀胱癌细胞系BBN1617,为膀胱肿瘤的基础研...; 赵献; 关键词：BALB/C小鼠膀胱癌细胞系荧光素酶慢病毒; 文献传递

人免疫重建NOD/SCID小鼠模型的建立被引量：1: 2011年; 目的探讨NOD/SCID(nonobese diabetic/severe combined immunodeficien)t小鼠人免疫重建模型的建立方法和免疫特性.方法 16只NOD/SCID小鼠随机分成实验组和对照组,每组8只.Ficoll密度梯度离心法分离人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC),通过腹腔注射移植给实验组小鼠,空白对照组小鼠每只腹腔注射无菌PBS,第4、8和12周时,流式细胞术检测小鼠外周血中人的CD3+T、CD19+B淋巴细胞,ELISA法测定小鼠血清中人IgG含量,免疫组织化学染色检测小鼠脾脏和肝脏中人CD3+T、CD19+B淋巴细胞浸润情况.结果移植PBMC 4周后,实验组NOD/SCID小鼠外周血中人CD3+T、CD19+B的细胞分别为85.6%、76.7%,并且在小鼠脾脏组织中也可以检测到人CD3 T、CD19 B淋巴细胞.移植4、8及12周后小鼠血清中人IgG含量分别达到(863±12.5)μg/mL、(1217±16.7)μg/mL、(958±13.1)μg/mL.结论用人外周血PBMC经腹腔注射可以成功建立人免疫重建NOD/SCID小鼠模型,方法简便可靠.; 颜汝平李翀周海滨王剑松袁国红赵献; 关键词：NOD/SCID小鼠动物模型人外周血单核细胞

绿色荧光蛋白在膀胱肿瘤动物模型中的应用: 2010年; 绿色荧光蛋白是一种来源于海洋多管水母属的荧光标志物。其能在细胞内稳定表达,具有对细胞无毒性,检测无需底物及辅助因子,且可以实时跟踪记录细胞生长情况,检测结果真实可靠的优点。绿色荧光蛋白的性质特点使其在膀胱肿瘤动物模型中有着很好的应用前景。; 赵献颜汝平王剑松; 关键词：绿色荧光蛋白膀胱肿瘤动物模型

等离子电切镜联合气压弹道碎石术治疗截瘫患者膀胱结石37例被引量：2: 2010年; 2007年5月～2009年7月，我院采用等离子电切镜联合气压弹道碎石术治疗截瘫患者继发的膀胱结石37例，疗效满意，报道如下。; 罗群强颜汝平赵献王剑松; 关键词：膀胱结石等离子电切镜气压弹道碎石术

人外周血树突状细胞体外诱导培养及表型鉴定被引量：3: 2010年; 目的从健康人外周血中分离单个核细胞(peripheral blood mononuclearcell,PBMC),经体外诱导培养获取成熟树突状细胞(dendritic cell,DC).方法取健康人新鲜外周血,经密度梯度离心法分离,获得单个核细胞,在含10%胎牛血清的RPMI-1640培养基中培养.置37℃、5%CO2培养箱内静置培养2 h后除去悬浮细胞.培养液中加入rhGM-CSF和rhIL-4继续培养贴壁细胞5 d,然后加入TNF-α促进其分化成熟.倒置显微镜下观察DC形态,流式细胞仪(flowcytometer,FCM)对其进行表型鉴定.结果显微镜下观察DC细胞形态不规则,表面有大量的毛刺状突起;成熟DC细胞表面CD83、CD80分子表达明显增高.结论用rhGM-CSF、rhIL-4和TNF-α联合培养可以从健康人外周血诱导培养出成熟的树突状细胞.; 颜汝平周海滨李翀王剑松王伟赵献; 关键词：树突状细胞人外周血细胞培养

Kringle5基因的表达、纯化及其抗膀胱肿瘤作用的初步研究: 2010年; 目的获得高纯度并且有活性的K5蛋白.方法继构建了重组质粒pGEX-5X-1-K5的基础上,转化感受态细胞BL-21、DH-5α、Top10,并优化了表达条件,经过裂解、洗涤、溶解包涵体后,用带GST标签的谷胱甘肽琼脂糖4B亲和柱进行纯化,Bradford法测蛋白浓度,分别用ECV304细胞和裸鼠皮下移植瘤模型对蛋白进行了活性测定.结果获得了表达量最高的条件:BL21感受态细胞,诱导时间:6 h,纯化后的K5蛋白纯度达到95%以上,K5浓度为5μg/mL时抑制率最高.裸鼠模型上,K5组肿瘤的生长速度明显慢于PBS对照.结论含有GST的融合蛋白表达载体,表达量多、易于纯化、成本低、蛋白纯度高,并能有效的抑制ECV304细胞,抑制裸鼠皮下移植瘤的生长,为K5的工业化大规模生产奠定了基础.; 胡明宇王剑松柯昌兴韦海荣赵献张启波; 关键词：KRINGLE5 蛋白纯化膀胱肿瘤

OH—BBN诱导不同鼠类膀胱肿瘤的研究现状: 2010年; 通过建立胱肿瘤动物模型进一步研究其发生、发展、转移等变化的思路早已被研究者们所熟悉,而使用N-丁基-N-（4-羟丁基）亚硝胺是目前诱导膀胱肿瘤的最常用方法之一,采用的实验动物也不尽相同.本文介绍OH-BBN在不同鼠类中研究现状.; 赵献颜汝平李翀王剑松; 关键词：膀胱肿瘤小鼠

DC疫苗对人免疫重建荷人膀胱癌NOD／SCID小鼠的抑瘤作用被引量：1: 2011年; 目的探讨DC疫苗对人免疫重建荷人膀胱癌NOD／SCID小鼠的抑瘤作用。方法从健康人外周血中分离单个核细胞（peripheral blood mononuclearcell，PBMC），经体外诱导培养获取树突状细胞（dendritic cell，Dc），并负载人膀胱癌EJ细胞裂解物中提取的肿瘤抗原制备DC疫苗。20只NOD／SCID小鼠腹腔注射人PBMC、皮下接种EJ细胞建立人免疫重建荷人膀胱癌动物模型，随机分为实验组（DC—EJ组）和对照组（DC组）；DC—EJ组腹腔注射DC疫苗，DC组腹腔注射DC，观察肿瘤生长和小鼠存活情况，检测荷瘤小鼠血清中人IFN-γ的含量，移植瘤组织中人T细胞、Dc的浸润情况。结果Dc—EJ组小鼠移植瘤生长缓慢，小鼠生存时间延长。实验组小鼠血清中人IFN-γ分泌显著高于对照组（P〈0．05），肿瘤组织中均见CD3、CD4、CD8T细胞和成熟DC浸润。结论负载人膀胱肿瘤抗原的DC疫苗能有效抑制人免疫重建NOD／SCID小鼠体内移植瘤的生长，为膀胱癌的免疫治疗提供了实验依据。; 颜汝平李翀周海滨王剑松王伟赵献石永福; 关键词：膀胱癌免疫疗法 NOD/SCID小鼠

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赵献