张玉成
- 作品数：31 被引量：79H指数：5
- 供职机构：吉林大学中日联谊医院更多>>
- 发文基金：吉林省发展与改革委员会计划资助项目吉林省科技厅科研基金吉林省科技厅资助项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学自动化与计算机技术理学更多>>
- 重组核心蛋白聚糖转染对HepG2细胞周期、凋亡以及P21表达的影响被引量：2
- 2008年
- 目的将已构建完成的分泌型核心蛋白聚糖(DCN)真核表达载体转染到HepG2中并检测其表达同时研究其抗肿瘤作用的机制。方法脂质体介导分泌型DCN真核表达载体转染HepG2细胞,经G418筛选建立稳定转染的细胞株,采用RT-PCR、免疫组化检测其表达。MTT检测细胞增殖活力,流式细胞仪分析细胞周期,RT-PCR方法检测P21WAF1/CIP1mRNA表达情况。结果RT-PCR可见转染组细胞DCN mRNA表达明显增多,免疫组化可见转染组细胞DCN蛋白表达明显增高。细胞生长曲线显示转染组细胞生长缓慢;G1期细胞显著增多;P21WAF1/CIP1mRNA表达增高。结论本研究成功建立稳定转染DCN的HepG2细胞株,证实DCN通过阻滞细胞周期、诱导细胞凋亡和提高P21WAF1/CIP1蛋白抑制HepG2的生长。
- 张玉成王雅丽杜珍武赵虹吕俊峰张桂珍
- 关键词：核心蛋白聚糖P21^WAF1/CIP1细胞周期转染HEPG2
- 核心蛋白聚糖在HepG_2细胞中的表达及作用
- 2008年
- 目的构建分泌型核心蛋白聚糖(DCN)真核表达载体,并观察其在肝癌细胞HepG2中的表达和抗肿瘤作用。方法应用PCR技术扩增DCN全长基因cDNA片段,与pcDNA3.1载体连接,并转化到大肠杆菌中扩增获得重组载体,应用双酶切、PCR以及测序鉴定此重组载体,脂质体介导转染HepG2,经G418筛选建立稳定转染细胞株,采用RT-PCR、免疫组化检测其表达。MTT检测细胞增殖活力,流式细胞仪分析细胞周期。结果RT-PCR可见转染组细胞mRNA表达明显增多,免疫组化可见转染组细胞DCN蛋白表达明显增高。细胞生长曲线显示转染组细胞生长缓慢,G1期细胞显著增多。结论本方法可成功建立稳定转染DCN的HepG2细胞株,并证实DCN能够抑制HepG2细胞株的生长。
- 张玉成王雅丽杜珍武高申吕俊峰张桂珍
- 关键词：核心蛋白聚糖聚合酶链反应转染HEPG2
- 成人脂肪间充质干细胞的分离、培养与鉴定被引量：4
- 2009年
- 目的从成人皮下脂肪组织提取具有连续传代和分化潜能的间充质干细胞,为进一步实验研究提供应用基础。方法采用机械分离—胶原酶消化法分离剖宫产患者皮下脂肪组织,所得细胞培养,传代,用差速贴壁法提纯所得细胞。取第4代细胞进行诱导分化,使其分化成脂肪细胞。取第6代细胞进行流式细胞术检测表面抗原CD13,免疫细胞化学法检测表面抗原CD90。结果成人皮下脂肪中含有长梭形细胞,此种细胞在体外能稳定传代且能被诱导分化成脂肪细胞,与空白对照相比,表面抗原CD13和CD90均呈阳性。结论此种方法能从成人皮下脂肪中分离出具有间充质干细胞性质的细胞,为进一步实验研究提供了有效方法和基础材料。
- 范颖杜珍武张玉成张桂珍
- 关键词：脂肪组织间充质干细胞流式细胞术免疫细胞化学
- 家蚕素Ⅱ基因真核表达载体的构建被引量：2
- 2011年
- 目的构建(BbxⅡ)基因真核表达载体,为研究家蚕素Ⅱ在哺乳动物细胞中的生物学作用奠定基础。方法以含有BbxⅡcDNA的PUC57质粒为模板,采用聚合酶链式反应(PCR)扩增BbxⅡcDNA片段。真核表达载体PcD-NA3.1及PCR产物经双酶切后连接,转化大肠杆菌DH-5α感受态菌,获得重组载体PcDNA3.1-Bbx/His,进行酶切鉴定和测序鉴定。结果 PCR获得与预期大小一致约300 bp的特异性DNA,重组载体PcDNA3.1-BbxⅡ/His经双酶切及测序鉴定证实,BbxⅡ基因的cDNA片段正确插入真核表达载体中。结论成功构建含有家蚕素基因Ⅱ的真核表达载体。
- 李洪霞杜珍武张玉成郑锦花吕俊峰张桂珍
- 关键词：聚合酶链式反应真核表达载体
- 山茱萸多糖对D-gal致衰小鼠IL-1、IL-2、IL-6以及NO、NOS作用的实验研究被引量：8
- 2008年
- 目的研究D-半乳糖(D-gal)衰老小鼠NO自由基及三种细胞因子的活性,以及山茱萸多糖对增龄变化的影响。方法以D-gal致衰小鼠为研究对象,测定NO、NOS及IL-1、IL-2、IL-6等活性。结果D-gal致衰小鼠NO、NOS及IL-6显著高于青年对照组(P<0.01);而IL-1、IL-2却较青年对照组显著下降(P<0.05,P<0.01)。与衰老小鼠比较,给予山茱萸多糖大小剂量组能明显降低NO、NOS及IL-6,并且能显著提高IL-1、IL-2。结论山茱萸多糖可以通过降低NO自由基和IL-6含量,提高IL-1、IL-2含量.改善机体免疫功能,起到延缓衰老的作用。
- 张玉成欧芹魏晓东王雅丽张桂珍
- 关键词：山茱萸多糖IL-6IL-1IL-2
- 量子点在生物医学领域的应用被引量：3
- 2009年
- 王雅丽张玉成张桂珍
- 关键词：量子点生命科学荧光染料体内外
- 水溶性CdTe量子点-广谱抗细胞角蛋白单克隆抗体荧光探针的制备及其对肝癌细胞HepG2的免疫荧光标记被引量：1
- 2010年
- 目的制备水溶性CdTe量子点-广谱抗细胞角蛋白单克隆抗体(QDs-MAb)荧光探针,并对其特异免疫性识别能力和荧光稳定性进行检测。方法在EDC偶联剂的作用下,将水溶性CdTe量子点与广谱细胞角蛋白单克隆抗体(PanCK)进行了连接;对肝癌细胞HepG2采用免疫细胞化学法和QDs-MAb单抗荧光探针直接免疫荧光标记法观察比较PanCK蛋白在细胞内的分布;将量子点与传统的荧光染料FITC的荧光强度和荧光稳定性进行了比较。结果QDs-MAb单抗荧光探针对HepG2细胞内的PanCK分子具有特异性的识别能力;与FITC相比,QDs-MAb荧光探针荧光度更强,光化学稳定性更好,激发光连续照射30min及室温放置3d后均未见明显淬灭。结论本实验成功制备了QDs-MAb荧光探针,为半导体量子点用于上皮来源的肿瘤细胞内PanCK分子的相关检测提供了科学依据。
- 隋玉杰王茜王雅丽吴枚郑锦花杜珍武张玉成张桂珍
- 关键词：角蛋白免疫荧光标记
- 重组核心蛋白聚糖转染对HepG2细胞p21^(WAF1/CIP1)表达的影响被引量：1
- 2009年
- 目的:将已构建完成的分泌型核心蛋白聚糖真核表达载体转染到HepG2细胞中并检测核心蛋白聚糖及p21WAF1/CIP1的表达,探讨核心蛋白聚糖抗肿瘤作用的机制。方法:HepG2细胞分为转染pcDNA3.1-DCN载体的转染组和转染pcDNA3.1空载体的对照组,脂质体介导核心蛋白聚糖真核表达载体及质粒pcDNA3.1载体分别转染到HepG2细胞中,经G418筛选建立稳定转染的细胞株,采用RT-PCR法检测核心蛋白聚糖和p21WAF1/CIP1mRNA表达;Western blotting法检测核心蛋白聚糖和p21WAF1/CIP1蛋白质的表达;免疫组化法检测核心蛋白聚糖蛋白质的表达。结果:RT-PCR检测转染组细胞核心蛋白聚糖及p21WAF1/CIP1mRNA表达的灰度比值均高于对照组(P<0.05),Western blotting检测核心蛋白聚糖及p21WAF1/CIP1蛋白质表达的灰度比值也高于对照组(P<0.05),免疫组化检测转染组细胞核心蛋白聚糖蛋白质表达的阳性细胞计数高于对照组(P<0.05)。结论:成功建立了稳定转染核心蛋白聚糖的HepG2细胞株,并证实核心蛋白聚糖能够提高p21WAF1/CIP1mRNA和蛋白质的表达。
- 王雅丽张玉成杜珍武张桂珍
- 关键词：核心蛋白聚糖P21^WAF1/CIP1HEPG2转染
- 放射性^(125)I粒子植入对裸鼠人乳腺癌细胞移植瘤的抗肿瘤作用被引量：7
- 2011年
- 目的:探讨放射性125I粒子植入对裸鼠人乳腺癌细胞种植瘤的抗肿瘤作用,阐明其抗肿瘤机制。方法:将120只人乳腺癌细胞MCF-7移植瘤模型的裸鼠,随机分为3组:放射性125I粒子植入组、空粒子植入组和无粒子植入组,每组40只,按照巴黎系统原则植入粒子。采用RT-PCR和Western blotting法检测肿瘤组织中Fas mRNA和蛋白的表达以及caspase-3和caspase-8酶的活性,流式细胞术检测细胞周期。结果:人乳腺癌细胞MCF-7放射性125I植入组与空粒子组及无粒子植入组比较,肿瘤组织体积明显缩小(P<0.05),FasmRNA、Fas蛋白、caspase-3及caspase-8表达均明显增高(P<0.05),其中caspase-3和caspase-8表达均大于0.6。流式细胞术显示,放射性125I粒子植入组G0/G1期细胞显著增多(P<0.05),而S期细胞明显降低(P<0.05)。结论:放射性125I粒子植入人乳腺癌肿瘤内可以杀伤肿瘤细胞,抑制肿瘤细胞生长周期,促进肿瘤细胞凋亡。
- 肖钟迪张玉成梁春林张国利井月盖宝东
- 关键词：MCF-7细胞FASCASPASE-8
- 人核心蛋白聚糖基因靶向肺癌细胞特异性表达载体的构建及鉴定被引量：1
- 2011年
- 目的构建调控人核心蛋白聚糖(DCN)基因特异性基因表达载体,为进一步应用该基因进行肺癌靶向治疗的研究奠定实验基础。方法利用特异性引物,应用PCR技术从人外周血基因组中扩增肺癌细胞特异性表达的人分泌型白细胞蛋白酶抑制剂的启动子,利用基因重组技术将该启动子插入真核细胞表达载体pcDNA3.1(+),替换该载体的CMV启动子与增强子序列,从而构建成由人分泌型白细胞蛋白酶抑制剂基因的启动子启动基因表达的基因表达载体。将人DCN基因通过基因重组技术插入到上述载体人分泌型白细胞蛋白酶抑制剂基因启动子的下游,PCR产物通过测序鉴定核苷酸序列,重组载体通过限制性酶切进行鉴定。结果 PCR扩增的人分泌型白细胞蛋白酶抑制剂的启动子片段长度为1 250bp;该启动子经测序获得的核苷酸序列与GenBank上该基因上游5′末端转录调控区的序列完全一致;重组载体的酶切鉴定结果显示该启动子成功插入到pcDNA3.1(+)载体,并替换CMV启动子与增强子序列,人核心蛋白聚糖基因成功插入该载体。结论成功构建由人分泌型白细胞蛋白酶抑制剂基因启动子调控人核心蛋白聚糖基因表达载体。
- 吕俊锋杜珍武张玉成张桂珍
- 关键词：核心蛋白聚糖聚合酶链反应基因表达
