- T-cadherin在脂联素抑制缺氧/复氧导致的乳鼠心肌细胞凋亡中的作用被引量：5
- 2013年
- 目的:通过腺病毒介导的RNA干扰技术沉默一种新的脂联素(APN)受体T-cadherin的表达,并建立心肌细胞缺氧/复氧(H/R)模型,观察T-cadherin对H/R所致心肌细胞凋亡的影响。方法:选用原代培养72 h的心肌细胞进行实验,随机分为5组:(1)空白对照组:心肌细胞正常培养;(2)H/R组;(3)APN+H/R组;(4)Ad-T-cadherin-siRNA+APN+H/R组;(5)Ad-HK(腺病毒阴性对照)+APN+H/R组。首先,确定最适合的腺病毒感染滴度,RT-PCR和Western blotting检测腺病毒介导的干扰RNA对T-cadherin表达的影响效果;其次,通过流式细胞术和TUNEL检测心肌细胞的凋亡。结果:原代培养获得高纯度的乳鼠心肌细胞。腺病毒感染的最佳MOI值为100,48 h后腺病毒的感染效率和红色荧光蛋白表达最强,其效率高于90%。RT-PCR和Western blotting证实腺病毒介导的siRNA转染的心肌细胞T-cadherin mRNA和蛋白水平均明显下降(P<0.05)。Ad-T-cadherin-siRNA+APN+H/R组心肌细胞凋亡率与APN+H/R组相比显著升高(P<0.05),与H/R组相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论:重组腺病毒Ad-T-cadherin-siRNA能够在体外高效感染原代心肌细胞,并成功降低T-cadherin在心肌细胞的表达;低表达的T-cadherin阻断了脂联素对缺氧/复氧诱导的乳鼠心肌细胞凋亡的抑制作用。
- 孙亚丽边云飞孙旭刘改珍白瑞肖传实
- 关键词：脂联素缺氧复氧
- P-选择素在血管紧张素Ⅱ诱导的高血压致血管重构中的作用及机制
- 目的:探讨P-选择素在血管紧张素Ⅱ诱导的小鼠高血压模型致血管重构中的作用及可能的机制。
方法:
(1)模型
采用C57BL/6品系P-选择素基因敲除(P-selectin-/-，KO)小鼠，利用血管紧张...
- 孙旭
- 关键词：P-选择素TGF-Β1高血压血管重构实时荧光定量
- P-选择素对血管紧张素Ⅱ诱导的高血压致血管重构的影响被引量：3
- 2013年
- 目的探讨P-选择素(P-selectin)在血管紧张素Ⅱ诱导的小鼠高血压模型致血管重构中的作用及机制。方法采用P-选择素基因敲除(P-selectin-/-,KO)小鼠,利用血管紧张素Ⅱ微量泵灌注(angiotensinⅡinfusion)构造高血压模型;随机分为4组:WT+PBS组(阴性对照组)、P-selectin-/-+PBS组(空白对照组)、WT+AngⅡ组(阳性对照组)、P-selectin-/-+AngⅡ组(实验组)。免疫组织化学染色观察转化生长因子-β1(TGF-β1)、Smad2/3蛋白在血管的表达水平,RT-PCR法检测血管组织TGF-β1、Smad3基因的表达。结果 WT+AngⅡ组与WT+PBS组、P-selectin-/-+AngⅡ组比较,WT+PBS组与P-selectin-/-+PBS组比较,TGF-β1、Smad3蛋白的表达均升高,其mRNA与其蛋白表达水平基本一致。结论 P-selectin能够上调TGF-β1、Smad3蛋白和mRNA的表达,主要通过加强TGF-β1/Smads信号通路的正反馈路径促进血管重构,AngⅡ发挥协同作用。
- 孙旭边云飞刘改珍孙亚丽肖传实
- 关键词：P-选择素转化生长因子-Β1
