任亮亮
- 作品数：5 被引量：9H指数：2
- 供职机构：中山大学中山医学院微生物学教研室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治专项广东省科技计划工业攻关项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 结核特异性CD4^+ α/β TCR四聚体细胞株筛选技术的建立和应用被引量：1
- 2014年
- 目的应用不同的MTB多肽以及不同的HLA-DR基因构建的膜表面表达结核抗原肽/HLA-DR复合物的S2恒定细胞株,即人工APC筛选、鉴定结核特异性CD4+α/βTCR四聚体。方法以PE标记的CD4+α/βTCR四聚体、FITC标记的抗HLA-DR抗体(L243),分别与未诱导表达或CuSO4诱导表达后的膜表面表达结核抗原肽/HLA-DR的果蝇S2恒定细胞株,以及与无多肽或结合有结核多肽的、表达HLA-DR的S2细胞株共孵育,流式细胞技术检测分析TCR四聚体与各种细胞株结合率的差异。结果 TCR四聚体6M、6N均与2#细胞株,即C5/HLA-DRB1*0404(1.73%、5.93%)等具有较高的阳性结合率;结核抗原肽孵育后,一些人工APC的四聚体阳性结合率有所提高;所筛选的9个TCR四聚体均与2#细胞株有较高的结合率。结论膜表达结核抗原肽/HLA-DR的S2细胞株,可以应用于结核特异性CD4+α/βTCR四聚体的筛选、鉴定;构建的9个CD4+α/βTCR四聚体均为结核特异性。
- 姚亚男黄宇虹王娟陈伊任亮亮赖小敏
- 关键词：CD4+T细胞
- E7多肽的抗原表位特性与多肽反应阳性结核患者的HLA-DR等位基因分析被引量：4
- 2011年
- 目的:分析结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)E7多肽的T细胞抗原表位特性,克隆及分析E7多肽反应阳性的结核患者HLA-DR等位基因。方法:应用从结核患者末梢血分离的单个核细胞(PBMC),以IFN-γ-ELISPOT和细胞内细胞因子染色分析MTB E7多肽的T细胞抗原表位特性;从E7-ELISPOT阳性反应的PBMC或胸水细胞中扩增、克隆和分析HLA-DRα和β链等位基因。结果:311例患者IFN-γ-E7-ELISPOT检测显示233例阳性(阳性率75%),阳性结果的平均SFC为210个斑点/106细胞,E7和另一多肽(E6多肽)混合检测529例患者则显示492例阳性(阳性率93%),平均SFC为572个斑点/106细胞;E7多肽刺激后,19例患者的PBMC经细胞内细胞因子染色结果显示能产生IFN-γ的CD4+T细胞百分率为0.63±1.30,而5例健康对照者为0.05±0.056,两者有显著性差异(P<0.004);扩增、克隆出了共有的HLA-DRA*0101和15种HLA-DRB1等位基因。结论:E7是一种理想的广谱HLA-DR限制性CD4+T细胞反应性多肽,为深入研究结核患者的HLA-DRB等位基因的分布特点以及制备相应四聚体建立了基础。
- 方毅敏任亮亮李研冯永忠彭毅董涛詹能勇黄宇虹程俊马志明赖小敏
- 关键词：结核HLA-DR
- 肺结核患者治疗期外周血及病理切片多肽特异性CD4^+T细胞的检测
- 2012年
- 目的应用四聚体技术研究肺结核患者治疗前后各时间点外周血中E7多肽特异性CD4+T细胞的变化及结核患者肺组织切片中特异性CD4+T细胞的分布。方法培养能稳定分泌表达E7/HLA-DRB1*0404和E7/HLA-DRB1*1602的果蝇S2细胞株,表达纯化获得2种蛋白质单体,并制备成PE标记的相应四聚体,流式细胞分析检测肺结核患者外周血中特异性CD4+T细胞。制备FITC标记的四聚体,对肺结核患者的肺组织切片进行原位染色,观察特异性CD4+T细胞的分布。结果肺结核患者治疗前组及治疗1～60 d组分别与治疗61 d后各组及脐带血组之间的四聚体阳性多肽特异性CD4+T细胞差异均有统计学意义(P<0.05),但治疗前组与治疗1～60 d组之间、治疗61 d后各组之间及分别与脐带血之间、2个四聚体检测组之间差异均无统计学意义(P>0.05)。在肺结核患者的肺组织切片中可观察到特异性CD4+T细胞。结论制备的2种E7/HLA-DR四聚体对于结核病的检测具有一定的意义,可以用于检测研究肺结核患者治疗前后外周血E7多肽特异性CD4+T细胞的变化及肺结核患者局部病理组织中特异性CD4+T细胞的分布。
- 黄利荣李研方毅敏任亮亮朱艳赖小敏
- 关键词：结核HLA-DR四聚体CD4+T细胞
- 表达HLA DR/结核分枝杆菌肽复合物细胞株的构建
- 研究背景和目的：
结核病是由结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis，MTB)感染引起的慢性传染病。全世界有三分之一的人感染MTB，其中5％～10％的感染者发展成为活动性结核病，是否发...
- 任亮亮
- 关键词：四聚体
- 文献传递
- 结核分枝杆菌特异性CD4^＋α／βT细胞受体四聚体筛选细胞系的构建及检测被引量：4
- 2009年
- 目的构建及应用结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis，Mtb）特异性CD4^＋α／βT细胞受体（TCR）四聚体筛选细胞系。方法从Mtb多肽阳性反应结核患者中，PCR扩增HLA-DRβ链，构建HLA—DRα链和加载有结核抗原肽的HLA—DR仅链全长基因的表达载体pMT—HLA—DRB及pMT-HLA—DRA—P，磷酸钙转染法转入果蝇S2（Schneider2）细胞中进行表达配对，细胞免疫组化法初步鉴定表达情况，并应用所建立细胞系以流式细胞术筛选Mtb特异性CD4^＋α／βTCR四聚体。结果细胞免疫组化法及流式细胞术鉴定显示获得细胞膜上表达结核抗原肽／HLA—DR复合物的稳定S2细胞株，并筛选出2种Mtb特异性CD4^＋α／βTCR四聚体。结论成功构建Mtb特异性CD4^＋α／βTCR四聚体筛选细胞系，为分析鉴定Mtb特异反应性TCR四聚体，探索开发结核诊断新方法及新型结核疫苗的研制提供了工具。
- 陈伊任亮亮董涛方毅敏杜玄静黄艳高鸣张娜张建波赖小敏
- 关键词：真核表达
