陈胜利
- 作品数：12 被引量：24H指数：3
- 供职机构：西北农林科技大学动物科技学院更多>>
- 发文基金：“十一五”国家科技支撑计划陕西省农业科技创新项目陕西省自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 腺病毒表达鸡GM-CSF及其对鸡骨髓细胞增殖活性的检测被引量：2
- 2012年
- 为了方便鸡粒细胞/巨噬细胞集落细胞刺激因子(GM-CSF)作为疫苗佐剂使用,用PCR方法扩增出鸡GM-CSF基因,将其连入人腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV,将重组穿梭载体与腺病毒骨架重组后,获得重组腺病毒骨架载体,线性化后转染293SD细胞,获得能够表达鸡GM-CSF的腺病毒。将获得的重组腺病毒转导鸡成纤维细胞系DF1,细胞培养上清中,可以检测到GM-CSF刺激鸡骨髓细胞活性,为鸡GM-CSF进一步应用奠定了基础。
- 王兴龙郝华芳杜恩岐唐文雅张鹏陈胜利张渭东张淑霞党如意杨增岐
- 关键词：重组腺病毒活性检测
- 秦岭野鸟源新城疫病毒致病性与F、HN基因分子特征分析被引量：5
- 2013年
- 为研究新城疫病毒(NDV)在秦岭地区野生鸟群中的流行情况,在秦岭地区采集健康野鸟咽喉、泄殖腔拭子各252份,进行NDV的分离、鉴定,并对NDV分离株进行生物学特性研究和遗传进化分析。结果共分离获得5株野鸟源NDV,其致病指数MDT、ICPI和IVPI分别为60.0～76.8h、0.900～1.261、0.41～0.81;对F基因(47～420bp)进行遗传进化分析,5株分离株均属于基因VIb型,F蛋白裂解位点为112 RRQKRF117;HN基因氨基酸相似性为99.5%～99.8%,与鸽源基因VI型NDV相似性为91.4%～98.0%,与LaSota、F48E9相似性分别为87.1%～87.4%、89.0%～89.3%。上述结果表明,基因VIb型NDV在秦岭地区健康野生鸟类中流行,可能源于鸽源NDV,并具有强毒力的分子特征,但对鸡的表现为中等致病力,说明野鸟NDV具有独特的分子特征和致病性。
- 张渭东王丹阳唐文雅王兴龙姜振国陈胜利幕国辉刘海金贺生芳付向晶郝华芳刘阳坤杜恩岐杨增岐
- 关键词：F基因HN基因遗传进化分析
- 秦岭北麓关中地区野鸟源基因Ⅸ型新城疫病毒病原学监测及分离株毒力测定被引量：4
- 2013年
- 为评价秦岭北麓关中地区野鸟源基因Ⅸ型新城疫病毒（NDV）流行及毒力情况，对374份源于该区域健康野鸟的咽喉、泄殖腔拭子进行病毒分离与鉴定，并对NDV分离株进行生物学特征和遗传进化分析。结果共分离到5株野鸟源NDV（包括2株候鸟源），其致病指数MDT、ICPI、IVPI差异较大，分别为37．2～64．8h，0．425～1．638，2．04～2．76。F基因（535bp）推导氨基酸序列和同源性分析显示，5株NDV分离毒均具有强毒的融合（F）蛋白裂解位点^112R—R—Q-R—R—F^117，5株分离毒间同源性高达99．8％～100．0％。F基因高变区（42～420nt，374bp）分析显示5株分离毒均属于我国特有的基因Ⅸ型NDV，与我国早期的基因Ⅸ型NDV流行株F48E9亲缘关系很近（核苷酸同源性为99．4％～99．6％），而与La Sota和V4等传统疫苗株及目前家禽中流行基因Ⅶ型NDV毒株亲缘关系较远。本研究表明，健康野鸟为基因Ⅸ NDV的携带者，尽管首次获得的5株野鸟源基因Ⅸ型NDV毒株生物学特征差异较大，但均具有强毒的分子生物学特征及致病性，提示对周边环境和家禽养殖业存在潜在威胁。
- 段旭基张鹏吴朋朋马静陈胜利郝华芳张定全韩青松付向晶张渭东杜恩岐杨增岐
- 关键词：野鸟毒力遗传进化分析
- 4株鸡肾型IBV陕西分离株3种主要结构蛋白基因的遗传变异分析被引量：3
- 2014年
- 采用RT—PCR方法对近年来本实验室分离的4株肾型IBV陕西分离株的纤突蛋白S1基因、膜蛋白基因（M）和核蛋白基因（N）分别进行扩增，测序后进行遗传变异分析。结果显示：与肾型疫苗株w93相比，各分离株S1基因均存在广泛的点突变，并且都存在基因插入现象，分离株之间氨基酸同源性为75．8％～99．4％；M基因除了存在点突变外，W09和WNl2在其5’端还存在9个核苷酸的缺失，分离株之间氨基酸同源性为91．0％～99．6％；N基N无插入和缺失，但存在基因点突变，分离株之间氨基酸同源性为99．3％～99．5％。4株IBV分离株在S1、M和N基因氨基酸系统进化树上分属于不同的进化群，且都与较早的肾型IBV陕西分离株w118遗传距离较远。结果表明，4株鸡肾型IBV流行毒株的s1、M和N基因均存在不同程度变异，这可能是免疫鸡群肾型鸡传染性支气管炎长期流行的主要原因．
- 杨涛张淑霞郝华芳刘青天陈胜利杨增岐王兴龙杜恩岐党如意
- 关键词：鸡肾型传染性支气管炎病毒S1基因M基因
- 兔病毒性出血症病毒抗体间接ELISA检测方法的建立被引量：3
- 2013年
- 建立一种检测兔病毒性出血症病毒(RHDV)抗体的间接ELISA方法。对RHDV陕西分离株VP60基因进行原核表达,Western blot分析表达产物的免疫反应性;以纯化的蛋白为包被抗原建立ELISA方法,并对反应条件进行优化。结果表明,VP60蛋白在大肠杆菌中成功表达,产物约为42.34 ku的融合蛋白,具有良好的反应原性;优化的ELISA最佳工作条件为:重组抗原包被浓度2.9μg/mL,37℃2 h后4℃过夜,1%BSA 37℃封闭2 h,待检血清37℃孵育1 h,酶标抗体1∶10 000稀释,37℃作用1 h,37℃显色5 min,临界值为0.340;建立的ELISA方法特异性强、重复性好、敏感性高;临床检测180份样品,与血凝抑制试验的符合率为74.1%,与商品化试剂盒检测结果符合率为94.8%。该方法可用于临床样品的大批量检测。
- 邱立郝华芳王兴龙陈胜利王佳
- 关键词：兔病毒性出血症ELISA
- 肾型IBV陕西分离株CK/CH/Shaanxi/2009/H09全基因的克隆与序列分析
- 2013年
- 为了解鸡肾型传染性支气管炎病毒陕西流行株的分子生物学特征，参考DY07株全基因核苷酸序列设计22对引物，采用RT PCR方法对西北农林科技大学动物医学院禽病研究室分离的1株肾型IBV陕西分离株CK/CH/Shaanxi/2009/H09的全基因进行分段扩增并测序，将测序成功的各序列依次拼接，得到全基因序列后进行序列比对分析。研究结果表明，该分离株基因组全长27 675 bp，共有10个开放阅读框，其基因排序为5′cap Replicase S 3a 3b 3c M 5a 5b N poly（A）3′，纤突蛋白裂解位点为到536RRFRR540， 3a、5a和N基因的大小与参考毒株相比是保守的，但编码其他蛋白的基因长度存在差异；同源性分析结果显示，该毒株与48个参考毒株的同源性为85.2%~93.5%；系统进化树分析结果显示，该毒株与中国分离株ck/CH/LDL/091022、YX10株和DY07 株的亲缘关系较近，同属于中国近年来主要流行的血清型毒株，但在基因水平上已经产生一定程度的变异。
- 杨涛张淑霞杨增岐刘青天郝华芳陈胜利杜恩岐王兴龙党如意王晶钰
- 关键词：鸡肾型传染性支气管炎病毒全基因
- 稳定表达新城疫病毒V蛋白禽源细胞系的建立被引量：1
- 2012年
- 为获得可以稳定表达新城疫病毒V蛋白的DF-1细胞系,以质粒载体为模板,用PCR方法扩增新城疫病毒V基因并引入酶切位点(EcoRⅠ和BamHⅠ),以同尾酶相连的方式与用EcoRⅠ和BglⅡ酶切的piggyBac转座子系统克隆质粒pTKL1-CMV-Puro-EGFP相连接,经酶切鉴定、测序分析正确后,用Lipo-fectamineTM2000将重组质粒pTKL1-CMV-Puro-EGFP-V和辅助质粒mPB共转染DF-1细胞,通过绿色荧光观察、嘌呤霉素筛选及蛋白表达的Western-blot检测,结果表明,稳定表达新城疫病毒V蛋白的DF-1细胞系已成功建立。证实piggyBac转座子系统能够用于稳定表达外源基因的禽源细胞系的构建,为piggy-Bac转座子系统在禽源细胞的应用和新城疫病毒V蛋白的研究提供了一定的参考资料。
- 唐文雅王兴龙张渭东杜恩岐陈胜利王丹阳党如意张淑霞杨增岐
- 关键词：PIGGYBAC转座子细胞系
- 肉种鸡场鸡白痢和大肠杆菌病混合感染的试验研究被引量：1
- 2010年
- 为研究及大肠杆菌和沙门氏菌对鸡的危害,无菌采集某鸡场送检的死亡肉仔鸡和鸡胚样品,进行病原菌的分离、鉴定,结果显示引起该鸡场鸡只发病的病原除大肠杆菌外,还伴有沙门氏菌的混合感染。其中11日龄自然死亡鸡样品、11日龄冻死鸡样品、18日龄冻死鸡样品、活鸡泄殖腔拭子样品大肠杆菌分离率分别为:66.7%、0%、36.4%和100%。沙门氏菌分离率分别为:88.9%、100%、63.6%和13.3%。其中11日龄自然死亡鸡样品混合感染率为55.6%。
- 张永第杨增岐陈胜利
- 关键词：鸡大肠杆菌沙门氏菌
- 陕西省副猪嗜血杆菌的分离及其基于tbpA基因的分型鉴定被引量：3
- 2011年
- 【目的】检测副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,Hps)在陕西关中地区的感染状况,并对分离菌株进行基因型分析,为该地区副猪嗜血杆菌病的流行病学研究提供依据。【方法】从陕西关中地区14个发生多发性关节炎和浆膜炎的猪场采集30份病料,分离细菌,通过其培养特性和形态观察及生化试验和PCR等方法对分离株进行鉴定,并用Blast软件对分离株的16SrRNA序列进行同源性比对,同时对分离菌株进行了几种常见药物的敏感性检测。通过3种限制性内切酶TaqⅠ、AvaⅠ、AfaⅠ,对已被鉴定为副猪嗜血杆菌菌株的转铁结合蛋白A编码基因(tb-pA)进行PCR-RFLP基因分型。【结果】分离得到了5株疑似副猪嗜血杆菌菌株,经培养特性和形态观察、生化试验、PCR鉴定及序列同源性比对,将其鉴定为副猪嗜血杆菌。PCR-RFLP分型结果表明,从5株副猪嗜血杆菌分离株中共得到了4种基因型,分别为EBC、BBJ、EBJ、EAD。药物敏感性检测结果表明,分离菌株的耐药性均较强,且不同分离株对同一药物敏感性不同。【结论】副猪嗜血杆菌病在陕西关中地区猪群中流行比较严重,其基因型较多且与其他地域的菌株有一定差异。
- 刘辉陈胜利杨增岐刘海金张淑霞杜恩岐王兴龙党如意
- 关键词：副猪嗜血杆菌
- 鸡IFN-β启动子荧光素酶报告载体的构建与活性检测被引量：2
- 2013年
- 构建并鉴定鸡β干扰素(IFN-β)基因启动子荧光素酶报告基因载体并进行转录活性分析。通过PCR方法从鸡基因组DNA中克隆鸡IFN-β基因启动子,亚克隆到含萤火虫荧光素酶报告基因pGL3-basic载体上,构建鸡IFN-β基因启动子荧光素酶报告基因载体pChIFN-β-luc;用脂质体法将构建的报告基因载体瞬时转染鸡胚成纤维细胞系DF-1,并设置空白对照组和poly(I:C)处理组,检测荧光素酶的活性。经PCR扩增出鸡IFN-β基因启动子序列,双酶切及测序鉴定各重组体构建正确;转染后检测,pChIFN-β-luc具有转录活性,并且在poly(I:C)的刺激下其荧光素酶活性显著升高。本试验为进一步研究鸡IFN-β基因转录调控机制奠定了基础。
- 陈胜利唐文雅郝华芳王兴龙刘阳坤付向晶张鹏贺生芳杜恩岐杨增岐
- 关键词：启动子
