高翔
- 作品数：10 被引量：4H指数：1
- 供职机构：军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室更多>>
- 发文基金：北京市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 融合蛋白SAmB及其编码基因与应用
- 本发明公开了一种融合蛋白SAmB及其编码基因与应用。本发明提供的融合蛋白，命名为SAmB，包括处于N端的II型志贺毒素的A亚单位突变体蛋白和处于C端的I型志贺毒素的B亚单位蛋白；上述II型志贺毒素的A亚单位突变体蛋白是将...
- 王慧蔡昆李涛侯晓军王琴高翔
- 一种新型融合蛋白SSI、其用途及专用基因
- 本发明公开了一种融合蛋白SSI，该融合蛋白包含EHEC O157的Stx2B、Stx1B和Int281三种保护性抗原。它具有序列表中序列1所示的氨基酸序列，其编码基因具有序列表中序列2所示的核苷酸序列。该融合蛋白是将EH...
- 王慧高翔蔡昆侯晓军王琴李涛
- 大肠杆菌细菌菌蜕的制备及初步研究被引量：2
- 2008年
- 目的:利用温度控制噬菌体PhiX174裂解基因E的表达,制备大肠杆菌细菌菌蜕,鉴定其裂解效率并观察其形态。方法:利用PCR技术扩增分离了噬菌体PhiX174裂解基因E并构建其表达质粒,并将质粒转化大肠杆菌DH5α构建工程菌。工程菌培养温度从28℃突升至42℃,每15 min检测菌液D600值,诱导后4 h收集菌体。体外菌落计数计算裂解效率,并通过电镜观察菌蜕结构。结果:获得273 bp的PhiX174裂解基因E全长基因及表达质粒。菌液D600在温度突升至42℃后30 min开始持续下降,2 h后基本维持不变。4 h后收集菌体测得裂解效率为99.99%。电镜观察菌蜕为具有完整外膜结构的细菌空壳,并且无细胞毒性。结论:本研究成功利用噬菌体PhiX174裂解基因E实现了大肠杆菌细菌菌蜕的制备,为进一步的疫苗及递送系统研究奠定了基础。
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- 关键词：大肠杆菌温度控制
- SNAP-25基因克隆及其在大肠杆菌中的表达与鉴定被引量：1
- 2009年
- 目的:构建SNAP-25基因的原核表达载体pET22b-SNAP-25,对表达产物活性进行初步鉴定。方法:根据GenBank中已报道的SNAP-25基因序列,设计特异引物,通过RT-PCR从小鼠全脑组织总RNA中得到基因。将全长基因克隆至原核表达载体pET22b中,重组质粒转化大肠杆菌E.coliBL21感受态细胞,IPTG诱导表达,表达产物经Ni-NTA亲和层析进行纯化。通过SDS-PAGE和免疫印迹对其进行鉴定,并对该蛋白进行活性的初步分析。结果与结论:成功构建了原核表达载体pET22b-SNAP-25,Western印迹证实重组蛋白获得表达。表达的重组蛋白与A型肉毒毒素混合反应,经SDS-PAGE验证,重组蛋白具有被毒素特异性切割的活性。
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- 关键词：肉毒毒素底物原核表达
- 志贺毒素B亚单位及其模拟表位的制备和免疫保护效应
- 2008年
- 目的:对重组表达的StxB和预测的模拟表位肽进行免疫保护效应评价。方法:用分子生物学方法构建基因工程菌,IPTG诱导表达重组StxB,经复性后进行离子交换层析纯化。同时采用生物信息学手段对StxB的表位相关参数进行分析,预测StxB可能的抗原表位。以纯化的StxB和合成的模拟表位肽免疫小鼠后攻毒,评价StxB及其模拟表位肽的免疫保护效应。结果:表达并制备了90%以上纯度重组StxB;发现p14和p17多肽易形成转角和无规卷曲的柔性区段,可及性、极性和亲水性较强,是可能的抗原表位。免疫保护试验显示,经重组StxB和合成多肽免疫的小鼠发病延迟,症状减轻,存活率显著提高。结论:重组StxB和预测的模拟表位肽具有良好的免疫保护效果,为亚单位疫苗及其作用机制的研究奠定了基础。
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- 关键词：模拟表位
- 肠出血性大肠杆菌O157：H7新型融合蛋白免疫原性分析及动物保护效果评价
- 肠出血性大肠杆菌/(enterohemorrhagic E.coli,EHEC/)O157:H7于1982年首次被确认为人致病菌以来,世界各地包括中国都有不同规模的暴发流行。EHECO157:H7感染除可使人发生常规腹泻...
- 高翔
- 关键词：INTIMIN免疫原性免疫保护性
- 文献传递
- 肠出血性大肠杆菌紧密黏附素保护性多肽的表达与免疫原性分析被引量：1
- 2008年
- 目的:在基因工程菌中实现肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157∶H7紧密黏附素(intimin)保护性片段(Int281)的高效表达,并进行抗原性的初步分析。方法:应用PCR从EHEC O157∶H7基因组中钓取int281基因,插入pMD18-T克隆载体。克隆质粒测序鉴定后,采用NdeⅠ、NotⅠ限制性核酸内切酶双酶切pMD18-T-int281质粒获得int281基因,连接同样经过双酶切的pET-22b(+)。表达质粒测序鉴定后转化E.coliBL21(DE3),IPTG诱导表达,经SDS-PAGE检测相对分子质量和Western印迹验证免疫学活性后,重组Int281蛋白免疫BALB/c小鼠,ELISA检测鼠血清抗体效价。结果:PCR扩增得到843 bp的目的片段。构建的原核表达质粒pET-22b(+)-int281经酶切鉴定及测序与预期序列一致。目的蛋白以包涵体形式表达,表达量约25%。变性复性后经镍柱纯化后纯度达95%以上。免疫印迹检测显示,重组Int281片段可以特异性地识别抗O157∶H7多抗。免疫小鼠抗体效价达1∶106。结论:重组Int281具有良好的免疫原性,为制备相应的抗体及研究其对EHEC O157∶H7黏附定植的被动保护效果奠定了基础。
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- 关键词：肠出血性大肠杆菌免疫原性
- EV71与CB3病毒VP1融合蛋白的构建表达与抗原性初步评价
- 2013年
- 目的构建pET-22b-ECVP1表达载体,在大肠杆菌中诱导表达肠道病毒71型(EV71)及柯萨奇B3型(CB3)病毒VP1融合蛋白(ECVP1),并鉴定其抗原性。方法利用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法分别从EV71与CB3病毒基因组中扩增得到外壳蛋白VP1基因,经重叠延伸PCR(SOE-PCR)方法拼接构建重组融合蛋白基因(ecvp1),将该片段连接到pET-22b表达载体上,在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达融合蛋白,经Western blot鉴定其抗原性。结果pET-22b-ECVP1表达载体构建成功,融合蛋白相对分子量约为65 ku,Western blot分析表明,该融合蛋白能被抗EV71及抗CB3抗体特异识别。结论成功构建pET-22b-ECVP1表达质粒并诱导ECVP1融合蛋白表达,且融合蛋白具有良好的抗原性。
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- 关键词：肠道病毒71型柯萨奇B3病毒融合蛋白
- 融合蛋白SAmB及其编码基因与应用
- 本发明公开了一种融合蛋白SAmB及其编码基因与应用。本发明提供的融合蛋白，命名为SAmB，包括处于N端的II型志贺毒素的A亚单位突变体蛋白和处于C端的I型志贺毒素的B亚单位蛋白；上述II型志贺毒素的A亚单位突变体蛋白是将...
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- 文献传递
- 一种新型融合蛋白SSI、其用途及专用基因
- 本发明公开了一种融合蛋白SSI，该融合蛋白包含EHEC O157的Stx2B、Stx1B和Int281三种保护性抗原。它具有序列表中序列1所示的氨基酸序列，其编码基因具有序列表中序列2所示的核苷酸序列。该融合蛋白是将EH...
- 王慧高翔蔡昆侯晓军王琴李涛
- 文献传递
