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人骨形态发生蛋白3抑制骨肉瘤细胞系MG63和U2OS的体外生长被引量：3: 2009年; 目的研究人骨形态发生蛋白3(hBMP3)对骨肉瘤细胞系MG63和U2OS的生物学作用。方法hBMP3的重组腺病毒和表达hBMP3的条件培养液(rhBMP3-CM)干预MG63和U2OS,台盼蓝拒染法、TUNEL法、吖啶橙/溴乙啶荧光双染法、Transwell小室和碱性磷酸酶活性测定法分别检测细胞增殖、凋亡、迁移以及成骨分化能力的变化;空白组不做任何处理,实验对照组用AdGFP和rGFP-CM处理。结果实验对照组和空白组间差别无显著性。与各自的对照组相比,在观察时间内,两种处理均致实验组细胞:(1)存活率降低;(2)凋亡率增加;(3)穿膜细胞数减少;(4)碱性磷酸酶活性增加。结论hBMP3对骨肉瘤细胞系具有抑制作用,并促其向成骨方向分化。; 吴丽美何焕玲李星星陈英华卫佳左国伟苗静琨王嫣周兰; 关键词：骨形态发生蛋白骨肉瘤细胞迁移

钙结合蛋白S100A2对Wnt/β-catenin信号途径活性的上调作用被引量：3: 2008年; 目的研究钙结合蛋白S100A2对Wnt/β-catenin信号途径活性的影响,并探讨其可能的机制。方法原核诱导表达GST-hS100A2,经纯化后加入骨肉瘤细胞株MG63和人结肠癌细胞株HCT116的培养液中,Western blot检测细胞中β-catenin含量的变化;荧光素酶活性分析法检测S100A2对HEK293细胞中β-catenin/TCF4活性的影响;以表达GSK-3β、DVL、Axin的相应质粒分别转染HEK293细胞,GST-Pulldown/Western blot实验检测S100A2与这些蛋白质和β-catenin之间的相互作用。结果S100A2使MG63和HCT116细胞中β-catenin含量增加、β-catenin/TCF4活性增强;S100A2分别与β-catenin和GSK-3β之间存在相互作用,而与DVL和Axin之间则未发现相互作用。结论S100A2可以上调Wnt/β-catenin信号途径的活性,其机制可能涉及S100A2与β-catenin和GSK-3β之间的相互作用。; 赖天霞苗静琨左国伟何焕玲李星星卫佳吴丽美寇小琴何通川周兰; 关键词：蛋白质相互作用

人S100A6-GST融合蛋白的原核表达和纯化被引量：8: 2007年; 目的:制备人S100A6-GST融合蛋白,为研究人S100A6((hS100A6)蛋白的功能奠定基础。方法:从pHAHA-hS100A6中双酶切获取hS100A6基因,亚克隆至原核表达载体pGST-moluc,构建pGST-moluc-hS100A6,转化BL21后,IPTG诱导重组菌表达hS100A6蛋白,SDS-PAGE及WesternBlot鉴定表达产物,Glutathion-Sepharose4B球珠分离纯化。结果:重组菌株表达出与理论预测值相符的一个约36ku的hS100A6融合蛋白,纯化后的融合蛋白的产量为3mg/L菌液,纯度约92%。结论:成功构建了hS100A6-GST原核表达质粒,在大肠杆菌中表达纯化后得到较高浓度的hS100A6-GST融合蛋白,为hS100A6蛋白功能的研究打下了基础。; 苗静琨赖天霞左国伟李星星王嫣蒋薇何通川周兰; 关键词：融合蛋白原核表达蛋白纯化

人S100A2-GST融合蛋白原核表达和纯化被引量：3: 2008年; 目的:制备人S100A2-GST融合蛋白(Human S100A2-GST fusion protein,hS100A2-GST),为进一步研究人hS100A2蛋白的功能及其与其它因子或系统的相互作用奠定基础。方法:从pHAHA-hS100A2中双酶切获取hS100A2基因,亚克隆至原核表达载体pGST-moluc,构建pGST-moluc-hS100A2,转化BL21后酶切鉴定,IPTG诱导重组菌表达融合蛋白hS100A2-GST,再经过Glutathion-Sepharose4B球珠分离纯化、SDS-PAGE及Western Blot鉴定,Bradford法蛋白定量。结果:XhoⅠ和EcoRⅠ双酶切该重组质粒后获得2个片段,分别约300bp和5kb,提示pGST-moluc-hS100A2构建正确;重组菌株经过IPTG诱导后,表达分子量约为36kD的蛋白,产率达5mg/L菌液;Glutathion-Sepharose4B球珠纯化后,该融和蛋白纯度达92%;Western Blot显示该蛋白可以被S100A2的抗体特异识别,证实其为hS100A2-GST融合蛋白。结论:成功构建了hS100A2-GST原核表达质粒pGST-moluc-hS100A2;该质粒可在大肠杆菌中诱导表达hS100A2-GST融合蛋白,产率高;应用Glutathion-Sepharose4B球珠可获得纯度达92%的该蛋白。为后续有关hS100A2的研究打下了基础。; 卫佳王胜苗静琨陈英华李星星吴丽美左国伟何通川周兰; 关键词：蛋白纯化蛋白鉴定

人骨形态发生蛋白2,3,6,12对大鼠骨肉瘤细胞株UMR106的作用: 2010年; 目的:研究人骨形态发生蛋白(human bone morphogenetic proteins,hBMP)对大鼠骨肉瘤细胞株UMR106的作用。方法:用hBMP2,3,6,12重组腺病毒(AdBMP2,3,6,12)干预大鼠骨肉瘤细胞株UMR106,利用台盼蓝拒染法、TUNEL法、吖啶橙/溴乙啶(AO/EB)荧光双染法、Transwell小室和碱性磷酸酶活性测定法分别检测细胞增殖、凋亡、迁移以及成骨分化能力的变化。结果:与空白对照组和实验对照组比较,AdBMPs的干预致骨肉瘤细胞株细胞存活率降低,并呈一定的时间依赖性;凋亡率均随时间延长而增加,并且TUNEL和AO/EB两种检测方法的结果一致;3个检测时间点的细胞穿膜数均明显减低;碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性在干预第3天开始逐渐增加,至第9天仍可观测到,以上差异均有统计学意义(P<0.01)。结论:以腺病毒介导基因转入的作用方式,hBMP2,3,6,12可以抑制大鼠骨肉瘤细胞株UMR106的增殖和迁移,并诱导其凋亡和向成骨细胞分化。; 李星星何焕玲吴丽美马闻陈英华卫佳苗静琨周兰; 关键词：骨形态发生蛋白细胞迁移碱性磷酸酶活性

重庆市新生儿脂肪酸氧化代谢病筛查及确诊患儿随访分析被引量：2: 2022年; 目的:了解重庆市脂肪酸氧化代谢病(FAOD)的发病率、临床特征、基因突变特点及预后。方法:采集2020年7月至2022年2月重庆医科大学附属妇女儿童医院新生儿疾病筛查中心招募的35374名新生儿的血液标本,采用串联质谱法检测干血斑中酰基肉碱谱,初筛阳性的患儿于2周内召回,进一步通过尿有机酸、血生化及基因检测等方法确诊,并对确诊患儿进行治疗和随访。结果:35374名新生儿初筛阳性267例,初筛阳性率为0.75%,基因确诊5例(FAOD发病率为1/7075),其中原发性肉碱缺乏症(PCD)3例(发病率为1/11791),短链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症(SCADD)和极长链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症(VLCADD)各1例(发病率均为1/35374)。3例PCD患儿SLC22A5基因突变以c.1400C>G和c.338G>A常见,c.621G>T为新突变,其中2例患儿予口服补充左卡尼汀,随访期间无临床表现;1例患儿拒绝治疗,于6月龄急性发作,补充左卡尼汀后症状好转,现生长发育正常。1例SCADD患儿检出ACADS基因复合杂合突变(c.417G>C和c.1054G>A),无临床表现。1例VLCADD患儿检出ACADVL基因复合杂合突变(c.1349G>A和c.1843C>T),新生儿期急性发作,治疗好转后予富含中链脂肪酸的奶粉喂养至今,随访期间发育正常。结论:重庆市FAOD发病率较高,其中PCD比例最高,VLCADD患儿临床表型严重。通过新生儿筛查,早诊断、早治疗有助于改善患儿预后。; 陈敏尹一帆刘浩彭勇叶亮罗茜苗静琨; 关键词：新生儿筛查串联质谱法基因突变随访研究

钙结合蛋白S100A6对Wnt／β-catenin信号途径的影响被引量：9: 2008年; 目的研究钙结合蛋白S100A6对Wnt／β-catenin信号途径的影响及其机制。方法异丙基β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导表达、谷胱甘肽-琼脂糖球珠分离纯化融合蛋白GST-hS100A6；Westernblot和荧光素酶活性分析法检测S100A6对细胞内B—catenin水平和B—catenin／T细胞因子4（TCF4）活性的影响；GST-pulldown和Westernblot技术研究S100A6与该信号途径主要成员β-catenin、糖原合酶激酶-3β（GSK-3β）、Dvl和Axin之间的相互作用。结果S100A6可致MG63和HCT1 16细胞β—catenin水平升高，并可使HEK293细胞β—catenin／TCF4活性增强；S100A6与β—catenin、GSK-36和Dvl之间存在着直接的相互作用，而与Axin之间无相互作用。结论S100A6能够增强Wnt／β-catenin信号途径的活性，其机制可能涉及S100A6与该途径重要成员β—catenin、GSK-3β和Dvl之间存在着直接的相互作用有关。; 赖天霞苗静琨何焕玲左国伟李星星王嫣王胜何通川周兰; 关键词：蛋白质相互作用

重组人骨形态发生蛋白-2和-6对人骨肉瘤细胞株MG63和U2OS的作用: 2009年; 为研究重组人骨形态发生蛋白rhBMP-2和rhBMP-6对人骨肉瘤细胞株MG63和U2OS的作用,分别用含rhBMP-2和rhBMP-6及重组绿色荧光蛋白的条件培养液干预人骨肉瘤细胞MG63和U2OS,利用台盼蓝拒染法、TUNEL法、吖啶橙/溴乙啶(AO/EB)荧光双染法、Transwell小室和碱性磷酸酶活性测定法分别检测细胞增殖、凋亡、迁移以及成骨分化能力的变化。结果显示与未实施任何干预的空白对照组和用rGFP干预实验对照组相比,rhBMP-2和rhBMP-6的干预致两种骨肉瘤细胞株:细胞存活率均随时间逐渐降低;凋亡率呈时间依赖性增加;穿膜数明显减低;碱性磷酸酶(ALP)活性逐渐增加。以上差异均有统计学意义(P<0.01)。表明rhBMP-2和rhBMP-6可抑制人骨肉瘤细胞株MG63和U2OS的增殖和迁移、诱导其凋亡和向成骨细胞分化。; 何焕玲李星星吴丽美陈英华卫佳苗静琨周兰; 关键词：骨形态发生蛋白细胞迁移碱性磷酸酶活性

人骨形态发生蛋白12对人骨肉瘤细胞的生物学作用被引量：2: 2008年; 为研究人骨形态发生蛋白(human bone morphogenetic proteins,hBMP)12对人骨肉瘤细胞株MG63和U2OS的作用,分别用hBMP12重组腺病毒(AdBMP12)以及含重组hBMP12(recombinant hBMP12,rhBMP12)的条件培养液干预人骨肉瘤细胞MG63和U2OS,利用台盼蓝拒染法、TUNEL法、吖啶橙/溴乙啶(AO/EB)荧光双染法、Transwell小室和碱性磷酸酶活性测定法分别检测细胞增殖、凋亡、迁移以及成骨分化能力的变化.与相应对照组相比,AdBMP12和含rhBMP12的条件培养液的干预致两种骨肉瘤细胞株细胞存活率降低,并呈一定的时间依赖性;凋亡率均随时间延长而增加,并且两种检测方法的结果一致;不同时间点的细胞穿膜数均明显减低;碱性磷酸酶活性在干预3d后开始逐渐增加,至第9d仍可观测到.以上差异均有统计学意义(P<0.01).提示无论是以腺病毒介导基因转入还是重组蛋白直接作用方式,hBMP12都可以抑制人骨肉瘤细胞株MG63和U2OS的增殖和迁移,并诱导其凋亡和向成骨细胞分化.; 李星星何焕玲吴丽美左国伟苗静琨周兰; 关键词：骨形态发生蛋白细胞增殖细胞迁移碱性磷酸酶活性

S100A6的转录调控及其与肿瘤关系的研究进展被引量：3: 2007年; S100蛋白家族是一类非泛素化、EF-手型钙结合蛋白，通过与钙离子及靶蛋白的相互作用，在体内发挥多种生物学作用，参与细胞周期活动、细胞分化、肿瘤生长以及细胞外基质分泌活动等过程。其分布具有细胞、组织特异性。其中多个成员在肿瘤中表达异常，并与肿瘤的增殖、浸润转移和凋亡密切相关，其中包括S100A6。S100A6又称为钙周期蛋白（Calcyclin，Cacy），过去也称为2A9、5810、PRA和CACY。; 苗静琨周兰; 关键词：S100A6 肿瘤关系转录调控钙结合蛋白 S100蛋白生物学作用

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苗静琨

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