王海生
- 作品数：6 被引量：8H指数：2
- 供职机构：江苏大学基础医学与医学技术学院免疫学与免疫检验学系更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省教育厅自然科学基金镇江市科技支撑计划(社会发展)项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 真核表达质粒pDisplay-hGITRaa_(1-165)构建及其在COS-7细胞中的表达被引量：1
- 2008年
- 目的:构建含有人GITR胞外段的真核表达质粒pDisplay-hGITRaa1-165,并检测其在真核细胞内的表达。方法:将带有信号肽的GITR基因片段克隆至真核表达载体pDisplay,经酶切鉴定及测序分析,脂质体介导法转染COS-7细胞,通过蛋白质印迹法检测其在COS-7细胞内的表达水平。结果:所构建的真核表达质粒pDisplay-hGI-TRaa1-165转染COS-7细胞后,在其培养上清中检测到目的蛋白的表达。结论:成功表达pDisplay-hGITRaa1-165蛋白,为GITR的生物学功能研究奠定了基础。
- 陈君王胜军仝佳王海生马斌唐莉胡正军鲍俊峰史烨许化溪
- 关键词：GITRCOS-7细胞真核表达
- Graves病患者外周血单个核细胞GITR mRNA表达水平的变化和意义被引量：3
- 2009年
- 目的探讨Graves病(GD)患者糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体(GITR)mRNA表达水平的变化及意义。方法用实时荧光定量PCR法检测22例GD未治疗组、23例GD临床缓解组及18例健康对照组外周血单个核细胞(PBMC)GITR mR-NA相对表达水平;用化学发光法测定各组血浆中甲状腺激素水平,并评价GD未治疗组GITR mRNA相对表达水平与甲状腺激素水平的相关性。结果GD未治疗组GITR mRNA相对表达水平明显低于临床缓解组和健康对照组(χ2=18.48,P<0.01;χ2=18.26,P<0.01),而GD临床缓解组与健康对照组差异无统计学意义(χ2=0.12,P>0.05)。GD未治疗组GITRmRNA相对表达水平与FT3、FT4水平均呈负相关(r=-0.509、r=-0.483,P均<0.05),而与TSH呈正相关(r=0.458,P<0.05)。结论GD的发生可能与GD患者体内GITR基因表达下调有关。
- 王海生王胜军崔大伟陈建国柳迎昭杨先知史烨仝佳许化溪
- 关键词：GRAVES病实时定量PCR
- Graves病患者Th17细胞相关因子和GITR mRNA检测及临床意义
- 目的:
探讨Th17细胞相关因子在Graves病/(Graves disease,GD/)中的变化。并通过建立检测糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体/(glucocorticoidinducedtumor ne...
- 王海生
- 关键词：GRAVES病TH17细胞
- 文献传递
- hGITR_(aa1-165)-IgG1Fc真核表达质粒的构建及其表达
- 2009年
- 目的:构建含有人糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体(GITR)胞外段基因的真核表达质粒hGITRaa1-165-IgG1Fc-pcDNA3.1(+),检测hGITRaa1-165-IgG1Fc融合蛋白在真核细胞COS-7中的表达。方法:以pGEMT-GITR质粒为模板,通过PCR扩增获得人GITR胞外段的基因hGITRaa1-165,将该目的基因连接至IgG1Fc-pcDNA3.1(+)质粒,构建hGITRaa1-165-IgG1Fc-pcDNA3.1(+)真核表达质粒。将该重组质粒采用脂质体法转染COS-7细胞,通过SDS-PAGE和蛋白质印迹法检测hGITRaa1-165-IgG1Fc融合蛋白在真核细胞COS-7中的表达。结果:成功构建真核表达质粒hGI-TRaa1-165-IgG1Fc-pcDNA3.1(+),并在其转染的COS-7细胞培养上清中检测到hGITRaa1-165-IgG1Fc融合蛋白的表达。结论:成功表达hGITRaa1-165-IgG1Fc融合蛋白,为进一步研究GITR的生物学功能奠定了基础。
- 崔大伟王胜军陈君仝佳陈建国王海生杨先知史烨许化溪邵启祥
- 关键词：COS-7细胞真核表达
- GITR mRNA在变应性鼻炎患者外周血单个核细胞中的表达水平被引量：2
- 2009年
- 目的:探讨糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体(glucocorticoid-induced tumor necrosis factor receptor,GITR)与变应性鼻炎(allergic rhinitis,AR)的关系。方法:采用实时荧光定量PCR方法检测变应性鼻炎未治疗组(n=23,男12例,平均年龄34岁)、临床缓解组(n=17,男8例,平均年龄31岁)及正常对照组(n=24,男11例,平均年龄28岁)外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)中GITR mRNA的相对表达水平。结果:变应性鼻炎未治疗组GITR mRNA相对表达水平明显高于变应性鼻炎临床缓解组和正常对照组(P<0.05,P<0.01),而变应性鼻炎临床缓解组GITR mRNA相对表达水平与正常对照组相比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:GITR可能参与了变应性鼻炎的病理过程,具体机制有待进一步研究。
- 林志强钱炜吉均祥王海生陈建国仝佳王胜军
- 关键词：变应性鼻炎外周血单个核细胞实时定量PCR
- 人RORγtm RNA实时荧光定量PCR检测方法的建立及初步应用被引量：2
- 2009年
- 目的:建立检测人RORγt(retinoid-related orphan receptor gammat)mRNA的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR(real-time fluorescence quantitative PCR,qRT-PCR)方法。方法:根据人RORγt mRNA的保守序列设计特异性引物,提取经PMA和离子霉素刺激的人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)总RNA,并逆转录成cDNA,与pMD-18T载体连接构建质粒标准品。采用qRT-PCR方法检测RORγt mRNA水平,并评价该方法的线性、特异性及重复性。应用该方法检测Graves病(Graves′disease,GD)患者外周血中RORγt mRNA的相对表达。结果:该方法标准曲线的相关系数为0.998,融解曲线分析显示单个峰,pMD18T-RORγt质粒标准品高、低拷贝数的批内、批间变异系数分别为6.5%,8.4%和9.6%,11.2%。初步研究表明GD患者组RORγt mRNA的相对表达水平明显高于健康对照组(t=-3.72,P<0.01)。结论:建立的检测人RORγt mRNA的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法灵敏、特异且重复性好,为临床应用提供了实验基础。
- 王海生王胜军崔大伟陈建国柳迎昭杨先知史烨田洁仝佳许化溪
- 关键词：RORΓT实时定量PCRSYBR
