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EHEC毒力因子-Nlep作用于宿主NF-κB炎症通道: 肠出血性大肠埃希菌(Enterohemorrhagic Escherichia coli，EHEC)是一种重要的食源性致病菌，其感染会造成出血性结肠炎、溶血性尿毒综合征等严重并发症，带来严重的临床危害[1-3]。EHEC...; 李崭; 关键词：肠出血性大肠埃希菌毒力因子 NF-ΚB信号通路; 文献传递

肠出血性大肠杆菌O157∶H7 EspA和EspB蛋白的重组表达及其免疫效果: 2013年; 目的:通过DNA重组技术表达肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157∶H7的EspA和EspB蛋白,并分析它们的免疫保护性。方法:采用PCR技术从EHEC O157∶H7基因组中扩增espA和espB基因,连接至pET-22b(+)载体上,转化至宿主细胞大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达,用亲和层析纯化目的蛋白,SDS-PAGE测定其相对分子质量,免疫小鼠分析其免疫保护性。结果:重组espA和espB基因片段的测序结果与GenBank中的相应基因序列完全一致,一致性均为100%;得到了纯度为95%以上的重组EspA和EspB蛋白,免疫小鼠所得到的抗体效价均为106。结论:重组EspA和EspB蛋白获得了可溶性表达,表达的蛋白具有良好的免疫保护性,为进一步制备疫苗奠定了基础。; 韩燃李涛王琴房华丽罗森郭峰李崭王德慧李文平王慧; 关键词：重组蛋白免疫效果

肠出血性大肠杆菌毒力因子Z1444的原核表达及其丝/苏氨酸激酶活性验证: 2014年; 目的:在大肠杆菌中表达肠出血性大肠杆菌(EHEC)毒力岛上的毒力因子Z1444并纯化,对其丝/苏氨酸激酶活性进行初步检测。方法:根据GenBank中Z1444基因序列及pET-28a(+)载体的多克隆位点设计引物,以EHECO157∶H7全菌裂解液为模板,经PCR钓取1047 bp的目的片段,与表达载体pET-28a(+)连接,构建重组表达质粒pET-28a(+)-Z1444,将其转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,IPTG诱导蛋白表达并经SDS-PAGE鉴定,利用体外反应体系鉴定重组蛋白的丝/苏氨酸激酶活性。结果:双酶切和测序鉴定表明,pET-28a(+)-Z1444原核表达质粒构建正确;诱导表达后经纯化,获得纯度在90%以上的可溶性重组Z1444,相对分子量约为38×103;体外酶活实验验证了Z1444的丝/苏氨酸激酶活性。结论:Z1444在大肠杆菌中获得高效可溶性表达,为后续功能验证奠定了基础。; 李崭李涛陈芳红刘雄周育森王慧; 关键词：肠出血性大肠杆菌

蛋白及其组合物与在制备预防、诊断或治疗EHEC感染产品中的应用: 本发明公开了蛋白及其组合物与在制备预防、诊断或治疗EHEC感染产品中的应用。本发明提供如下A-D中任一所示的物质在制备具有如下1）和/或2）功能的产品中的应用：1）预防、诊断和/或治疗由病原菌EHEC感染或引发的疾病；2...; 王慧李涛王琴韩燃李崭陈芳红; 文献传递

突触小泡膜蛋白VAMP-2的原核表达、纯化及活性鉴定被引量：2: 2013年; 目的克隆突触小泡膜蛋白(VAMP-2)基因,原核表达、纯化并鉴定重组蛋白VAMP-2活性。方法根据GenBank中已报道的VAMP-2基因序列,设计特异性引物,通过RT-PCR从小鼠的全脑组织总RNA中获得基因。将去疏水区后的基因克隆至含有N端信号肽pelB序列的原核表达载体pET-22b中,重组质粒转化BL21(DE3)Rosetta感受态细胞,IPTG诱导表达,表达产物经Ni-NTA亲和层析纯化,SDS-PAGE及Western印迹进行鉴定,并利用金属内肽酶BoNT/B轻链对该蛋白进行生物活性分析和酶活动力学测定。结果与结论成功构建pET-22b-VAMP-2表达质粒,并转化大肠杆菌BL21(DE3)Rosetta,Western印迹证实重组蛋白VAMP-2(残基Met 1-Met 94)获得可溶性表达。重组蛋白VAMP-2可被金属内肽酶BoNT/B特异性酶解,具有良好的生物学活性。; 罗森王琴房华丽王德慧李崭李涛王慧; 关键词：底物原核表达

肠出血性大肠杆菌O157∶H7 z0986-z1444双缺失突变株构建被引量：1: 2017年; 目的采用Red重组方法敲除肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157∶H7 z0986和z1444基因,构建双缺失突变株。方法首先构建z0986、z1444打靶片段;其次以电击法转化感受态细胞,之后通过PCR鉴定所得菌株;最终所得阳性单克隆测定生长曲线。结果 z1444单基因缺失突变株(Δz1444/933)及z0986-z1444双基因缺失突变株(Δz0986/Δz1444/933)构建成功,其生长曲线与野生型EHEC O157∶H7差异均无统计学意义。结论 z0986与z1444基因缺失对EHEC的生长无影响。构建Δz1444/933及Δz0986/Δz1444/933为深入研究z1444基因的功能及作用机制奠定了基础。; 苏莉王建新陈芳红李崭黄洁李涛王慧; 关键词：肠出血性大肠杆菌 RED重组系统

pilO基因对鲍曼不动杆菌运动能力的影响被引量：1: 2015年; 目的:构建无标记的鲍曼不动杆菌pil O基因缺失突变株,通过表型鉴定pil O基因缺失对鲍曼不动杆菌运动能力的影响。方法:PCR扩增pil O基因上下游各1 kb同源臂,连接至p MO130-TelR自杀质粒,质粒转化大肠杆菌S17-1后再接合至鲍曼不动杆菌4294中;蔗糖诱导自杀质粒与基因组同源重组,以获得基因缺失突变株;蹭行实验观察pil O基因缺失对鲍曼不动杆菌运动能力的影响。结果:构建了pil O基因缺失鲍曼不动杆菌4294菌株突变株;缺失株与野生株生长曲线无明显差异,但蹭行能力显著下降。结论:pil O基因与细菌蹭行能力密切相关,提示其编码鲍曼不动杆菌Ⅳ型菌毛结构蛋白。; 郭通刘雄王德慧李崭黄洁李涛王慧; 关键词：鲍曼不动杆菌

肠出血性大肠杆菌效应因子z2151的E3泛素连接酶活性鉴定: 2016年; 目的利用基因工程方法原核表达z2151蛋白,并鉴定其E3泛素连接酶活性。方法以肠出血性大肠杆菌O157∶H7为模板,PCR扩增目的基因,构建重组表达载体p ET22b-z2151,转化BL21(DE3),诱导蛋白表达,采用镍柱亲和纯化获取目的蛋白;通过体外泛素化实验检测蛋白泛素连接酶活性。结果亲和纯化得到较高浓度和纯度的z2151蛋白,其在体外泛素化反应中能够促使泛素小分子形成多聚泛素链,即有E3泛素连接酶活性;而且对E2泛素结合酶具有一定的选择特异性。结论原核表达质粒p ET22b-z2151构建成功,目的蛋白z2151具有泛素连接酶的体外泛素化能力,并且针对不同的E2酶亲和力不同,这些都为后续功能机制研究奠定了基础。; 陈芳红李涛李崭孙超尘王慧; 关键词：基因工程泛素连接酶

蛋白及其组合物与在制备预防、诊断或治疗EHEC感染产品中的应用: 本发明公开了蛋白及其组合物与在制备预防、诊断或治疗EHEC感染产品中的应用。本发明提供如下A-D中任一所示的物质在制备具有如下1）和/或2）功能的产品中的应用：1）预防、诊断和/或治疗由病原菌EHEC感染或引发的疾病；2...; 王慧李涛王琴韩燃李崭陈芳红; 文献传递

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