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张飞飞
作品数:
2
被引量:5
H指数:2
供职机构:
徐州医学院
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发文基金:
国家自然科学基金
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相关领域:
生物学
农业科学
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合作作者
尚广东
南京师范大学生命科学学院
王瑞青
南京师范大学生命科学学院
马超
南京师范大学生命科学学院
朱宇鹏
南京师范大学生命科学学院
石牡丹
南京师范大学生命科学学院
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尚广东
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2015
1篇
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基于重组工程法高转化效率的大肠杆菌BL21(DE3)表达菌株构建
被引量:2
2015年
[目的]提高最常用的异源蛋白表达宿主菌E.coli BL21(DE3)的转化效率。[方法]利用基于质粒的重组工程系统和双链断裂修复功能。[结果]敲除了编码降解外源DNA的I型限制性内切酶的hsdR基因,获得了高转化效率以及其他功能与BL21(DE3)仍保持一致的LS1928菌株。[结论]获得的LS1928菌株可能会作为获得催化用酶的关键材料,进而在蛋白质工程等研究领域有着重要的作用。
张飞飞
石牡丹
尚广东
关键词:
基因敲除
大肠杆菌BL21(DE3)
大肠杆菌系列融合表达载体的构建
被引量:3
2013年
许多异源蛋白在大肠杆菌内的表达是以不可溶、无生物学活性的包涵体形式存在,这为蛋白质的功能研究带来困难.融合表达是提高蛋白可溶性的有效方案之一.为构建通用型融合表达载体,本研究将5种常见的融合标签即突变型麦芽糖结合蛋白(mMBP)、小分子泛素样修饰蛋白(SUMO)、翻译起始因子(IF2-I)、氮源利用物质A(NusA)和谷胱甘肽转移酶(GST)以及3种伴侣蛋白(GroEL、DnaK和TF)分别克隆至pET30a(+),构建了系列融合表达载体.这些载体含有相同的克隆位点以及位于融合标签羧基端的烟草蚀刻病毒蛋白酶(TEV)的酶切位点.N-乙酰-D-葡萄糖胺2-异构酶基因hRnBP克隆到mMBP融合表达载体后,经IPTG诱导,SDS-PAGE检测表明融合蛋白均得到了高效表达且几乎完全可溶,TEV酶切获得了预期的带型.全细胞偶联生成N-乙酰-D-神经氨酸实验发现mMBP-hRnBP的摩尔转化率较无mMBP标签的体系提高了近60%,证明了融合表达载体中融合标签的适用性.新型的原核融合表达载体为蛋白的融合表达、分离纯化及功能研究提供了更多的选择.
张飞飞
王瑞青
朱宇鹏
马超
尚广东
关键词:
融合表达载体
融合标签
TEV
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