赵俊龙
- 作品数：16 被引量：22H指数：3
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- 发文基金：国家自然科学基金陕西省自然科学基金高等学校全国优秀博士学位论文作者专项资金更多>>
- 相关领域：医药卫生文化科学生物学更多>>
- 肝细胞特异性杀伤载体的构建和应用
- 2015年
- 目的间充质干细胞(MSC)有重要的免疫调节和组织再生作用,但其治疗肝损伤的机制尚不完全清楚,既可能通过旁分泌因子调节炎症,也可直接转分化为肝细胞。为明确这两种机制,拟构建巨细胞病毒(CMV)启动子驱动的膜定位绿色荧光蛋白(GFP)与白蛋白启动子调控的PE40毒素的共表达质粒,以期杀伤转染MSC中向肝细胞转分化的细胞。方法用PCR获得GFP以及DLL1(Delta-like 1)跨膜区基因片段,融合成膜定位GFP基因并插入pFlag-CMV-1载体。将白蛋白基因启动子和PE40基因片段插入已构建好的膜定位GFP序列下游,构建真核表达载体,荧光显微镜检测GFP的表达。应用可表达白蛋白的人正常肝脏细胞检测该载体对肝细胞的杀伤。结果成功构建肝细胞特异性杀伤载体,该载体转染后对正常肝脏细胞具有杀伤作用,提示该载体可用于探索MSC治疗肝损伤的机制。结论成功构建能特异性杀伤肝细胞的载体。
- 高春辰赵俊龙韩俊李东东赵高炀韩骅秦鸿雁
- 关键词：肝细胞绿色荧光蛋白
- Notch信号对激光诱导的小鼠CNV生成过程中巨噬细胞极化表型及功能的调控被引量：4
- 2015年
- 背景 巨噬细胞在脉络膜新生血管（CNV）中的作用尚存在争议,与其在不同微环境中的功能异质性有关,Notch信号通路参与眼内新生血管生长的调控,但其对CNV中巨噬细胞功能的调控作用尚未证实. 目的 探讨巨噬细胞在CNV生成中极化表型的变化与Notch信号通路对巨噬细胞极化表型的调控.方法 在体实验选择58只成年雄性C57BL小鼠,以随机数字表法按照造模后取材时间的不同随机分为光凝后3d组和7d组.每组选23只小鼠用视网膜光凝法诱导小鼠CNV模型,分别于光凝后3d和7d制备脉络膜铺片,采用免疫荧光染色法观察CNV面积和巨噬细胞阳性染色面积,血管内皮生长因子（VEGF）及肿瘤坏死因子α（TNF-α）的分泌情况;光凝后3d和7d对眼杯冰冻切片行免疫荧光染色,观察CNV中巨噬细胞的极化表型及其分泌VEGF、TNF-α的情况,评估巨噬细胞上Notch信号胞内段（NICD）相应分子标志物的表达情况.每组设定6只小鼠的左眼为正常对照眼,其右眼以激光光凝法建立CNV模型,采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）法检测眼杯组织中VEGF、TNF-α和巨噬细胞极化相关因子的表达情况.体外分离和培养C57BL小鼠的骨髓单核前体细胞,用粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）诱导其分化为巨噬细胞,加入Notch信号通路抑制剂γ-分泌酶抑制剂（GSI）和极化诱导因子,24 h后收集细胞及培养液上清,通过qRT-PCR及ELISA法检测M1型、M2型巨噬细胞分子表面标志物的表达水平. 结果 与光凝后第3天比较,光凝后第7天CNV面积明显增大,但巨噬细胞浸润面积缩小,差异均有统计学意义（t=8.138、5.272,均P=0.000）.光凝后第3天,巨噬细胞在CNV周边和中央均有分布,第7天时局限于CNV中央部.光凝后第3天,色素上皮-脉络膜-巩膜复合体中精氨酸合酶1（Arg1）、甘露糖受体（MR）及白细胞介素-6（IL-6）mRNA的相对表达量明显高于第7天,而诱导型一氧�
- 李娜窦国睿张萍赵俊龙晏贤春燕洁静李曼红韩骅王雨生
- 关键词：NOTCH信号
- Notch调控肿瘤相关巨噬细胞极化与增殖参与小鼠肝癌进展
- 背景:组织定居巨噬细胞和成体骨髓单核细胞分化的巨噬细胞对各种慢性疾病(尤其是肿瘤)的贡献及分子调控机制是巨噬细胞研究领域的热点问题。目前,已有研究表明小鼠乳腺癌中肿瘤相关巨噬细胞(Tumor associated mac...
- 叶雨辰赵俊龙梁世倩杨阳高春辰王亮卢莹莹安冬洁李香敏张妮窦科峰秦鸿雁韩骅
- 关键词：NOTCH信号通路
- 文献传递
- Notch通过microRNA调控巨噬细胞的发育与极化
- 目的 Notch信号途径在胚胎发育中调控细胞分化命运的选择。随着成体发育的进行,Notch的功能主要表现在维持组织稳态。近年的研究还表明,Notch可在成体的多种细胞类型如巨噬细胞中调控细胞的功能可塑性。本研究的目的是探...
- 韩骅秦鸿雁赵俊龙高春辰王亮安东洁
- 文献传递
- 不同极化类型巨噬细胞参与肾纤维化的动物实验研究被引量：2
- 2015年
- 目的 观察单侧输尿管结扎（UUO）模型小鼠肾脏间质纤维化程度,巨噬细胞浸润及极化的改变.方法 8～ 10周龄C57BL/6J雄性小鼠12只,采用单侧输尿管结扎的方法建立UUO模型,分别于手术后第7、14天处死动物,留取肾组织标本.Masson染色法检测胶原组织的沉积,实时定量PCR法检测α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、I型胶原（Col-1） mRNA表达;免疫荧光染色法检测肾间质巨噬细胞浸润程度及极化的表达变化.结果 Masson染色结果显示：与对照组相比,实验组小鼠肾组织胶原纤维沉积增多;与7d组相比,14 d组胶原纤维沉积增多（均P＜ 0.05）.免疫荧光染色结果显示：与对照组相比,UUO组小鼠肾组织α-SMA表达阳性的细胞增多;与7d组相比,14 d组小鼠α-SMA阳性的细胞增多（均P＜0.05）.实时定量PCR结果显示：与对照组相比,实验组肾组织α-SMA、Col-1 mRNA表达增加;与7d组相比,14 d组小鼠肾组织α-SMA、Col-1 mRNA表达增加（均P＜0.05）.与对照组相比,术后14 d组小鼠M2型巨噬细胞亦增多（P＜0.05）;两组M1型巨噬细胞浸润数目的差异无统计学意义.结论 UUO诱导的肾间质纤维化模型肾组织中的巨噬细胞浸润明显增加,主要以M2型巨噬细胞浸润为主,推测M2参与了肾脏纤维化的形成.
- 姜亚丽孙世仁赵俊龙王媛媛刘晓渭秦鸿雁
- 关键词：肾纤维化
- Notch信号介导小胶质细胞神经炎性反应调控PD进展的作用与机制研究
- 研究背景:帕金森症(PD)是由多因素作用引起的神经退行性疾病,文献表明小胶质细胞介导的持续性炎症反应在PD进展中具有重要作用,但其作用机制尚不明确。Notch信号在巨噬细胞可塑性调控中具有关键作用。课题组前期研究发现:在...
- 梁世倩胡昳旸赵俊龙叶雨辰高春辰秦鸿雁
- 关键词：NOTCH信号PD小胶质细胞
- 文献传递
- LIM结构域蛋白FHL1C与GNB2不存在相互作用
- 2015年
- 目的通过哺乳动物双杂交及免疫共沉淀技术验证经质谱技术获得的LIM结构域蛋白FHL1C相互作用候选分子GNB2与FHL1C之间是否存在相互作用,从而丰富FHL1C调控Notch信号通路的机制。方法分别构建融合质粒p CMVGAL4-DBD-FHL1C和p CMV-VP16-GNB2,并将其共转染He La细胞,通过哺乳动物双杂交实验验证两者在细胞内是否具有相互作用;构建带Flag标签的GNB2融合蛋白的重组载体p CMV-Flag-GNB2,酶切鉴定正确后,与带myc标签的FHL1C融合蛋白的重组真核表达载体p CMV-myc-FHL1C共转染He La细胞,利用免疫共沉淀技术检测GNB2与FHL1C之间是否存在生理上的相互作用。结果哺乳动物双杂交实验和免疫共沉淀实验均显示:FHL1C与GNB2之间不存在生理上的相互作用。结论成功构建了实验所需的GNB2的融合蛋白真核表达重组载体,利用哺乳动物双杂交实验及免疫共沉淀技术证实FHL1C与GNB2之间不存在相互作用。
- 刘娟赵俊龙王媛媛韩骅秦鸿雁张丙芳
- 关键词：LIM结构域免疫共沉淀
- The molecular mechanism of macrophage plasticity regulation mediated by Notch
- Tumor is seriously harmful to human health. The genesis and development of tumor is notonly the problem of tum...
- 赵俊龙秦鸿雁韩骅
- 关键词：NOTCHMACROPHAGETUMORMICROENVIRONMENT
- 文献传递
- 肝脏巨噬细胞在NAFLD进展与治疗中的作用被引量：4
- 2019年
- 非酒精性脂肪肝(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)已经是越来越普遍的慢性肝脏疾病,并且严重的情况下可以转变为非酒精性脂肪性肝炎(non-alcoholic steatohepatitis,NASH),甚至可以向肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)转变,严重危害着人们的健康。肝脏巨噬细胞是肝脏中一群重要的非实质细胞,对肝脏的功能稳态和免疫调节起到重要的作用,同时也是人体最大一群组织定居巨噬细胞。近年来,有研究报道,肝脏巨噬细胞参与肝脏疾病的发生,尤其在NAFLD的发病过程中扮演重要角色。然而,肝脏巨噬细胞异质性对于NAFLD的贡献以及在该过程中的分子机制尚不明确。本文主要对肝脏巨噬细胞在NAFLD中的作用、机制以及潜在免疫治疗前景进行综述。
- 郑文彬季刚肖志立高翔秦鸿雁赵俊龙
- 关键词：非酒精性脂肪肝巨噬细胞KUPFFER细胞极化脂代谢
- HEK293T细胞表达的单核细胞趋化蛋白1促进巨噬细胞迁移被引量：2
- 2016年
- 目的构建巨细胞病毒(CMV)启动子驱动的单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)真核表达载体,转染人胚肾HEK293T细胞,验证其对巨噬细胞的趋化作用。方法小鼠基因组DNA作模板,用PCR法获得MCP-1启动子区基因片段,插入p FLAGCMV1载体。用双酶切法和测序鉴定正确后,将构建好的病毒载体转染HEK293T细胞,用Western blot法检测MCP-1的表达,用Transwell^(TM)实验检测转染后细胞分泌的MCP-1对巨噬细胞的趋化作用。结果重组载体酶切鉴定在相应位置有目的片段,转染单核细胞趋化因子重组载体后的HEK293T细胞有MCP-1表达,转染后HEK293T细胞分泌的MCP-1明显增加巨噬细胞的迁移。结论HEK293T细胞表达的MCP-1明显增强巨噬细胞的迁移。
- 王媛媛赵俊龙刘娟姜亚丽韩骅秦鸿雁刘晓渭
- 关键词：巨噬细胞真核表达载体
