尹珊
- 作品数：8 被引量：6H指数：2
- 供职机构：广西大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广西大学科学技术研究重点基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 猪瘟病毒E~/(rns/)、NS4A、NS4B、NS5A蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备
- 猪瘟分布于是世界各地,在国内广泛流行,给养猪业造成严重的经济损失。长期的疫苗使用,造成病毒发生变异,呈现多种病型的发生。猪瘟病毒建立了一种逃避宿主先天性免疫系统识别的策略,免疫系统不能识别非自我元件而导致免疫耐受,造成猪...
- 尹珊
- 关键词：猪瘟病毒NS5A蛋白多克隆抗体
- 文献传递
- 正常猪外周血淋巴细胞cDNA文库部分EST序列的电子克隆及实验验证
- 本研究应用电子克隆技术和生物信息库对来自正常猪外周血淋巴细胞cDNA文库测序所得的部分EST序列进行了分析和克隆，得到20条片段重叠群(contigs)并进行了基因注释，证实它们均得到了有效延伸，具有完整开放阅读框，其中...
- 杨坚罗廷荣苏丽娟尹珊李晓泉章民李延生孙石开蔡新斌李晓宁
- 关键词：表达序列标签基因定位
- 与抗病毒免疫相关的猪ISG60基因的TPR结构基序和细胞定位
- 本发明提供了与抗病毒免疫相关的猪ISG60基因的TPR(tetratricopeptide repeat)结构基序，ISG60基因的TPR结构基序含有病毒感染相关的调控元件序列，与现有报道的猪基因的TPR结构没有显著同源...
- 罗廷荣蔡新斌孙石开李晓宁苏丽娟尹珊李晓泉李延生
- 文献传递
- 具有潜在抗猪瘟病毒作用的IRG6基因克隆及其稳定表达细胞系的构建
- 本发明涉及一种具有潜在抗猪瘟病毒特性的IRG6基因克隆及其稳定表达细胞系的构建，其特征在于：包括以下的步骤：(1)基因片段的获得；(2)载体的构建；(3)稳定表达IRG6蛋白细胞系的筛选；(4)检测报告基因的表达；本发明...
- 罗廷荣孙石开蔡新斌李晓宁苏丽娟尹珊李晓泉李延生
- 文献传递
- 正常猪外周血淋巴细胞cDNA文库部分EST序列的电子克隆及验证
- 2011年
- 【目的】探讨从EST序列电子克隆全长基因序列的有效性,为今后快速克隆和研究免疫相关基因提供新方法。【方法】以正常猪外周血淋巴细胞cDNA文库测序所得的EST序列作为起始材料,应用生物信息库对文库中的部分EST序列进行电子克隆,并用RT-PCR验证其准确性。【结果】电子克隆正常猪外周血淋巴细胞cDNA文库序列,共获得20条片段重叠群(Contigs),经基因注释,证实其均得到了有效延伸,具有完整开放阅读框(ORF),其中已知的猪基因序列14条,猪新基因序列6条;从已知猪基因序列和未知猪新基因序列中各抽取1条感兴趣序列(ESTcontig110和ESTcontig133)进行全长cDNA预测,发现电子克隆所得序列ESTcontig110和ESTcontig133的预期扩增片段(ORF)与实际扩增片段(ORF)基本一致,核苷酸相似性在98.0%以上,氨基酸相似性在93.0%以上。而对ESTcontig133的ORF序列(猪的60S核糖体蛋白L18a亚基)进行基本特性及结构预测,发现ORF133蛋白为非分泌型蛋白,由6个折叠和6个螺旋结构组成,含有8个不同的磷酸化位点。【结论】从EST序列电子克隆全长基因是可行的,为今后快速克隆和研究免疫相关基因提供了参考。
- 李晓宁苏丽娟尹珊李晓泉章民李延生孙石开蔡新斌杨坚罗廷荣
- 关键词：外周血淋巴细胞电子克隆
- 具有潜在抗猪瘟病毒作用的IRG6基因克隆及其稳定表达细胞系的构建
- 本发明涉及一种具有潜在抗猪瘟病毒特性的IRG6基因克隆及其稳定表达细胞系的构建，其特征在于：包括以下的步骤：(1)基因片段的获得；(2)载体的构建；(3)稳定表达IRG6蛋白细胞系的筛选；(4)检测报告基因的表达；本发明...
- 罗廷荣孙石开蔡新斌李晓宁苏丽娟尹珊李晓泉李延生
- 文献传递
- 猪STAT-1α基因的原核表达及其多克隆抗体制备被引量：1
- 2014年
- 【目的】通过制备STAT-1α多克隆抗体,为进一步研究STAT-1α蛋白的功能特性及探索STAT-1α与猪瘟病毒间的相互作用机制奠定基础。【方法】利用RT-PCR从猪肾PK-15细胞中克隆出STAT-1α基因保守片段,与pET-32a(+)构建原核表达重组质粒,转化原核宿主菌(Rosetta),进行IPTG诱导表达,表达的重组蛋白经纯化和复性浓缩后,免疫小鼠制备STAT-1α多克隆抗体。【结果】STAT-1α基因能与原核表达载体pET-32a(+)构建原核表达重组质粒pET-STAT-1α,转化大肠杆菌Rosetta后的最佳体外诱导条件是IPTG 0.5 mmol/L、诱导时间6 h,其重组蛋白主要以包涵体的形式表达。STAT-1α多克隆抗体具有高效特异性,与真核细胞PK-15细胞作用后,在PK-15细胞内能检测到STAT-1α蛋白表达,可观察到大部分细胞胞浆内有绿色荧光,但胞核内几乎无荧光,即STAT-1α主要定位在正常PK-15细胞的细胞浆内表达。【结论】制备获得的猪STAT-1α多克隆抗体特异性好,既能与原核细胞大肠杆菌(Rosetta)表达的STAT-1α反应,又能与真核细胞PK-15的STAT-1α发生反应。
- 李延生刘诚张珂李晓宁李晓泉尹珊谢琳娟何晓霞罗扬钟桃珍罗廷荣
- 关键词：原核表达多克隆抗体
- 正常猪外周血淋巴细胞cDNA文库构建及EST初步分析被引量：2
- 2011年
- 【目的】构建猪淋巴细胞基因文库,初步绘制正常猪外周血淋巴细胞的基因表达谱,为进一步筛选免疫相关基因提供平台。【方法】以mRNA为模板,经反转录酶催化,在体外反转录成cDNA,与质粒载体连接后转化大肠杆菌,进一步扩增后,获得猪外周血淋巴细胞全部mRNA信息的cDNA克隆集合,并进行序列分析和注释。【结果】构建了正常猪外周血淋巴细胞cDNA文库,获得库容量为1.2×106PFU/mL、重组率为93.3%、85%插入片段处于750～2000bp的高质量文库;随机测定1100条ESTs,经拼接和聚类,获得152条高表达的基因重叠群(Contigs)和619条低表达基因——单拷贝的EST(Singletons);经序列比对分析,发现23.3%ESTs为与任何物种都没有匹配的新基因,75.9%ESTs为与猪没有匹配的新基因。用GO数据库对获得的EST进行基因功能分类和KEGG路径图分析,发现丝裂原活化蛋白激酶途径(Mi-togen-activatedproteinkinase,MAPK)、钙信号通路、胰岛素信号通路、脂肪细胞因子信号通路、Toll-like受体信号通路、B细胞受体信号通路和T细胞受体信号通路的基因均有较高表达。【结论】大部分的猪外周血淋巴细胞基因尚未被分离和鉴定出来,但这些基因mRNA转录和表达丰度均较高,且在猪外周血淋巴细胞中起着非常重要的作用。
- 李晓宁孙石开蔡新斌杨坚苏丽娟章民李晓泉尹珊李延生罗廷荣
- 关键词：外周血淋巴细胞CDNA文库
