雷洁
- 作品数：2 被引量：3H指数：1
- 供职机构：西北农林科技大学动物科技学院更多>>
- 发文基金：陕西省“13115”科技创新工程更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 环丙沙星单克隆抗体的制备
- 2011年
- 【目的】制备环丙沙星(Crprofloxacin,CPFX)单克隆抗体(monoclonal antibody,mAb),并对其免疫学特性进行鉴定,为畜产品CPFX残留的快速检测提供技术支持。【方法】采用碳二亚胺法(EDC),将载体蛋白牛血清白蛋白(Bovine serum albumin,BSA)和鸡卵白蛋白(ovalbumin,OVA)分别与CPFX偶联合成免疫抗原CPFX-BSA和包被抗原CPFX-OVA,经紫外(UV)扫描和聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定后免疫BALB/c小鼠,应用细胞融合技术筛选分泌CPFX mAb的杂交瘤细胞株,采用体内诱生腹水法制备CPFX mAb,并对其染色体核型、效价、敏感性和特异性等免疫学特性进行鉴定。【结果】UV和SDS-PAGE鉴定结果表明,人工抗原偶联成功;免疫的5只小鼠血清抗体效价均达到了1∶105左右,其中4号小鼠血清CPFX抑制效价较高且IC50最低(17.21μg/L),融合后筛选出1株敏感特异的杂交瘤细胞,命名为3D2。3D2细胞培养上清效价为1∶(1.28×103),腹水效价为1∶(1.6×105)。CPFX mAb对CPFX的IC50为9.95μg/L,对恩诺沙星的交叉反应率为128.39%,与其他同系的喹诺酮类抗生素的交叉反应率很低。【结论】获得了高效价、敏感、特异的抗CPFX mAb,为CPFX残留的快速检测奠定了技术基础。
- 贾杰只陈晓丹雷洁张智英
- 关键词：环丙沙星单克隆抗体ELISA杂交瘤
- 酿酒酵母ERG6基因缺失突变株的构建被引量：3
- 2012年
- 设计含有与ERG6基因两侧序列同源的长引物,以质粒pBlue-Kan为模板进行PCR扩增,构建含有Cre/loxP系统的酿酒酵母ERG6基因敲除组件。将基因敲除组件转化至酿酒酵母(Saccharomyce cerevisi-ae)AD1-8,通过同源重组的方式使目的基因缺失,获得为loxP-Kan-loxP序列组件所替换而产生Kanr的阳性克隆子。然后再将质粒pHis-Cre转入阳性克隆子表达Cre重组酶敲除筛选标记,成功获得酿酒酵母ERG6基因缺失的突变株,并命名为AD1-8-δ。
- 雷洁王瑞张优优张智英
- 关键词：基因敲除酿酒酵母CRE/LOX
