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张飞飞

作品数:2 被引量:5H指数:2
供职机构:徐州医学院更多>>
发文基金:国家自然科学基金更多>>
相关领域:生物学农业科学更多>>

文献类型

  • 2篇中文期刊文章

领域

  • 1篇生物学
  • 1篇农业科学

主题

  • 1篇异构酶
  • 1篇融合标签
  • 1篇融合表达载体
  • 1篇葡萄糖
  • 1篇基因
  • 1篇基因敲除
  • 1篇杆菌
  • 1篇N-乙酰
  • 1篇TEV
  • 1篇D-葡萄糖
  • 1篇肠杆菌
  • 1篇大肠杆菌BL...

机构

  • 2篇南京师范大学
  • 1篇徐州医学院

作者

  • 2篇尚广东
  • 2篇张飞飞
  • 1篇朱宇鹏
  • 1篇马超
  • 1篇石牡丹
  • 1篇王瑞青

传媒

  • 1篇安徽农业科学
  • 1篇南京师大学报...

年份

  • 1篇2015
  • 1篇2013
2 条 记 录,以下是 1-2
排序方式:
基于重组工程法高转化效率的大肠杆菌BL21(DE3)表达菌株构建被引量:2
2015年
[目的]提高最常用的异源蛋白表达宿主菌E.coli BL21(DE3)的转化效率。[方法]利用基于质粒的重组工程系统和双链断裂修复功能。[结果]敲除了编码降解外源DNA的I型限制性内切酶的hsdR基因,获得了高转化效率以及其他功能与BL21(DE3)仍保持一致的LS1928菌株。[结论]获得的LS1928菌株可能会作为获得催化用酶的关键材料,进而在蛋白质工程等研究领域有着重要的作用。
张飞飞石牡丹尚广东
关键词:基因敲除大肠杆菌BL21(DE3)
大肠杆菌系列融合表达载体的构建被引量:3
2013年
许多异源蛋白在大肠杆菌内的表达是以不可溶、无生物学活性的包涵体形式存在,这为蛋白质的功能研究带来困难.融合表达是提高蛋白可溶性的有效方案之一.为构建通用型融合表达载体,本研究将5种常见的融合标签即突变型麦芽糖结合蛋白(mMBP)、小分子泛素样修饰蛋白(SUMO)、翻译起始因子(IF2-I)、氮源利用物质A(NusA)和谷胱甘肽转移酶(GST)以及3种伴侣蛋白(GroEL、DnaK和TF)分别克隆至pET30a(+),构建了系列融合表达载体.这些载体含有相同的克隆位点以及位于融合标签羧基端的烟草蚀刻病毒蛋白酶(TEV)的酶切位点.N-乙酰-D-葡萄糖胺2-异构酶基因hRnBP克隆到mMBP融合表达载体后,经IPTG诱导,SDS-PAGE检测表明融合蛋白均得到了高效表达且几乎完全可溶,TEV酶切获得了预期的带型.全细胞偶联生成N-乙酰-D-神经氨酸实验发现mMBP-hRnBP的摩尔转化率较无mMBP标签的体系提高了近60%,证明了融合表达载体中融合标签的适用性.新型的原核融合表达载体为蛋白的融合表达、分离纯化及功能研究提供了更多的选择.
张飞飞王瑞青朱宇鹏马超尚广东
关键词:融合表达载体融合标签TEV
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