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一种可复制型肾癌治疗性DNA疫苗: 本发明公开了一种可复制型肾癌治疗性DNA疫苗，是将复合基因sig‑tG250‑Fc‑GPI‑IRES‑GM/B7插入可复制型DNA疫苗载体pSVK中得到的。该疫苗是一种可以诱导自身抗肿瘤免疫反应的DNA疫苗，疫苗本身的安...; 于继云阎瑾琦田仁礼李云奇肖毅张巍张亮王宇刘宁; 文献传递

重组肿瘤相关抗原蛋白与肿瘤治疗性DNA疫苗静电耦合成为复合纳米颗粒的初步研究被引量：2: 2008年; 目的:验证原核表达的重组肿瘤相关抗原蛋白SUR-IM与肿瘤治疗性DNA疫苗pVAX1-2PFcGB能够通过静电耦合形成复合纳米颗粒。方法:通过蛋白-DNA琼脂糖凝胶电泳阻滞实验、DNaseⅠ消化核酸的保护实验及原子力显微镜观察验证二者是否结合;此外,通过体外瞬时转染293T细胞研究蛋白质所结合的质粒是否能够在体外顺利表达。结果:证实二者确实能够通过静电耦合形成纳米级的颗粒,结合后蛋白质对DNA具有一定的保护作用,并且蛋白不会影响与之结合的质粒在细胞中的高效表达。结论:该复合纳米颗粒将蛋白质和核酸组分有机结合在一起,使肿瘤抗原、免疫佐剂及DNA肿瘤疫苗协同发挥作用,为日后进行抗肿瘤功能研究奠定了重要基础。; 王浩阎瑾琦张飒贾锐张亮刘宁王宇宋晓国于继云; 关键词：重组蛋白

一种可复制型肾癌治疗性DNA疫苗: 本发明公开了一种可复制型肾癌治疗性DNA疫苗，是将复合基因sig-tG250-Fc-GPI-IRES-GM/B7插入可复制型DNA疫苗载体pSVK中得到的。该疫苗是一种可以诱导自身抗肿瘤免疫反应的DNA疫苗，疫苗本身的安...; 于继云阎瑾琦田仁礼李云奇肖毅张巍张亮王宇刘宁

肿瘤基因疫苗免疫增效载体pVAX1-IRES-GM/B7的构建与表达被引量：7: 2008年; 目的:构建上游可以表达肿瘤抗原复合物,下游表达人GM-CSF和B7.1免疫协同增效分子的双顺反子真核表达载体pVAX1-IRES-GM/B7。方法:通过搭桥PCR获得人GM-CSF和B7.1融合基因,插入已构建好的DNA疫苗载体pVAX1-IRES的下游,瞬时转染293T细胞,通过流式细胞术和间接免疫荧光检测融合基因的表达。此外,还在载体上游插入肿瘤抗原复合物,进一步验证该载体对肿瘤抗原的表达情况。结果:酶切鉴定和序列分析表明,GM/B7融合基因与设计完全一致,在体外细胞检测中获得表达,而且上游的抗原基因也可以顺利表达。结论:该载体的构建成功可以为肿瘤基因疫苗研制提供免疫增效载体。; 刘宁阎瑾琦冉多良贾锐张亮王浩于继云; 关键词：B7.1 IRES 癌症疫苗

双顺反子真核表达载体pVAX1-IRES的构建与鉴定被引量：6: 2008年; 目的:为适应恶性肿瘤免疫治疗中多基因联合应用的需要,在真核表达载体pVAX1的基础上,利用内部核糖体进入位点IRES序列,构建双顺反子真核表达载体pVAX1-IRES,以增强DNA疫苗的免疫疗效。方法:通过PCR扩增获得目的基因IRES并定向克隆到pVAX1载体中,然后在IRES序列的上下游分别插入红色荧光蛋白基因DsRed1和增强型绿色荧光蛋白基因EGFP,瞬时转染人胚胎肾细胞293T,通过流式细胞术和免疫荧光验证基因表达。结果:pVAX1-IRES经相应酶切和测序鉴定,与预期设计一致,DsRed1基因和EGFP基因在pVAX1-IRES载体中,不仅可以分别表达,而且可以同时表达,显示该双顺反子真核表达载体构建成功。结论:pVAX1-IRES双顺反子表达载体的构建,为基因联合表达和恶性肿瘤的免疫治疗作了必要准备。; 阎瑾琦刘国栋刘荷中贾锐王浩刘宁张亮于继云; 关键词：内部核糖体进入位点真核表达

以hTERT为靶点的肿瘤治疗性腺病毒疫苗: 本发明公开了一种以hTERT为靶点的肿瘤治疗性腺病毒疫苗。本发明是先将hTERT复合基因eTERTFcGB插入pShuttle-CMV穿梭载体中CMV启动子的下游，得到携带hTERT复合基因eTERTFcGB的重组穿梭载...; 于继云阎瑾琦肖毅徐元基姜云波张巍王宇刘宁杜芝燕; 文献传递

抗肿瘤基因疫苗和相应转基因细胞模型的实验研究: 恶性肿瘤是当今世界严重威胁人类生命健康的致命杀手。随着人们生活水平的提高，生活习惯的改变以及环境污染等因素，导致肿瘤发病率明显上升。在当前的治疗策略中，免疫治疗成为新兴的研究热点，肿瘤疫苗成为一种治疗恶性肿瘤的重要方法。...; 刘宁; 关键词：抗肿瘤基因肿瘤疫苗免疫治疗; 文献传递

多靶点复合抗原抗肿瘤基因疫苗的构建及真核表达被引量：6: 2008年; 目的:构建含有人存活蛋白(survivin)-2B主要T细胞表位区域、人和猴绒毛膜促性腺激素β链的核心片段CTP37区域融合基因的真核表达质粒,并在人胚肾293T细胞中进行表达。方法:通过基因合成和搭桥PCR技术构建含有Survivin-2B主要T细胞表位区域、人和猴CTP37区域基因的融合基因2PAG,将其插入含有人Igκ链前导信号肽(sig)、人IgG-Fc和糖基磷脂酰肌醇(GPI)锚定信号肽融合基因序列的细胞膜锚定修饰真核表达载体pCI-Fc-GPI中,继而又将酶切后的sig-2PAG-FC-GPI融合基因导入含有细小病毒内部核糖体结合位点(IRES)基因且可以共表达人GM-CSF和B7.1融合基因的真核表达载体pVAX1-IRES-GM/B7中;将构建的重组质粒pVAX1-sig-2PAG-FC-GPI-GM/B7(简称pVAX1-2PFcGB)转染293T细胞,利用流式细胞仪和免疫荧光检测其表达情况。结果:2PAG融合基因经测序正确,PCR和酶切鉴定证明已成功连入真核表达载体pVAX-IRES-GM/B7中;流式细胞仪和免疫荧光的检测结果显示,重组质粒pVAX1-2PFcGB在293T细胞中得到很好的表达。结论:成功构建了重组质粒pVAX1-2PFcGB,且在293T细胞中可以有效表达,为对该基因疫苗的后续功能研究奠定了基础。; 贾锐阎瑾琦刘国栋刘宁张亮王浩范明于继云; 关键词：肿瘤抗原基因疫苗真核表达

基因枪介导真核表达质粒转染体外培养的COS-7细胞系的实验研究: 2008年; 目的:建立基因枪子弹制备及转染体外培养COS-7细胞系的方法。方法:以亚精氨、氯化钙沉淀法制备子弹(DNA+金颗粒),利用原子力显微镜观察子弹制备情况;采用基因枪方法分别将真核表达质粒pVax-Dsred-IRES-EGFP转染对照组和实验组COS-7细胞,转染后24h,利用激光扫描共聚焦显微镜观察细胞中红、绿荧光蛋白的表达。结果:制备了基因枪子弹,DNA紧密包裹在金颗粒周围;基因枪介导的pVax-Dsred-IRES-EGFP被转染入体外培养的COS-7细胞,转染后24h可检测到红、绿荧光,而对照组则没有荧光蛋白的表达。结论:国产新芝SJ-500型基因枪能够有效介导外源基因转移,基因枪转染的COS-7细胞能够有效表达报告基因。; 张亮阎瑾琦马继尧王浩刘宁贾锐韩刚董金凯田仁礼于继云; 关键词：基因枪细胞转染真核表达载体荧光蛋白

一种DNA疫苗真核表达载体及其在制备基因疫苗中的应用: 本发明公开了一种DNA疫苗真核表达载体及其应用。其目的是提供一种DNA疫苗真核表达载体与其在制备抗肿瘤等基因疫苗中的应用。所述DNA疫苗真核表达载体是在pVAX1载体骨架中添加内部核糖体进入位点编码序列得到的重组pVAX...; 于继云阎瑾琦贾锐王浩张亮刘宁; 文献传递

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刘宁