杨明锋
- 作品数：6 被引量：28H指数：3
- 供职机构：石河子大学动物科技学院更多>>
- 发文基金：兵团博士基金新疆生产建设兵团博士基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 金黄色葡萄球菌ClfA基因表达产物在小鼠的免疫原性分析被引量：2
- 2010年
- 为分析原核表达的金黄色葡萄球菌ClfA部分基因表达产物的免疫原性,作者采用PCR方法从奶牛乳房炎病例中分离的金黄色葡萄球菌中克隆出ClfA基因的部分片段,测序后用DNAman软件进行抗原位点分析。构建原核表达质粒ClfA-pET-28a+,转化BL21(DE3)菌,经IPTG诱导表达。用His-bind柱纯化表达蛋白,加弗氏佐剂混匀后免疫小鼠。小鼠分娩后乳腺内攻菌,检查乳腺组织病理变化,乳腺组织中金葡菌数量和TNF-α水平来评价原核表达蛋白的免疫保护效果。结果显示转化BL21(DE3)菌,经IPTG诱导可以表达ClfA蛋白。原核表达蛋白抗原免疫小鼠可以显著降低乳腺组织内金葡菌数量,TNF-α水平也显著低于对照组和全菌蛋白抗原组,提示原核表达的ClfA蛋白免疫小鼠可以减少乳腺内金葡菌定植的数量,减轻乳腺内感染造成炎症的严重程度。本研究表明原核表达金黄色葡萄球菌ClfA蛋白有一定的免疫保护效果,为奶牛乳房炎疫苗的研究提供科学依据。
- 杨明锋陈创夫曹旭东刘君王正荣李贞乔军
- 关键词：乳房炎金黄色葡萄球菌小鼠免疫原性
- 致奶牛乳房炎金葡菌亚单位疫苗与原核表达牛IL-6的佐剂效果研究
- 奶牛乳房炎是影响奶牛养殖业最重要的疾病之一,可以引起产奶量及乳品质量下降,花费巨额的治疗费用而给奶牛养殖业带来巨大的经济损失。奶牛乳房炎是多病因疾病,因为乳房炎发生过程中有大量的微生物参与,使用疫苗预防也就成为乳房炎防控...
- 杨明锋
- 关键词：乳房炎金葡菌亚单位疫苗IL-6
- 文献传递
- 布鲁氏菌M5-90ΔvirB2基因缺失株免疫小鼠抗体及相关细胞因子的检测研究被引量：7
- 2011年
- 对构建的M5-90ΔvirB2基因缺失株进行免疫原性初步研究。分别用1×106 CFU剂量的M5-90ΔvirB2株与M5-90疫苗株接种BALB/c小鼠,SAT试验和RBPT试验验证体液免疫产生的抗体水平;用ELISA方法检测小鼠外周血细胞因子IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、TNF-α。结果表明,抗体水平检测结果显示M5-90ΔvirB2弱于M5-90;细胞因子检测水平显示M5-90ΔvirB2也低于M5-90。本研究为布鲁氏菌疫苗株M5-90的改造奠定了基础,并提供了相关的理论依据。
- 李臻陈创夫王远志葛阳春张红星杨明锋张辉
- 关键词：布鲁氏菌基因缺失株抗体水平细胞因子
- 奶牛IL-6基因克隆与原核表达被引量：1
- 2010年
- 目的:克隆新疆地区奶牛il-6基因,获得原核表达IL-6蛋白。方法:根据GenBank上牛IL-6的序列,用premier5.0软件设计一对引物。以牛肺巨噬细胞提取的RNA反转录产物(cDNA)为模板扩增出567bp的条带,克隆到pBS-T载体,测序正确后,提取质粒经BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切回收目的条带,亚克隆到pGEX-4T-1原核表达载体,转化DE3菌,经IPTG诱导表达。以表达产物免疫小白鼠血清为一抗检测表达产物的反应原性。结果:成功克隆了新疆地区奶牛il-6基因,克隆部分编码188个氨基酸与GenBank公布的序列100%同源,表达出46kDa的融合蛋白,免疫印迹检测显示原核表达牛IL-6有免疫原性。结论:新疆地区奶牛在IL-6的基因序列上与其他地方牛无差异,原核表达奶牛IL-6蛋白为在奶牛乳房炎疫苗中的佐剂效果研究打下了基础。
- 杨明锋王正荣陈创夫李贞曹旭东乔军
- 关键词：奶牛IL-6细胞因子原核表达
- 金黄色葡萄球菌感染小鼠乳房炎模型的建立被引量：12
- 2011年
- 取25只分娩8～10d的昆明系小鼠随机分成5组(n=5),分别为阴性对照、生理盐水(pss)组和不同剂量金黄色葡萄球菌(1.0×102cfu/50μL、1.0×103cfu/50μL、5.0×103cfu/50μL)试验组,经乳头导管对第4对乳腺50μL/只注射,24h后观察结果,一侧乳腺甲醛固定制作切片观察组织病理变化,另一侧冰上研磨后取匀浆用高盐甘露醇鉴别培养基进行细菌计数,检测组织匀浆上清中的TNF-α含量。结果显示,试验组随着注射细菌数量的增加,病理变化加重,分离到的金黄色葡萄球菌数量显著增加,乳腺匀浆中TNF-α含量明显升高。结果表明,注射1.0×103cfu组可以引起较典型的小鼠乳房炎,且病理变化适中,适合用来建立金黄色葡萄球菌小鼠乳房炎模型。
- 杨明锋陈创夫王正荣张科李贞曹旭东乔军
- 关键词：金黄色葡萄球菌小鼠
- 结核杆菌多位点环介导等温扩增检测方法的建立被引量：6
- 2010年
- 为建立一种快速、高敏感、高特异、鉴别结核分枝杆菌和牛分枝杆菌的方法,本研究根据大多数致病性结核分枝杆菌共有序列esat-6,结核分枝杆菌和牛分枝杆菌gyrB共有特异性序列,以及结核分枝杆菌种特异序列mtp40设计6对特异性引物对痰液中的结核分枝杆菌进行检测,并与鉴别培养基分离培养结果以及常规PCR鉴定结果进行比较。实验结果表明,建立的LAMP检测方法具有很高的特异性。可区分致病性结核分枝杆菌和非致病结核分枝杆菌,也可鉴别结核分枝杆菌和牛分枝杆菌。LAMP检测技术的灵敏度比经典PCR技术高100倍左右,可检测到7拷贝/反应。另外,用3种方法同时检测样品发现,LAMP与细菌培养的符合率为90.91%,LAMP与常规PCR检测结果的符合率为100%。LAMP检测方法可以在流行病学调查及现场快速诊断方面广泛应用,并为临床治疗提供依据。
- 王正荣陈创夫杨明锋孟茹曹旭东张辉乔军
- 关键词：环介导等温扩增结核分枝杆菌牛分枝杆菌
