周永辉
- 作品数：6 被引量：23H指数：4
- 供职机构：河南农业大学牧医工程学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金河南省科技攻关计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- FcγR Ⅰ在PRRSV-ADE作用中的研究及LPS对PRRSV感染的影响
- 猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染引起的一种猪的病毒性传染病。本试验通过研究IgG单体在PRRSV侵染PAM细胞的过程中的作用，为探讨FcγRⅠ在PRRSV感染中的作用机制奠定基础...
- 周永辉
- 关键词：PRRS病毒Α干扰素白细胞介素-10
- 文献传递
- 免疫复合物对猪繁殖与呼吸综合征病毒诱导的PAM细胞因子转录的影响被引量：5
- 2012年
- 本试验通过研究免疫复合物影响猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)在巨噬细胞内增殖的因素,来进一步探讨免疫复合物经FcγR介导的PRRSV感染机制。本研究将含200TCID50PRRSV病毒液与等体积的终浓度为1.30mg·mL-1的猪IgG-兔抗猪IgG复合物分别先后和同时接种于PAM细胞,分别于12、24、36、48h收集细胞液,同时设PRRSV感染对照组、免疫复合物对照组和健康细胞对照组,利用建立的相对荧光定量PCR和绝对荧光定量PCR方法分别检测巨噬细胞中IFN-α、IL-10和TNF-α的mRNA转录水平及PRRSV的RNA水平,并进行定量分析,同时采用ELISA方法检测健康细胞中IFN-α的蛋白水平。结果显示,在感染后12～36h期间,免疫复合物能够抑制PRRSV诱导的IFN-α的mRNA水平,TNF-αmRNA水平在感染后12h被促进,而在24～36h期间被抑制。在感染后48h,免疫复合物能促进IFN-α和TNF-α的mRNA水平,而在12～48h期间均能抑制IL-10的mRNA水平,此外,免疫复合物在感染12、24和36h时间段内均能明显促进病毒的增殖,但在48h后不显著。健康细胞中IFN-α的蛋白水平在培养12～48h之内呈"降-升-降"的趋势。结果表明,IFN-α蛋白的表达与其mRNA的转录不同步。在PRRSV感染初期,免疫复合物能抑制PRRSV诱导的抗病毒因子的mRNA水平,病毒的复制被促进,而在感染后期,抗病毒因子达到一定的浓度后发挥抗病毒作用,在一定程度上抑制病毒的复制。而TNF-α的转录规律不明显,表明免疫复合物可能同时与激活型和抑制型FcγR结合来共同调节PRRSV诱导的细胞因子的转录。
- 张宜娜李珂周永辉张继希杨青原慕春龙郭国富夏平安崔保安
- 关键词：PRRSV免疫复合物IFN-Α
- 猪唾液酸黏附素氨基端结构域基因的克隆表达及其多克隆抗体制备被引量：4
- 2012年
- 本试验旨在克隆出猪唾液酸黏附素的近氨基端结构域基因,进而构建原核表达载体并诱导表达重组蛋白,以制备多克隆抗体。试验中应用RT-PCR技术从健康仔猪肺巨噬细胞中克隆出猪唾液酸黏附素的近氨基端结构域的cDNA序列,并将其亚克隆到原核表达载体pET-32a中,构建重组表达质粒pET-Sn150,成功表达了分子质量大小约为43.1ku的γ亚单位重组蛋白。将重组蛋白pET-Sn150免疫小鼠,制备获得鼠抗pET-Sn150重组蛋白多克隆抗体,将得到的重组蛋白多克隆抗体采用间接ELISA和Western blotting试验方法检测,ELISA测定多克隆抗体的血清效价为1∶12800;Western blotting试验结果证明,制备的鼠抗pET-Sn150多克隆抗体可以与重组蛋白进行特异性结合,从而证明重组蛋白具有较好的免疫原性。本试验克隆出猪唾液酸黏附素的近氨基端结构域基因并成功表达,为进一步研究其结构与功能奠定了基础。
- 张继希张志远张宜娜周永辉张祥郝一妹张元元夏平安崔保安
- 关键词：克隆原核表达多克隆抗体
- FcγRⅡB介导的PRRSV感染的抗体依赖性增强作用被引量：13
- 2012年
- 将PRRSV Hn-1/06株阳性血清(中和效价为1∶2)做2～8倍倍比稀释后,分别与等体积含100TCID50/100μL的PRRSV Hn-1/06株病毒液混合,制备感染性免疫复合物。取纯化的猪IgG和兔抗猪IgG制备非感染性免疫复合物。用鼠抗FcγRⅡB阳性血清封闭猪肺泡巨噬细胞(PAM细胞)表面的FcγRⅡB,然后分别将感染性免疫复合物和非感染性免疫复合物与PRRSV的混合物感染封闭后的PAM细胞,培养48h后收获样品,采用荧光定量RT-PCR检测收获样品中PRRSV的含量。结果表明,选择性封闭PAM细胞的FcγRⅡB能增强PRRSV的抗体依赖性增强作用。
- 段二珍周永辉张宜娜张继希张志远卢晓艳刘肖萍夏平安崔保安
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒FC受体荧光定量RT-PCR
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒河南分离株NSP2和GP5基因遗传变异分析被引量：4
- 2012年
- 扩增了自2006-2009年间从河南省不同地区分离的9株PRRSV株NSP2和GP5编码基因,并进行了序列测定和分析。结果显示,9株分离株NSP2全长2 850～2 937 bp,编码950～979个氨基酸,GP5基因全长603 bp,编码200个氨基酸,与CH-1a株比对,其中有7株分离株的NSP2基因均出现30个氨基酸的缺失。对9株分离株NSP2和GP5基因进行核苷酸序列分析并绘制进化树,结果表明,9株河南分离株都属于美洲型毒株,对9株PRRSV分离株NSP2和GP5基因同时进行序列分析,比较其变异结果是否一致,为进一步探寻PRRSV流行株遗传变异规律奠定了基础。
- 卢晓艳周永辉李伟娟张志远刘肖萍段二珍夏平安崔保安
- 关键词：PRRSVNSP2基因ORF5基因
- 猪FcγR ⅡB多种剪接异构体的基因克隆与序列分析
- 2011年
- 目的:研究猪FcγRⅡB受体基因选择性剪接的多样性。方法:根据GenBank中猪FcγRⅡB(swFcγRⅡB)cDNA基因序列(DQ026064),应用Primer5.0软件设计合成了一对特异性引物,应用RT-PCR技术,从不同个体的猪肺泡巨噬细胞中扩增FcγRⅡB基因并进行测序分析,在GenBank中查找猪FcγRⅡBDNA序列(NW-001886241.1),并用相关软件分析其外显子组成。结果:共克隆出6个转录体,其中转录体2,4在信号肽部分都有一个丙氨酸的缺失。转录体5,6是两个新型的FcγRⅡB转录体,转录体5胞外区只有一个Ig结构域,转录体6是一个只含有一个Ig结构域的推导性可溶性Fc受体。结论:猪FcγRⅡB的表达因RNA选择性剪接方式不同而呈现出多样性。
- 张宜娜刘肖萍张志远段二珍张继希周永辉夏平安崔保安
- 关键词：FCΓR剪接异构体多样性
