王学艳
- 作品数：8 被引量：33H指数：4
- 供职机构：西北农林科技大学动物科技学院更多>>
- 发文基金：陕西省科技攻关计划国家科技支撑计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- H9N2禽流感病毒陕西分离株HA基因的遗传变异分析被引量：2
- 2009年
- 【目的】对H9N2禽流感病毒HA基因全序列进行分析,了解H9N2禽流感分离毒株HA基因的遗传变异情况。【方法】根据GenBank已发表的H9N2毒株的基因序列,设计了2对H9N2禽流感病毒HA基因特异性引物,运用RT-PCR方法对XL、LF和WN分离株进行了扩增,然后将PCR产物送出进行测序,用DNAstar 5.0软件对测序结果进行了分析。【结果】XL、LF和WN 3株H9N2分离株间HA基因的核苷酸同源性为99.7%-99.9%,推导氨基酸的同源性为99.1%-99.6%;分离株与参考毒株HA基因核苷酸的同源性为96.2%-99.0%,推导氨基酸的同源性为96.2%-98.6%。通过对3个H9N2分离株间HA基因核苷酸序列的比较,发现共有5个位点的核苷酸发生突变,其中4个位点核苷酸的改变导致相应的氨基酸发生突变。HA蛋白的7个受体结合位点比较保守,但是其在551-553位缺失了潜在的糖基化位点。【结论】3株H9N2分离株裂解位点氨基酸序列完全符合低致病性禽流感的特征RSSR↓G,但是LF裂解位点附近333位脯氨酸（Pro）突变为组氨酸（His）,即非极性氨基酸向极性带正电氨基酸（碱性氨基酸）转变,裂解位点的变化可能是H9N2禽流感病毒生物学特性改变的分子基础。
- 温肖会王晶钰王学艳熊浩山刘红彦
- 关键词：禽流感病毒H9N2HA基因遗传变异分析
- NDV分离株F及HN基因的遗传变异分析与核酸疫苗质粒的构建
- 新城疫病毒/(NDV/)是副黏病毒科副黏病毒亚科禽病毒属的成员,是有囊膜的负链RNA病毒,可引起禽类的新城疫。我国经过多年的综合防制,现已基本控制了该病的流行。近年来,我国新城疫的发生出现新的特点,即非典型新城疫病例日益...
- 王学艳
- 关键词：新城疫病毒分离株F基因HN基因核酸疫苗
- 文献传递
- 牛病毒性腹泻病毒陕西株的分离与NS_(5b)基因序列测定被引量：5
- 2008年
- 【目的】分离并鉴定陕西省牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)。【方法】采集腹泻犊牛的肠系膜淋巴结,处理后接种于MDBK细胞,盲传,逐日观察是否有细胞病变产生。采用病毒蚀斑技术对病毒克隆纯化后,提取其RNA,进行RT-PCR鉴定。将扩增的NS5b基因克隆入pMD18-T载体中,采用碱裂解法小量提取质粒,并对质粒进行EcoRⅠ和SalⅠ双酶切、SalⅠ单酶切及PCR鉴定,对阳性克隆进行核苷酸序列测定及分析。采用病毒蚀斑试验测定分离毒株的半数组织培养感染量(TCID50)。【结果】盲传4代后细胞出现典型、规律的细胞病变。RT-PCR扩增出预期长度(360 bp)的基因片段,核苷酸序列分析结果表明,所扩增的基因为牛病毒性腹泻黏膜病病毒NS5b基因,其与BVDV VEDEVAC株NS5b基因核苷酸序列有99%同源性。BVDV陕西株的半数组织培养感染量(TCID50)为3.6。【结论】成功分离了牛病毒性腹泻病毒陕西株,为陕西省BVDV的防治提供了理论依据。
- 马秋明王学艳王晶钰何维明
- 关键词：牛病毒性腹泻病毒RT-PCR细胞病变
- 猪圆环病毒2型PCR检测方法的建立及其应用被引量：9
- 2008年
- 参照国内外已发表的猪圆环病毒2型(PCV-2)的ORF1的基因序列及其相关的PCR检测方法设计一对引物,扩增目的片段为493bp。通过对PCR检测方法的特异性、敏感性、重复性试验,建立了一种PCV-2的PCR检测方法。应用此方法对临床样品进行了检测,阳性检出率达51.18%。该方法具有快速、敏感、特异等优点,可用于PCV-2的检测和流行病学调查等。
- 唐万寿王学艳王晶钰张彦明李娅娟刘建鹏
- 关键词：猪圆环病毒2型ORF1基因PCR
- 鸡新城疫病毒分离株F基因的分子特性分析被引量：3
- 2008年
- 【目的】对新城疫病毒（NDV）分离毒株进行分子特征分析,了解免疫鸡群发生新城疫的原因。【方法】用非免疫鸡胚从病鸡肺脏中分离新城疫病毒;参考GenBank上发表的NDV的F基因序列设计引物,应用RT-PCR方法对新城疫病毒分离株进行扩增,并构建克隆载体,对阳性质粒测序后进行F基因核苷酸及推导氨基酸序列分析。【结果】从发病鸡群中分离到6株NDV,分离毒株间的F基因核苷酸和F蛋白氨基酸同源性分别在99.6%-99.9%和99.1%-99.8%;分离毒株与参考毒株的F基因核苷酸和F蛋白氨基酸序列同源性分别在83.2%-87.3%和90.2%-93.8%;分离毒株F蛋白裂解位点的氨基酸顺序为^112R-R-Q-K-R-F^117,符合强毒株的分子特征;6个分离株均属NDV基因Ⅶ型。【结论】NDV分离株的F基因已经发生明显变异,与La Sota、Clone-30、V4等常用疫苗株在遗传进化上的亲缘关系较远,这可能是免疫鸡群发生新城疫的重要原因之一。
- 王学艳王晶钰刘红彦邓小敏温肖会姜向阳罗艳
- 关键词：新城疫病毒F基因RT-PCR分子特性分析
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒RT-PCR检测方法的建立及应用被引量：2
- 2008年
- 参照国内外已发表的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的ORF7的基因序列及其相关的RT-PCR检测方法设计一对引物,扩增目的片段为535bp。通过对RT-PCR检测方法的特异性、敏感性、重复性试验,建立了一种PRRSV的RT-PCR检测方法。该方法具有快速、敏感、特异等优点,可用于PRRSV的检测、流行病学调查等。应用此方法对临床样品进行了检测,阳性检出率达66.7%。
- 董战礼王晶钰王学艳
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒
- 牛轮状病毒的分离及其RT-PCR鉴定被引量：7
- 2007年
- 采用MA104细胞从疑似轮状病毒腹泻犊牛粪样中进行轮状病毒分离,盲传4代后接种细胞出现明显细胞病变(CPE),对分离病毒进行核酸聚丙烯酰胺凝胶电泳,电泳条带为4∶2∶3∶2型,具备典型A群轮状病毒特征。依据NCBI等登录的牛轮状病毒的VP1基因序列设计一对引物,对其VP1基因进行克隆及序列分析,结果分离毒与国外牛轮状病毒分离株RF的核苷酸同源性为98.9%,与UK的核苷酸同源性为91.5%,证明分离毒株是一株牛轮状病毒。
- 姜向阳邓小敏王晶钰王学艳罗艳
- 关键词：轮状病毒细胞培养
- 经猪血管内皮细胞多次传代的CSFV E2基因的遗传变异研究被引量：1
- 2008年
- 【目的】研究猪瘟病毒（CSFV）E2基因在猪脐静脉血管内皮细胞中多次传代后的遗传变异情况,为CSFV的致病机理研究提供理论依据。【方法】分离并培养猪脐静脉血管内皮细胞,接种猪瘟病毒石门株脾毒后继续培养,染毒细胞经3次连续传代后全部死亡、脱落,收集每代细胞并提取总RNA,采用RT-PCR方法扩增CSFVE2基因。将获得的目的基因克隆入T载体并转化DH5α感受态细胞,提取重组质粒,进行PCR和BamHⅠ、HindⅢ酶切鉴定,将阳性的重组质粒进行测序,并用DNAStar软件进行序列分析。【结果】扩增出了E2基因,重组质粒PMD18-T-E2的PCR和双酶切鉴定结果表明,E2基因与pMD18-T载体连接成功。各代猪脐静脉血管内皮细胞中CSFVE2基因之间的核苷酸序列同源性为99.4%-99.9%,氨基酸序列同源性为98.9%-99.8%;各代猪脐静脉血管内皮细胞中的CSFVE2基因与标准病毒石门株之间的核苷酸序列同源性为98.9%-99.3%,氨基酸序列同源性为98.9%-99.2%。【结论】猪瘟病毒石门株在猪血管内皮细胞上传代的过程中E2基因无明显的变异,能保持遗传的稳定性。
- 温元鹏张彦明冶贵生邓文熊奎州王学艳
- 关键词：猪瘟病毒E2基因
