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嗜水气单胞菌引致的金钱鱼细菌性疾病被引量：10: 2016年; 为了分离鉴定实验室养殖的金钱鱼暴发性疾病的病原,利用传统病原分离的方法,从病鱼肝脏分离得到一株G–短杆菌（Ah201416）,对其进行电镜观察和生理生化鉴定,对病鱼组织进行病理切片分析,并根据科赫法则,用分离株对健康金钱鱼进行人工感染。结果显示,该菌株电镜下观察细菌大小为0.8-1.0μm×1.0-2.0μm（宽×长）,无芽孢和荚膜,生理生化特性与嗜水气单胞菌基本一致;16S r RNA序列（登录号：KR006248）与Gen Bank中嗜水气单胞菌（Aeromonas hydrophila,Ah ATCC7966）的16S r RNA基因序列的同源性高达99%,系统进化树与Ah聚为一支。病理切片分析发现,发病金钱鱼与正常金钱鱼相比,鳃小片细胞不同程度地脱落,伴有白细胞浸润;肠绒毛结构消失,肌肉层疏松明显;肾脏中肾小管细胞脱落,管腔中有坏死细胞,并出现不同程度的颗粒变性;肝脏细胞形态不规则,伴有血细胞浸润等病理损伤。人工感染实验表明,其对健康金钱鱼96h的半数致死剂量（LD50）为7.35×10^7 CFU/m L。研究表明,发病金钱鱼中分离的Ah201416菌株为嗜水气单胞菌,丰富了金钱鱼细菌性病原的研究,此结果为金钱鱼细菌性疾病的防治和养殖业的健康发展提供了重要的理论依据。; 张庆华马文元陈彪刘至治徐华东张秋月王晓冰贾亮; 关键词：金钱鱼嗜水气单胞菌病理损伤半数致死剂量

牙鲆变态中两种HSP90基因的不同表达及其与甲状腺激素的关系被引量：7: 2010年; 热休克蛋白90(heat shock protein90,HSP90)是细胞内主要的伴侣蛋白,在激素信号转导、细胞分化、细胞增殖与凋亡、形态发生与进化、变态发育及应激防御等多重调节路径中发挥关键作用。采用实时荧光定量RT-PCR技术检测了牙鲆两种HSP90基因在仔鱼发育和在成年组织中的表达变化。结果表明,HSP90α在成鱼骨骼肌、肠和胃中有较高的表达,而HSP90β在成鱼脑、脾脏和肾脏中有较高的表达。HSP90αmRNA水平在仔鱼变态期间迅速增加,至变态高峰G期达到最高水平;相反,HSP90β转录在仔鱼整个变态期间变化不是特别明显。鉴于甲状腺激素(thyroid hormone,TH)在牙鲆变态中的重要作用,还运用外源的TH及硫脲(thiourea,TU)处理牙鲆仔鱼来确定TH对HSP90基因转录的调节。与未处理组相比,HSP90α转录在TH处理8d和13d的仔鱼中显著增加,而在TU处理仔鱼中明显减少;但HSP90βmRNA水平不受药物处理影响。从上述结果分析,牙鲆中HSP90α的转录很可能被甲状腺激素上调,而且其在牙鲆的变态发育中发挥了重要作用。; 张俊玲施志仪程琦贾亮; 关键词：牙鲆变态发育热休克蛋白90 甲状腺激素荧光定量RT-PCR

海七鳃鳗CXCL8基因的原核表达及蛋白纯化: 2018年; 海七鳃鳗(Petromyzon marinus)是现存最古老的无颌类脊椎动物之一,对其重要免疫分子的研究在免疫系统的进化理论上有重要意义。细胞趋化因子CXCL8(又称白细胞介素-8,Interleukin 8)是最重要的趋化因子之一。为了研究海七鳃鳗CXCL8基因在天然免疫中的作用,以海七鳃鳗肝脏c DNA为模板,通过比对海七鳃鳗基因组信息设计引物,使用RT-PCR方法扩增得到PmCXCL8基因。随后构建原核表达载体pColdI-CXCL8,将载体转化至E.coli BL21和Rosetta(DE3)中进行表达,利用Bio-Rad IMAC蛋白质纯化试剂盒和Profinia蛋白质纯化系统进行纯化,纯化后的蛋白进行SDS-PAGE电泳和Western blot分析。结果显示,PmCXCL8开放阅读框(open reading frame,ORF)为309 bp,编码102个氨基酸,分子量为11.23 kDa,等电点为9.37。PmCXCL8氨基酸序列中保守的C36和C38之间插入一个氨基酸残基,为CXC型趋化因子,而且不含ELR(Glu-Leu-Arg)基序,相应位置被GGR(Gly-Gly-Arg)所替代。原核表达对比发现,该蛋白在E.coli Rosetta(DE3)中的表达优于E.coli BL21,最后通过亲和层析法纯化得到了高纯度的PmCXCL8重组蛋白。SDS-PAGE电泳检测和Western blot鉴定结果均得到单一的条带,分子量约为11.23 k Da,符合预期结果,表明已成功表达出可溶性良好的PmCXCL8重组蛋白。该研究为PmCXCL8功能的探究与抗体的制备提供了实验材料,也为七鳃鳗天然免疫系统进化的研究奠定了基础。; 朱欣云丁少青张哲任建峰濮家飞贾亮李伟明张庆华; 关键词：原核表达蛋白纯化

牙鲆甲状腺激素受体TRαA的原核表达和多克隆抗体的制备及应用被引量：1: 2009年; 为研究牙鲆甲状腺激素受体TRαA在牙鲆变态发育过程中的调控作用,将TRαA基因克隆插入融合表达载体pET30a,并在大肠杆菌Escherichia coli DE3(BL21)中进行诱导表达。表达菌株经1mmol/L异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导4h后,重组蛋白TRαA表达并形成包涵体。SDS-PAGE和Western blotting检测鉴定表达产物。包涵体经变性后在His-Bind树脂进行亲和层析纯化,柱上复性法对重组蛋白复性,获得纯度较高的目的蛋白,蛋白复性的效果良好。用纯化后的目的蛋白免疫新西兰家兔制备多克隆抗体。Dotblotting检测抗体效价达1:200000,检测证明抗体特异性良好。此外,通过染色质免疫沉淀技术鉴定了在活体细胞中多克隆抗体与TRαA的特异性结合,表明了甲状腺激素通过其受体在体内参与碱性磷酸酶(ALP)基因的转录调控。; 贾亮施志仪张俊玲; 关键词：牙鲆原核表达抗体制备染色质免疫沉淀

东北七鳃鳗IL-8基因克隆及其表达研究: 东北七鳃鳗(Lampetra morii)是现存最古老的无颌类脊椎动物之一,分布于我国辽河流域、鸭绿江、黑龙江省东部山区河流,对其免疫系统的研究在理论上有着重要的进化意义。白细胞介素-8(Interleukin 8,IL...; 朱欣云任建峰贾亮李伟明张庆华; 关键词：免疫系统白细胞介素-8 铜绿假单胞菌; 文献传递

斑马鱼报警反应产生发育阶段的研究: 2016年; 鱼类在遭受捕食后,受损的表皮会释放大量的化学信号物质,同种其它个体嗅到这些化学信号后会作出躲避反应,称为报警反应（alarm response）,报警反应通常出现在一定的发育阶段。采用斑马鱼（Dinio rerio）同种碾碎提取物（处理组,质量浓度为10-6g·L-1）作为报警物质,并设3个对照组：罗非鱼碾碎提取物组、双蒸水组、空白对照组,通过暴露处理实验,检测沉底累积时间（time of bottom）、呆滞累积时间（time of freezing）两项指标,研究了28 dpf（days post fertilization,受精后天数）、35 dpf、42 dpf 3个不同发育时期幼鱼的报警反应。结果显示：28 dpf时,处理组与3个对照组相比,在沉底累积时间、呆滞累积时间两项指标上均无显著差异,这个时期处理组有2 ind斑马鱼出现＂沉底＂,其中1 ind出现＂呆滞＂;35 dpf时,处理组与3个对照组相比,在沉底累积时间上有显著差异（P〈0.05）,在呆滞累积时间上无显著差异,这个时期有5 ind斑马鱼出现＂沉底＂,其中1 ind出现＂呆滞＂;42 dpf时,处理组与对照组相比,在沉底累积时间、呆滞累积时间两项指标均有显著差异（P〈0.05）,这个时期有8 ind斑马鱼出现＂沉底＂,且8 ind全部出现＂呆滞＂,与此对应的是这个时期大部分个体出现明显的报警反应。研究表明,斑马鱼报警反应产生的发育阶段为35~42 dfp之间,结合已知的野外斑马鱼生活史,推测斑马鱼在特定的阶段产生报警反应可能与栖息地的迁移有关。; 曹小龙祖尧张庆华贾亮李伟明; 关键词：斑马鱼发育栖息地

短小芽孢杆菌X93及胞外产物抑菌活性的研究被引量：4: 2013年; 从健康养殖大黄鱼肠道中筛选出对病原弧菌有拮抗作用的潜在益生菌株X93,利用细菌快速鉴定系统和16S rDNA方法进行细菌种类鉴定;通过点种法对其抗菌谱进行测定;采用平板扩散法,研究了培养时间、温度、盐度、蛋白酶K和Fe3+等因素对其胞外产物抑菌活性的影响。结果显示:该菌株为短小芽孢杆菌(GenBank accession No.HM137033);对20株病原指示菌中的13株均产生不同程度的抑制作用,抗菌谱较广;菌株培养48 h后的胞外产物抑菌作用最强;在pH为7时,抑菌活性最大;达到最大抑菌活性的温度和盐度分别为28℃、5;蛋白酶K和不同浓度的FeCl3均会降低其抑菌活性。该菌对病原弧菌、迟缓爱德华菌和嗜水气单胞菌等水产上常见主要致病菌有良好的拮抗效果,且具有抑菌作用的胞外产物对温度、盐度和Fe3+有一定的适应范围,适宜作为益生菌株,有望在实际养殖环境中得到应用。; 郭婧王娟宋增福贾亮张永华范斌张庆华; 关键词：短小芽孢杆菌抗菌谱胞外产物抑菌活性

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