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胡鹏涛
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深圳市南山区人民医院
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高翎
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细胞周期蛋白依赖的蛋白激酶抑制剂4a信号通路对人骨骼肌成肌细胞衰老的诱导及对线粒体膜电位的调控
2017年
目的观察细胞周期蛋白依赖的蛋白激酶抑制剂4a(INK4a)信号通路对线粒体功能的影响。方法重组慢病毒载体pLVX-p16^INK4a被构建出并感染第3代人骨骼肌成肌细胞,用实时定量反转录聚合酶链反应(RT—qPCR)法与Western blot鉴定p16^INK4a基因转录与蛋白表达,7d后,用衰老相关β-半乳糖苷酶染色鉴定细胞衰老程度。同时,用JC-1染料染色和流式细胞仪分别检测线粒体膜电位水平。结果成功转染了p16^INK4a的成肌细胞出现明显衰老表型,其细胞线粒体膜电位为(-40.287±12.663)mV,较阳性对照(CV)及阴性对照(NC)组的(-9.267±1.332)mV和(-6.967±2.031)mV明显下降(P=0.000),而p16^INK4a蛋白和mRNA相对表达量分别为45.25±8.21和33.89±7.87,明显高于CV组的10.18±2.69和5.26±1.92及NC组的9.41±1.70和7.16±1.86(P=0.000)。结论INK4a信号通路的上调导致了人骨骼肌成肌细胞的衰老,INK4a通路是人骨骼肌成肌细胞衰老的直接诱因;另外,INK4a通路能对线粒体通路产生作用,使线粒体膜电位下降.激发线粒体通路.间接加速成肌细胞的衰老。
唐硕
高翎
闫栋
杨娟
李卓伦
胡鹏涛
熊东林
廖翔
关键词:
衰老
线粒体
膜电位
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