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枳早期结瘤素样基因PtBCP1的克隆和分析: 2012年; [目的]克隆枳早期结瘤素样基因PtBCP1并对其序列进行分析。[方法]以枳消减文库中的C28 EST为种子序列进行电子克隆,据此设计引物进行PCR,以获得枳早期结瘤素样基因PtBCP1的全长cDNA和DNA序列,并对获得的序列进行生物信息学分析。[结果]PtBCP1基因由2个外显子和1个内含子组成,在枳幼苗根中的表达量是叶中的140倍,该基因编码的蛋白含131个氨基酸残基,预测分子量为14.0 kD,理论等电点为8.75,具有N端信号肽和PCLD(PFMD:PF02298)功能域,但无完整的铜离子结合位点,属于早期结瘤素样蛋白。[结论]为进一步研究PtBCP1基因的生物学功能奠定了基础。; 姚利晓马园园马园园许兰珍李凤龙彭爱红许兰珍陈善春; 关键词：克隆

A Rapid Method for the Isolation of Small Amount DNA from Citrus Early Embryo: 2010年; [Objective] The present study aimed to establish a rapid method for the isolation of small amount DNA from citrus.[Method] By using the improved CTBA method,the genomic DNA was extracted respectively from 20,10,5 and 2.5 mg hybrid embryos of citrus,and then the DNA quality was detected and followed by SSR verification.[Result] The method was very simple and rapid,which needed less materials.In addition,the isolated DNA showed good purity with the OD260/OD280 of 1.8-2.1,and could meet the requirement for PCR-based technology,such as SSR,etc..[Conclusion] The method could be used for rapid extraction of small amount of genomic DNA from citrus.; 范达雷天刚王军政宋二玲彭爱红谭洪泉王金萍李政利李凤龙陈勇陈善春; 关键词：PCR

资阳香橙根cDNA全长文库的构建及EST分析: 2011年; 以资阳香橙根RNA为材料，采用趴压ART技术构建了cDNA全长文库，并对其质量进行鉴定。结果显示，该文库的库容量为4．8×10。pfu／mL，重组率为93％，文库插入片段大小主要集中在0．5～1．0kb。从文库中随机挑取450个克隆进行5’端单向测序，去除载体序列及低质量的序列后，共获得有效长度大于150bp的高质量ESTs（expressed sequence tags）序列438条，利用Bi-oEdit软件对有效ESTS序列进行片段重叠群分析和拼接后，获得251个独立基因（Unigenes），其中包括87个片段重叠群（Contigs）和164个独立的ESTs（Singlets）；通过与NCBI的非冗余核酸数据库进行tBLASTx比对，初步确定已知功能基因146个，未知功能基因91个．另有14个umgene未与数据库中序列匹配。该研兜为进一步分离克隆资阳香橙根部功能基因奠定了基础。; 王金萍宋二玲姚利晓李凤龙何永睿陈善春; 关键词：CDNA文库表达序列标签测序

枳PtMLP1启动子的克隆和表达分析: 2023年; 【目的】基因工程是柑橘品种改良的一种重要手段。本研究基于枳根消减文库中主要乳胶蛋白基因PtMLP1片段,克隆根特异启动子序列,为研究外源基因在柑橘根组织的特异表达奠定基础。【方法】同源克隆PtMLP1及启动子序列。利用ExPASy、PSIPRED、SWISS-MODEL等在线软件对PtMLP1编码蛋白的理化特征、二级结构和三级结构进行生物信息学分析,利用PlantCARE数据库对PtMLP1启动子的顺式作用元件进行预测。实时荧光定量PCR法对PtMLP1在不同树龄枳根和叶中的表达进行分析。构建PtMLP1启动子与GUS标记基因的融合载体,利用根癌农杆菌转化法转化枳上胚轴,GUS染色观察标记基因的表达部位。【结果】枳PtMLP1含2个外显子和1个内含子,开放阅读框长471 bp。PtMLP1蛋白由156个氨基酸组成,分子量17.63 kDa,等电点5.49,含Bet v I功能域。其二级结构含3个α-螺旋和7个β-折叠,三级结构包含一个保守疏水基结合位点和一个富含甘氨酸的回环结构。5′端1666 bp的上游调控序列不仅有TATA-box、CAAT-box等启动子结构的核心元件,还具有多个根组织特异表达元件,以及TGACG-motif、P-box和ABRE等激素应答相关的顺式作用元件。3′端非翻译区具有加尾信号AATAAA。该基因在1月龄苗、6月龄苗、20年生成年枳根中的表达量分别是叶中的46.34、74.82、110.25倍。构建启动子的融合表达载体pBI121-ProPtMLP1::GUS,获得枳转基因植株。PtMLP1启动子驱动GUS在转基因枳幼苗根中特异表达,GUS在3个转基因枳株系的根中表达量分别为叶中表达量的124.78、11.53和7.76倍。【结论】获得柑橘主要乳胶蛋白PtMLP1及启动子序列,该启动子可驱动标记基因在柑橘根组织特异表达。; 姚利晓苏娟郭兴茹李凤龙何永睿邹修平陈善春; 关键词：GUS

资阳香橙根cDNA全长文库的构建及EST分析: 以资阳香橙根RNA为材料，采用SMART技术构建了cDNA全长文库并对其质最进行了鉴定。结果显示，该文库的库容量为4.8×105 pfu·mL-1，重组率为93％，文库插入片段大小主要集中在0.5～1.0 kb。从文库中...; 王金萍姚利晓李凤龙何永睿陈善春; 关键词：表达序列标签 EST分析; 文献传递

一种快速微量提取柑橘早期胚基因组DNA的方法被引量：5: 2011年; [目的]建立一种快速微量提取柑橘基因组DNA的方法。[方法]采用优化的CTAB微量提取法,以20.0、10.0、5.0、2.5 mg早期杂种胚为材料进行基因组DNA的提取,并对其DNA进行质量检测和SSR验证。[结果]该方法简单易行,所需材料少,提取的DNA纯度较高,OD260nm/OD280nm在1.800～2.000,可满足SSR等以PCR扩增为基础的试验需要。[结论]建立的方法可以用于快速微量提取柑橘基因组DNA。; 范达雷天刚王军政宋二玲彭爱红谭洪泉王金萍李政利李凤龙陈勇陈善春; 关键词：CTAB法 PCR

植物根特异性启动子研究进展被引量：3: 2012年; 特异性表达启动子在高等植物转基因育种中对外源基因的调控已经成为分子生物学研究领域的前沿和热点,近几年来,关于植物根特异性表达表达启动子的研究逐渐增多,该研究综述了根特异性启动子的种类、特点及研究方法,并对其应用前景进行了展望。; 李凤龙姚利晓马园园陈善春; 关键词：外源基因基因表达调控转基因植物

枳根特异性contig2基因及启动子的克隆与分析: 柑橘是世界上最重要的果树之一。砧木是果树的基础,砧木的根系是影响接穗对营养、水分和无机盐吸收的关键功能器官,同时,也是直接对抗土壤微生物、干旱、酸性和重金属侵害的第一道防御系统,因此,根对于植物的生长发育及其产量具有重要...; 李凤龙; 关键词：EST; 文献传递

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