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小尾寒羊YB-1基因全长cDNA克隆与原核表达被引量：1: 2008年; 采用RT-PCR技术从小尾寒羊睾丸组织获得YB-1基因全长cDNA,并将其编码区重组于融合表达质粒pET32a中,经酶切和序列鉴定分析后,重组质粒在大肠杆菌BL21 plys(E)中经不同浓度IPTG诱导后获得表达,但表达量较低,且IPTG的浓度变化不影响目的蛋白的表达量。通过改变筛选抗生素,最终获得了目的融合蛋白的高效表达,为深入开展YB-1蛋白功能研究打下了良好的基础。; 宋雪梅李宏滨杜立新; 关键词：小尾寒羊 YB-1 融合蛋白原核表达

不同品种绵羊TGF-β1基因单核苷酸多态性及其与繁殖力关系的研究被引量：4: 2008年; 以小尾寒羊、滩羊、同羊、欧拉羊共计196头为研究材料,采用PCR-SSCP技术,对绵羊TGF-β1基因6-7外显子区间内的805 bp序列进行多态性分析,发现了一个多态位点。经克隆测序分析发现,第6内含子区内存在一个突变,该突变位点为第7外显子上游的第294位碱基处缺失了AGAC(序列:gi76871756中的14201位)。对不同绵羊群的基因型和等位基因频率统计结果表明,多胎品种小尾寒羊以AB基因型为主。χ2检验结果表明,单胎品种滩羊、同羊、欧拉羊以BB基因型为主,所有品种都处于Hardy-Weinberg平衡状态。; 高丽霞李宏滨杜立新宋雪梅李珍祖李善刚魏彩虹; 关键词：转化生长因子Β1 单核苷酸多态性绵羊

正交法整体优化差异显示反应体系被引量：9: 2004年; mRNA差异显示PCR(mRNAdifferentialdisplayPCR ,DDRT PCR)是分离差异表达基因的有效方法 ,但该方法的准确性极易受到外部因素和内部因素的影响。采用正交法优化DDRT PCR反应条件 ,充分考虑到模板浓度、锚定引物浓度、随机引物浓度、dNTPs浓度、镁离子浓度以及Taq酶用量等因素在差异显示反应过程中的交互作用 ,一次PCR反应即可确定最佳反应组合。将筛选出的条件用于DDRT PCR ,得到差显结果假阳性率低 ,重复性和稳定性好 ,而且简化了反应条件的优选程序 ,这表明正交法是优化差异显示反应条件的理想方法。为了进一步简化整个差异显示反应系统的操作程序 ,降低假阳性率 ,研究采用了非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳 (polyacrylamidegelelectrophoresis,PAGE)和银染显示差异带的方法 ,并用反向Northern法来验证回收条带。; 柳淑芳杜立新朱靖王爱华李宏滨; 关键词：DDRT-PCR 银染

用RAPD技术筛选中国荷斯坦牛产奶量性状遗传标记: 选用320条10碱基随机引物在由36头高产(305天产奶量>8500kg)和32头低产(305天产奶量<5600kg)中国荷斯坦牛所组成的两个DNA池间进行RAPD-PCR扩增,从中筛选出稳定性好、带型清晰且在两DNA池...; 杜立新万海伟王爱华李宏滨; 关键词：分子标记荷斯坦牛产奶量; 文献传递

鸡禽流感疾病抗病育种的方法及专用试剂盒: 本发明公开了一种鸡禽流感疾病抗病育种的方法及专用试剂盒。该方法是检测待测鸡的序列表中序列1所示核苷酸序列的自5′末端第2216位脱氧核糖核苷酸是G还是A，确定待测鸡的基因型是AA、BB还是AB，采用AA基因型的鸡进行育种...; 杜立新李宏滨尹春光; 文献传递

牛β-防御素BNBD5基因在毕赤酵母中的表达被引量：5: 2010年; 本研究在本实验室成功构建的奶牛乳房炎抗性相关cDNA文库的基础上,旨在通过对牛β-防御素基因的分析,进一步揭示乳房炎抗性的分子机理。以牛β-防御素BNBD5基因作为乳房炎抗性的候选基因,通过克隆该基因的编码区,成功构建了毕赤酵母表达载体pPICZαA/BNBD5,并采用毕赤酵母表达系统表达了BNBD5蛋白。该结果为今后BNBD5抗体的制备奠定了基础。; 李宏滨龙晶杜立新; 关键词：奶牛乳房炎 Β-防御素毕赤酵母

利用6-磷酸-β-葡萄糖苷酶在低温条件下获得酶-底物复合物实际结构的方法: 2013年; 利用"酶晶体低温抑活底物固定"方法,在-20℃条件下,将6-磷酸-β-葡萄糖苷酶(BglA)晶体与底物对硝基苯-β-D-吡喃葡萄糖苷-6-磷酸(pNPβG6P)进行浸泡试验,通过X射线进行衍射数据收集并处理,获得了完整的底物电子密度图。研究结果表明,在不突变酶中关键基团使酶失活,以及不选用底物类似物替代原有底物的情况下,通过上述方法,可以获得酶与底物复合物的实际结构。该研究结果可为今后低温酶学及复合物中间态的进一步研究提供帮助。; 王薇刘一苇李宏滨; 关键词：晶体

运用微卫星标记对中国地方绵羊品种的遗传多样性分析被引量：16: 2008年; 利用30对微卫星引物，以中国西部7个地方绵羊（Ovi saries）品种为研究对象，通过计算基因频率、平均杂合度（H）、多态信息含量（PIC）及有效等位基因数目（Ne），并根据共祖遗传距离矩阵进行UPGMA聚类分析，评估其品种内和品种间的遗传变异。结果表明：在30个座位中，共检测到239个等位基因，平均每个座位等位基因数为8个；品种平均有效等位基因数为2.9～3.4个，座位平均有效等位基因数为1.9～5.3个；座位平均杂合度为0.320～0.818，品种平均杂合度在0.656～0.719之间，座位平均PIC为0.388～0.786，品种平均PIC在0.590～0.666之间。聚类分析表明各绵羊品种聚类结果与其来源、育成史和地理分布基本一致，其中有争议之处仍待进一步探讨。; 吕慎金杨燕候冠玉马月辉耿社民李宏滨浦亚斌; 关键词：绵羊微卫星

猪H-FABP基因多态片段的序列分析被引量：34: 2002年; 利用PCR RFLP方法在猪H FABP基因内确定了 3个变异酶切位点 ,分别为 5′ -上游区HinfI RFLP、内含子 2的HaeIII RFLP和HinfI RFLP(HinfI和HinfI 代表不同区域的HinfI酶切反应 )。对每个多态片段进行克隆测序分析 ,结果表明 ,5′ -上游区HinfI RFLP是由于 132 4位的碱基T→C的突变引起 ;在内含子 2中 ,HaeIII RFLP变异酶切位点在 1811位 ,发生了C到G的突变 ;HinfI RFLP是由于; 曹红鹤张桂香王立贤李宏滨郑友民; 关键词：H-FABP基因脂肪沉积基因位点

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李宏滨