刘新涛
- 作品数：8 被引量：7H指数：2
- 供职机构：长春工业大学化学与生命科学学院更多>>
- 发文基金：吉林省科技发展计划基金国家科技重大专项吉林省教育厅科技计划项目更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生化学工程更多>>
- 一种犬重组干扰素α及制备方法
- 本发明公开了一种犬重组干扰素α，同时还提供了犬重组干扰素α的制备方法，将犬干扰素α的重组基因在大肠杆菌中进行表达，通过复性和纯化过程，获得了纯度大于98％的犬干扰素α。利用MDCK（犬肾细胞）-VSV（水泡性口炎）病毒体...
- 殷玉和李莹莹刘新涛
- 文献传递
- 犬干扰素α制备工艺的优化被引量：1
- 2012年
- 根据Genbank的犬干扰素α序列,经密码子优化后,设计并合成了编码CaIFN-α蛋白的基因片段。CaIFN-α基因与pBV220温度诱导表达载体连接,转化大肠杆菌BL21。经培养、升温诱导表达,目的蛋白以包涵体的形式存在,蛋白分子量约为18000,蛋白表达量为25%。菌体经超声破碎、变性、复性后,目的蛋白纯度为69%,收率为28%;疏水层析后,目的蛋白纯度87%,收率为81%;分子筛层析后,目的蛋白纯度为96%,收率为90%。纯化的CaIFN-α蛋白的生物学比活性为3×107 IU/mg,内毒素≤10 EU/mg,符合兽用药要求。此制备工艺总产率高达20%、重现性好,适用于大规模生产。
- 殷玉和李莹莹刘新涛吴丛梅
- 关键词：原核表达纯化
- 肽类化合物对H_(37)Ra抑制的优化筛选被引量：1
- 2014年
- 通过抑菌试验,确定不同培养基条件下多肽化合物的抑菌效果,并测定其最小抑菌浓度(Minimum inhibitory concentration,MIC)。加入Vc,比较抑菌效果,进一步优化筛选H37Ra抑制剂。先根据ELISA试验结果进行噬菌体肽库筛选,然后利用分子对接软件模拟多肽与ICL蛋白晶体(1F8I)的分子对接,将成功对接的多肽采用Fmoc固相合成法合成,并对其生物活性进行检测。用制备型反相高效液相色谱仪对合成的多肽进行纯化并进行质谱检测。共筛选得到4条多肽且均有抑菌效果,并与剂量相关。结果显示,浓度为800-1 500μg/mL时,各组多肽均抑菌。浓度为500μg/mL时,正常培养基中只有一种肽有抑菌作用,而限制碳源培养基中均不能抑菌。2号肽抑菌效果最好,正常培养基中MIC为200μg/mL,限制碳源中为500μg/mL。阳性对照组,两种培养基抑菌效果一致,利福平MIC为0.8μg/mL,异烟肼MIC为0.5μg/mL。根据MIC结果,在正常培养基中加入Vc,检测到多肽、利福平和异烟肼的抑菌效果呈剂量依赖性升高。
- 吴丛梅李玲玲关晓侠刘新涛陈吉殷玉和
- 关键词：MIC噬菌体肽库分子对接
- 犬α干扰素的原核表达及活性检测被引量：2
- 2012年
- 本研究合成了编码CaIFN-α蛋白的基因片段,分别与温度诱导表达载体pBV220和化学诱导表达载体pET20b连接,构建了pBV220-CaIFN-α和pET20b-CaIFN-α重组表达质粒,转化大肠杆菌BL21,通过温度诱导和IPTG诱导表达,CaIFN-α蛋白表达量分别为25%和20%。对比两方法诱导表达结果,确定最佳诱导方法为温度诱导。表达菌经超声破碎、变性、复性、疏水层析和分子筛层析后,得纯化的CaIFN-α蛋白,纯度约为96%。利用MDCK(犬肾细胞)-VSV(水疱性口炎病毒)体系,测定纯化后CaIFN-α蛋白的生物学比活性为3×107U/mg。
- 殷玉和李莹莹刘新涛吴丛梅
- 关键词：原核表达纯化生物学活性
- 异柠檬酸裂解酶肽类抑制剂结构的修饰
- 2014年
- 利用Fmoc固相多肽合成法,按已知异柠檬酸裂解酶抑制剂的直链肽氨基酸序列合成首尾相连的环肽抑制剂.经色谱纯化和质谱鉴定,其相对分子质量的实测值与理论值相符.抑制率实验结果表明,合成的环肽对异柠檬酸裂解酶有明显抑制作用,抑制率大于50%.采用高效液相色谱法分别检测直链肽和环肽在血浆中的半衰期,实验结果表明,环肽在血浆中的半衰期为11min,比直链肽的半衰期延长175%.
- 刘志远张爱臣刘新涛关晓侠李玲玲殷玉和
- 关键词：肽类抑制剂环肽
- HIV-GAG质粒DNA疫苗的纯化工艺被引量：1
- 2013年
- 采用中空纤维超滤浓缩、离子交换介质和复合模式凝胶过滤介质纯化获得了HIV-GAG药用级质粒DNA疫苗,并对菌体培养、菌体裂解、粗提分离和柱层析等环节进行研究.实验结果表明,产品基本符合药用级的质粒DNA要求.
- 刘新涛吴丛梅臧阳孙博殷玉和
- 关键词：DNA疫苗离子交换介质
- HIV-GAG DNA疫苗生产工艺研究
- 核酸疫苗和基因治疗作为新一代的治疗方法显示出了广阔的前景。它们都是利用基因重组技术,将外源基因构建到合适的表达载体中,从而得到具有预防或治疗能力的重组质粒。常用的载体有病毒载体和质粒DNA载体,其中病毒载体可能存在安全性...
- 刘新涛
- 关键词：DNA疫苗纯化碱裂解柱层析
- 文献传递
- 轮状病毒间接免疫荧光的检测方法被引量：2
- 2016年
- 以兔抗SA11多克隆抗体为一抗、Alexa-488标记的山羊抗兔抗体为二抗,通过对反应条件的优化建立轮状病毒（RV）检测的间接免疫荧光法（IFA）.实验结果表明,IFA最佳工作条件为：MA104细胞密度为每孔2×104个,胰酶活化轮状病毒质量浓度为1μg/mL,培养时间为18h,一抗最适稀释度为1∶800,二抗最适稀释度为1∶500.
- 姜涛吴丛梅刘新涛金浩殷玉和
- 关键词：轮状病毒间接免疫荧光滴度
