马丽君 作品数:14 被引量:44 H指数:4 供职机构: 宁夏医科大学基础医学院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 宁夏回族自治区自然科学基金 教育部“优秀青年教师资助计划” 更多>> 相关领域: 医药卫生 更多>>
嗅球和嗅黏膜来源的嗅鞘细胞对脊髓损伤小鼠的治疗效果比较 被引量:6 2014年 目的体外分离、培养不同来源的嗅鞘细胞,并鉴定其生物学特性,比较不同来源的嗅鞘细胞生物活性,评价其对脊髓损伤模型小鼠的疗效的差异。方法差速贴壁法分别培养嗅球和嗅黏膜来源的嗅鞘细胞,免疫荧光染色检测该细胞特异性蛋白S100、P75的表达,并对二者生长曲线及在不同代次、不同浓度梯度条件下神经营养因子分泌情况进行检测,实时定量PCR(qRT-PCR)鉴定二者脑源性神经营养因子(BDNF)、神经生长因子(NGF)、神经营养因子3(NT-3)、神经营养因子4(NT-4)、轴突膜蛋白生长相关蛋白43(GAP-43)、微管相关蛋白(MAP-2)基因表达,并分别将两种细胞移植入脊髓横断小鼠模型中,以小鼠神经功能评分及脊髓内移植细胞分布情况进行评估。结果所获得不同来源的嗅鞘细胞呈双极、三极样形态生长,且S100、P75蛋白表达均为阳性,嗅黏膜来源细胞不表达MAP-2,高表达GAP-43,嗅球来源的细胞低表达MAP-2和GAP-43,嗅球来源细胞生长活性大于嗅黏膜来源的细胞,其中嗅黏膜细胞来源分泌营养因子高于嗅球来源的细胞,小鼠神经功能评分显示嗅黏膜来源细胞治疗脊髓损伤模型效果明显高于嗅球来源的嗅鞘细胞。结论两种来源的嗅鞘细胞存在生物学差异,嗅黏膜来源细胞治疗脊髓损伤效果高于嗅球来源的嗅鞘细胞,可以作为临床应用的种子细胞。 王立斌 杨萍 梁雪云 马丽君 魏军关键词:嗅鞘细胞 嗅球 嗅黏膜 脊髓损伤 人骨髓干细胞分离及其向神经细胞诱导分化的实验研究 被引量:2 2013年 目的研究骨髓间充质细胞向神经样细胞诱导分化的能力,探讨利用其治疗神经损伤疾病的可行性。方法采用直接分离培养法从人骨髓中分离培养骨髓间充质干细胞,流式细胞术对其细胞特性进行鉴定,化学诱导法诱导其向神经样细胞分化,免疫组化技术验证诱导细胞特性。结果成功获得骨髓间充质干细胞,免疫表型鉴定结果为CD73、CD90、CD105表达阳性,CD14、CD34、CD45表达阴性;免疫组化染色显示诱导分化的细胞表达神经前体细胞标志物Nestin、GFAP和成熟神经元标志物NSE等。结论骨髓间充质细胞在特定诱导因子作用下能向神经细胞表型转化,并能稳定表达神经细胞因子,可以作为神经损伤疾病组织工程的种子细胞来源。 孙惠敏 刘婷 马丽君 朱永朝 何亚琴 王立斌关键词:骨髓 间充质干细胞 分化 人结直肠肿瘤干细胞的分离培养与生物学特性 2014年 目的从人结直肠肿瘤细胞中分离培养结直肠肿瘤干细胞(Colon cancer stem cells)并研究其生物学特性。方法采用有限稀释法筛选分离具有连续克隆能力的单细胞,通过MTT比色法对其体外增殖能力进行鉴定,流式细胞仪分析细胞表面标记CD133、CD166、CD24、CD47、CD200、CD90、CD44、EPCAM的表达情况;PCR检测Oct4、Sox2、Nanog、C-myc等相关基因的表达,实时荧光定量PCR检测其表达量。结果三例能够形成肿瘤球的原代培养细胞CD166阳性细胞所占比例分别为61.9%、52.4%、47.8%,CD47阳性细胞所占比例分别为99.8%、97.2%、99.9%;不能形成肿瘤球的原代培养细胞中CD166阳性细胞为10.8%,CD47阳性细胞为0.1%;CD133、EPCAM、CD24、CD200四个表面标记在两种细胞中的表达均低于0.5%,CD44、CD90在两种细胞中的表达均高于95%;与原代细胞相比,克隆细胞具有较强的体外增殖能力并且高表达Oct4(P<0.05)、C-myc(P<0.01)及Sox2基因,不表达Nanog基因。结论人结直肠肿瘤中存在具有自我更新和增殖潜能的结直肠肿瘤干细胞,在体外可将其分离、培养和纯化。 马丽君 王立斌 李海 叶萍 谢晓亮 李玉奎 杨银学关键词:结直肠肿瘤 肿瘤干细胞 克隆细胞 健脾补肾方治疗中晚期原发性肺癌35例 被引量:10 2009年 目的探讨健脾补肾方治疗中晚期原发性肺癌的临床疗效。方法对35例患者予健脾补肾方治疗3个月,观察主要症状变化、瘤灶稳定率、Kamofsky评分以及患者生存期。结果患者治疗后主要症状明显改善(P<0.05,P<0.01),瘤灶缓解率为17.14%,Kamofsky评分提高稳定率为91.42%;1年生存率为74.29%,1.5年生存率为57.14%,2年生存率为42.86%。结论健脾补肾方在改善肺癌患者主要症状、稳定病灶、提高生存质量以及延长生存期等方面均有良好的疗效,中医扶正法为主有一定的抗癌作用。 马科 马丽君 楚国庆关键词:原发性肺癌 中医药疗法 健脾补肾方 人胎盘间充质干细胞移植治疗帕金森病的实验研究 被引量:1 2015年 目的探讨人胎盘间充质干细胞(placenta mesenchymal stem cells,PMSCs)脑内移植对帕金森病(Parkinson’s disease,PD)大鼠的治疗作用。方法在分离、培养、鉴定人胎盘间充质干细胞的基础上,应用6-羟基多巴胺(6-hydroxydopamine,6-OHDA)纹状体注射制作24只帕金森病大鼠模型,随机分为3组,每组8只。A组为空白对照组;B组为生理盐水组;C组为细胞移植组,将已标记CM-Di I的PMSCs移植PD模型大鼠,在移植后4 w取脑组织行冰冻切片,并在荧光显微镜下观察移植细胞的分布情况。采用免疫组织化学方法检测PD大鼠黑质多巴胺能神经元,ELISA检测纹状体多巴胺(dopamine)的含量,并从行为学变化对PD大鼠进行综合评价。结果胎盘组织经酶消化后获得贴壁细胞,倒置显微镜下可见PMSCs形态为梭形,成漩涡样生长,将CM-Di I标记的PMSCs移植到PD大鼠纹状体治疗4 w后,可见细胞散在分布于注射侧脑组织,细胞移植组dopamine含量(7.812±0.46)ng/ml明显高于对照组(4.898±0.32)ng/ml(P<0.05),PD大鼠的旋转行为得到显著改善。结论人胎盘间充质干细胞移植治疗帕金森病大鼠可使其旋转行为得到改善,其机制可能与增加黑质多巴胺能神经元的数量,提高纹状体dopamine含量有关。 马丽君 杨萍 梁雪云 陈冬梅 李玉奎 魏军关键词:人胎盘间充质干细胞 帕金森病 含当归芍药散简方脑脊液对神经细胞的保护作用 被引量:4 2012年 目的:探讨含当归芍药散简方脑脊液的神经保护作用及其可能的机制。方法:采用FeSO4和H2O2作用产生自由基的方法诱导建立PC12细胞氧化损伤模型,分别用当归芍药散简方(0.135 g·mL-1)ig家兔(1.5 g·kg-1),于1,14 d时取脑脊液添加于培养液中(每组分5%,10%,20%3个体积分数)处理PC12细胞,MTT法测定细胞活性,硫代巴比妥酸(TBA)比色法测定丙二醛(MDA)含量,黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶(SOD)活力,甲基百里香酚蓝(MTB)比色法测定细胞内Ca2+水平,免疫细胞化学法测定α7烟碱型乙酰胆碱受体(nAchR)阳性表达,BCA蛋白定量及斑点印迹法测定α7nAchR亚单位水平。结果:含20%当归芍药散简方脑脊液对PC12细胞活性(以吸光度表示,A)1 d组(1.241±0.117)和14 d组(1.297±0.213)与损伤组(0.986±0.051)比较能明显增加PC12细胞活性(P<0.05,P<0.01)、显著提高SOD活力(19.48±0.34),(19.52±0.33)U·mL-1对(18.18±0.12)U·mL-1(P<0.01),有效降低MDA含量及细胞内Ca2+水平均降低,与损伤组比较P<0.01;明显上调α7nAChR的表达,14 d组与1 d组比较有显著性差异(P<0.05)。结论:当归芍药散简方对FeSO4和H2O2诱导建立PC12细胞氧化损伤模型具有保护作用,其机制与保护α7nAchR有关。 马丽君 马科 李霞 王燕蓉 田建英关键词:老年性痴呆 人胚胎脑组织蛋白提取物诱导人胎盘间充质干细胞向神经细胞的分化 被引量:1 2014年 背景:选择合适的诱导方法诱导人胎盘间充质干细胞分化为神经元样细胞是临床治疗神经损伤的关键。目的:在人胎盘间充质干细胞中加入商品化的人胚胎脑组织蛋白提取物,观察其诱导分化为神经元样细胞的可行性。方法:采用酶消化法分离培养人胎盘间充质干细胞,传至第3代,将人早期胚胎脑组织蛋白提取物加入诱导培养基培养6 d,加入浓度为20 nmol/L全反式维甲酸和500μg/L音猬因子培养3 d,换新的培养液,包含体积分数为10%胎牛血清,10μg/L脑源性神经营养因子,20μg/L神经胶质细胞源性神经营养因子,50μg/L胰岛素样生长因子Ⅱ型继续培养3 d。结果与结论:胎盘组织经酶消化后获得贴壁细胞,传至第2代细胞形态为梭形,成漩涡样生长,传至第3代细胞形态较均一。诱导后细胞经免疫细胞化学法检测均表达神经元特异性烯醇化酶、巢蛋白、胶质纤维酸性蛋白、神经丝蛋白、神经生长相关蛋白43;ELISA法检测细胞培养上清脑源性神经营养因子、神经营养因子3、神经营养因子4为阳性表达;RT-PCR检测细胞微管相关蛋白、神经元特异性烯醇化酶、神经丝蛋白、神经生长相关蛋白43均为阳性表达。结果表明人胚胎脑组织蛋白提取物使人胎盘间充质干细胞诱导分化为神经元样细胞。 马丽君 范恒 马晓娜 魏军 李玉奎关键词:间质干细胞 干细胞 人胎盘间充质干细胞 当归芍药散神经保护作用的实验研究 被引量:9 2008年 目的观察当归芍药散(DSS)的神经保护作用,为阿尔茨海默病(AD)防治提供理论依据。方法按DSS经典方制备DSS水煎剂后以5%、10%、20%三种体积分数分别灌服家兔1d和10d(观察1组~观察6组),对照组灌服等量生理盐水。末次灌胃给药1h后处死家兔,由枕骨大孔处抽取脑脊液(DSS脑脊液和空白脑脊液)。分别采用上述各组脑脊液及Aβ1-40处理嗜铬细胞瘤细胞株PC12细胞,MTT比色法观察细胞活性变化,免疫组化法观察α7烟碱型乙酰胆碱能受体(α7nAchR)阳性表达情况。结果β1-40处理者PC12细胞活性和α7nAchR阳性细胞数明显小于空白脑脊液处理者(P〈0.01);灌服20%DSS脑脊液处理者PC12细胞活性及α7nAchR阳性细胞数明显高于Aβ1-40处理者。结论DSS可能通过抑制β-淀粉样多肽的神经毒性作用而改善AD患者的学习记忆功能,机制为调节细胞α7nAChR表达。 田建英 马锋 马伟 马丽君关键词:当归芍药散 维生素E对神经细胞氧化应激损伤的保护作用 被引量:3 2012年 目的探讨维生素E对FeSO4和H2O2诱导PC12细胞氧化应激损伤模型的保护作用及其可能的机制。方法采用FeSO4和H2O2作用产生自由基的方法诱导建立PC12细胞氧化应激损伤模型。MTT比色法测定细胞活性,硫代巴比妥酸法测定MDA含量,黄嘌呤氧化酶法测定SOD活力,免疫细胞化学法测定α7烟碱型乙酰胆碱受体(nAchR)阳性表达及dot blot法测定α7nAchR亚单位水平。结果与FeSO4和H2O2损伤组(0.136±0.015)进行比较,维生素E组(0.178±0.025)和EGCG组(0.181±0.029)均能明显提高PC12细胞的活细胞数量(P<0.01),提高SOD活力(15.29±0.79)U.mL-1对(17.37±0.76)U.mL-1、(17.90±0.44)U.mL-1,P<0.01,有效降低MDA的含量(4.51±0.20)mmol.L-1对(3.39±0.11)mmol.L-1、(3.20±0.15)mmol.L-1,P<0.01,明显上调α7nAChR的表达(0.0910±0.0272)对(0.1895±0.0392)、(0.1956±0.0322),P<0.01。结论维生素E对FeSO4和H2O2诱导建立PC12细胞氧化损伤模型具有明显的保护作用,其作用机制可能与维生素E清除自由基,抑制脂质过氧化过程和保护α7nAchR有关。 马丽君 曹池 田建英 李宁康关键词:维生素E 神经细胞 枸杞多糖联合奥沙利铂可逆转结肠癌干细胞的耐药 被引量:2 2024年 背景:结肠癌临床主要采用以氟尿嘧啶、伊立替康及奥沙利铂为基础的治疗方法,研究发现这些药物的转运与ABC转运蛋白G家族成员2(ATP-binding cassette transport protein of G2,ABCG2)等膜转运蛋白相关,然而当患者对这些化疗药物产生耐药后,ABCG2的高表达致使治疗效果明显下降,引起了结肠癌的耐药问题。临床急切需要新的药物及治疗方法来提高疗效,枸杞多糖具有广泛的生物学活性,将多糖作为抗肿瘤药物,可以克服化疗和放疗过程中杀死肿瘤细胞的同时对机体正常细胞的损伤。目的:通过体外实验探索枸杞多糖联合奥沙利铂对结肠癌干细胞耐药的逆转作用,进而探讨枸杞多糖逆转结肠癌耐药的可能分子机制。方法:选用结肠癌细胞株HCT116以及奥沙利铂耐药细胞株HCT116-OXR进行体外实验,采用CCK8检测细胞增殖情况确定枸杞多糖和奥沙利铂的最适干预浓度和干预时间,进一步分为HCT116对照组,HCT116-OXR空白处理组,枸杞多糖组(2.5 mg/mL枸杞多糖),奥沙利铂组(10μmol/L奥沙利铂),枸杞多糖+奥沙利铂组(2.5 mg/mL枸杞多糖+10μmol/L奥沙利铂),流式细胞仪检测细胞凋亡情况,免疫荧光和Western blot检测磷酸甘露糖异构酶(phosphomannose isomerase,PMI)和ABCG2的表达,Western blot检测PI3K,AKT,Bcl-2和Bax的蛋白表达水平。结果与结论:①HCT116-OXR相较HCT116对枸杞多糖更敏感(P<0.05);②与HCT116-OXR空白处理组比较,奥沙利铂联合枸杞多糖促进了HCT116-OXR细胞凋亡(P<0.05),Bcl-2蛋白表达明显下调(P<0.05),Bax蛋白表达明显上调(P<0.05),ABCG2、PMI、PI3K、AKT的蛋白表达明显下调(P<0.05);③结果表明枸杞多糖通过抑制PMI/PI3K/AKT通路逆转结肠癌耐药,为研究枸杞多糖增敏化疗作用的分子机制奠定了基础。 艾芳芳 肖红燕 汪芳 朱永朝 马丽君关键词:ABCG2 PI3K 枸杞多糖 结肠癌干细胞 耐药