单丽玲
- 作品数：7 被引量：7H指数：2
- 供职机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金中央级公益性科研院所基本科研业务费专项黑龙江省科技计划项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 兔肝脏组织差异蛋白与RHDV相互作用的研究
- 兔出血症病毒(Rabbit Haemorrhagic Disease Virus,RHDV)是一种可以引起成年兔急性死亡的烈性、传染性病原体,隶属于嵌杯病毒科兔病毒属。病毒感染成年兔30h即出现显著临床症状,48-72h...
- 单丽玲
- 关键词：兔出血症病毒酵母双杂交
- 文献传递
- 兔出血症病毒肝细胞表面蛋白受体的筛选
- 病毒识别细胞表面的受体是病毒感染的第一步,为了筛选兔出血症病毒(RHDV)的肝脏细胞表面受体,成年兔肝脏组织经胰酶消化及300目铜网过滤,得到完整的兔肝脏细胞,用生物素对细胞表面蛋白进行标记和分离;采用病毒铺覆蛋白技术(...
- 刘家森陈淑慧黄艳秋单丽玲郭东春姜骞李志杰崔玉东曲连东
- 关键词：兔出血症病毒肝脏细胞表面蛋白
- 文献传递
- 兔出血症病毒肝脏表面蛋白受体的初步筛选
- 2015年
- 为了筛选鉴定兔出血症病毒（RHDV）感染的肝脏细胞表面受体，取成年兔肝脏组织以胰酶消化，经300目铜网过滤，得到完整的兔肝脏细胞。用生物素对细胞表面蛋白进行标记和分离；采用病毒铺覆蛋白技术分析兔肝脏细胞表面蛋白。结果表明，在130000-170000的位置上存在与RHDV相互作用的特异性蛋白条带；利用液相色谱联合质谱技术（LCMS／MS）对特异蛋白条带进行shotgun分析，鉴定得到38个候选蛋白，其中3种蛋白在已知病毒感染过程中具有重要作用。
- 陈淑慧刘家森黄艳秋单丽玲郭东春姜骞李志杰崔玉东曲连东
- 关键词：兔出血症病毒肝脏细胞表面蛋白
- 兔出血症病毒蛋白酵母双杂交诱饵载体的构建及鉴定
- 2014年
- 为了研究兔出血症病毒(RHDV)蛋白与宿主蛋白的相互作用,试验采用RT-PCR技术从病毒基因组中扩增病毒的7种非结构蛋白P16、P23、2C-like protein、P29、VPg、3C-like protease、RNA复制酶(RdRp)及小结构蛋白VP10、主要结构蛋白VP60,测序正确后,定向克隆至p GBKT7载体,经转化酵母菌AH109验证诱饵载体p GBKT7-X的自激活活性和毒性作用。结果表明:诱饵载体p GBKT7-X对酵母细胞无毒性作用,且对报告基因无自激活现象。说明构建的诱饵载体可以用于酵母双杂交系统筛选与RHDV相互作用的宿主蛋白。
- 单丽玲刘家森姜骞陈淑慧黄艳秋郭东春刘大飞曲连东
- 关键词：酵母双杂交诱饵载体自激活作用
- ELISA验证兔铁蛋白重链与RHDV VP60相互作用
- 2013年
- 为验证本实验室前期实验中初步鉴定的兔铁蛋白重链(FTH)与兔出血症病毒(RHDV)衣壳蛋白(VP60)具有相互作用关系,本研究采用RT-PCR技术从兔肝脏扩增编码FTH基因,并将其克隆至pET-32a(+)中转化大肠杆菌BL21(DE3)pLysS中进行表达。重组FTH蛋白(rFTH)经IPTG诱导获得表达,采用Ni-NTA Agarose纯化rFTH。利用纯化的VP60作为ELISA包被抗原检测FTH与VP60的相互作用。结果表明,ELISA检测的OD490nm值与FTH蛋白量呈正相关。本研究进一步验证了FTH与VP60具有相互作用关系。
- 孙宏勇刘家森王泽祥陈淑慧单丽玲郭冬春姜骞林欢曲连东
- 关键词：兔出血症病毒VP60ELISA
- 兔视黄醇结合蛋白4基因的克隆及原核表达被引量：3
- 2013年
- 为表达兔视黄醇结合蛋白4(rRBP4),提取兔肝脏组织总RNA,采用RT-PCR技术扩增了rRBP4的基因,大小为606bp。将其克隆于原核表达载体pET-32a(+)获得表达重组质粒,并转化大肠埃希菌BL21(DE3)Plyss中进行表达,pET-32a-rRBP4以包涵体形式表达,包涵体经过洗涤、变性后,用镍离子亲和层析柱纯化,并利用尿素梯度透析法复性。SDS-PAGE分析表明,获得与预期分子质量一致的特异性目的蛋白;Western blot检测表明,重组蛋白与小鼠抗His标签单克隆抗体发生特异性反应。
- 王泽祥孙宏勇郭东春单丽玲原冬伟刘家森曲连东
- 关键词：原核表达肝细胞
- 表达兔出血症病毒VP60蛋白重组牛疱疹病毒1型的构建及免疫原性分析被引量：2
- 2014年
- 为制备表达兔出血症病毒(RHDV)VP60蛋白的重组病毒疫苗,本研究将RHDV VP60基因插入到CMV启动子下,构建牛疱疹病毒1型(BoHV-1)gE基因缺失转移载体,利用磷酸钙介导转染法将该转移载体与gE基因缺失的亲本病毒基因组DNA共转染牛肺细胞,制备了表达RHDV VP60基因的重组BoHV-1(rBoHV-1/gE-/VP60)。通过PCR、western blot及间接免疫荧光鉴定表明VP60基因在rBoHV-1/gE-/VP60中获得表达。并且体内试验表明重组病毒能够有效诱导小鼠产生RHDV特异性抗体。本研究构建了表达RHDV VP60基因的rBoHV-1/gE-/VP60,为研制预防兔出血症的BoHV-1活载体疫苗奠定了基础。
- 黄艳秋原冬伟刘行波刘家森陈淑慧单丽玲郭东春姜骞崔玉东薛飞曲连东
- 关键词：兔出血症病毒VP60基因
