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代谢木糖重组谷氨酸棒杆菌的构建: 2014年; 为了使谷氨酸棒杆菌较好地利用木糖生产有机酸,将来自Escherichia coli K-12的木糖异构酶基因xylA构建到表达载体pXMJ19中,导入Corynebacterium glutamicum ATCC13032Δldh中,成功表达了该酶基因。结果表明:重组菌株在以木糖为唯一C源进行发酵时,木糖的消耗速率为0.54 g/(L·h),木糖异构酶比酶活约为0.54 U/mL;在以木糖和葡萄糖的混合糖为C源进行发酵时,菌株优先利用葡萄糖,在葡萄糖完全消耗后,菌株开始有效利用木糖;以木糖为唯一C源进行两阶段发酵时,琥珀酸的收率可达(0.62±0.003)g/g。; 张恒丽蔡恒汪晨张凯周志惠; 关键词：谷氨酸棒杆菌琥珀酸木糖异构酶基因木糖

放线菌酮对米根霉积累L-苹果酸代谢途径的调控作用被引量：9: 2009年; 实验考察了富马酸酶活抑制剂放线菌酮对米根霉发酵产L-苹果酸和富马酸的影响.结果表明,发酵16h加入浓度15mg/L的放线菌酮使米根霉富马酸酶胞质同功酶比活力峰值降低48.7%,而苹果酸脱氢酶胞质同功酶活力却未有明显改变,生成的富马酸比对照样减少37.1%,而L-苹果酸积累量提高54.6%,达到21.7g/L.表明通过对米根霉富马酸酶胞质同功酶的抑制作用能减弱米根霉积累富马酸代谢途径中由L-苹果酸向富马酸的转化,从而促进米根霉积累L-苹果酸.; 何皓李霜徐晴张凯黄和; 关键词：L-苹果酸米根霉放线菌酮富马酸

通过DNA改组技术定向进化赖氨酸脱羧酶基因cadA和ldc被引量：2: 2015年; 利用DNA改组技术对赖氨酸脱羧酶野生型基因ldc进行随机突变,在大肠杆菌Escherichia coli JM109中构建赖氨酸脱羧酶突变体库。从E.coli JM109和蜂房哈夫尼菌Hafnia alvei AS1.1009中分别克隆出赖氨酸脱羧酶基因cad A和ldc。查询NCBI数据库得知,二者的同源性为75%。分别构建重组质粒p Trc99a-cad A和p Trc99a-ldc,以此2种质粒为模板,经PCR扩增,获得目的基因片段,分析目的基因片段中存在的限制性酶切位点,用多种限制性内切酶碎片化2种基因,切割成不同大小的片段。这些小片段进行不同组合,突变体经过LBXL平板初筛和高效液相色谱(HPLC)复筛,获得1株酶活性提高的赖氨酸脱羧酶突变体,编号为LDC2-16,其比酶活为4 869.86 U/mg(以1 mg总蛋白计),与2种野生型赖氨酸脱羧酶基因表达的酶Cad A(1 652.63 U/mg)、Ldc(2 365.93 U/mg)相比,在最适温度37℃、p H 6.0时,突变体的比酶活分别是上述野生型酶的2.95和2.06倍。摇瓶发酵5 h后,目标产物1,5-戊二胺产量从46.9提高至63.9 g/L,提高了36%。; 张凯蔡恒汪晨; 关键词：DNA改组定向进化大肠杆菌

γ-PGA合成酶基因在大肠杆菌中的克隆和表达: 2013年; 研究了γ-PGA合成酶基因pgsBCA在大肠杆菌中的克隆和表达,以pET28a(+)为载体,构建表达载体pET28a(+)-pgsBCA,导入宿主Escherichia coli Rosetta中,诱导使之表达。将发酵液离心去除菌体,得到上清液用旋转蒸发仪浓缩后,采用SDS-PAGE电泳检测重组菌E.coli Rosetta/pET28a-pgsBCA产生的γ-PGA分子量在200-300kDa之间,将产物水解,采用薄层层析法鉴定产物由单一的谷氨酸组成,表明γ-PGA合成酶基因pgsBCA在大肠杆菌中成功表达。; 乔广军汪晨周志蕙张凯蔡恒; 关键词：大肠杆菌克隆

多杀菌素高产菌株的诱变选育被引量：4: 2012年; 新型微生物杀虫剂多杀菌素具有生物农药安全性和化学合成农药速效性,对影响经济的重要害虫有极高的活性,本文以刺糖多胞菌为出发菌株,通过自然选育得到出发菌株A6,在能量10keV、剂量1.4×1016ions/cm2的条件下进行氮离子束诱变,获得突变株AN-099;再通过照射距离为30cm的15W紫外灯照射30s进行紫外线复合诱变,获得突变菌株ANU-069,多杀菌素产量达到175.62μg/mL,比出发菌株A6提高了71.42%,比离子束诱变菌株AN-099提高了30.22%,并且此菌株具有良好的遗传稳定性,用于以后的发酵研究。; 乔广军汪晨张凯张恒丽蔡恒; 关键词：多杀菌素诱变菌株选育

生物法制备1,5-戊二胺的研究进展被引量：8: 2012年; 生物法制备1,5-戊二胺是一种创新且具有潜在竞争力的生产方法,从生物法制备1,5-戊二胺研究现状、赖氨酸脱羧酶性质、1,5-戊二胺的生产菌种及代谢途径分析几方面进行了综述,并对其应用前景进行了展望。; 张凯蔡恒汪晨张恒丽; 关键词：谷氨酸棒杆菌大肠杆菌代谢途径

高产琥珀酸菌株的等离子体诱变选育被引量：12: 2013年; 以谷氨酸棒杆菌作为原始出发菌株,通过常压室温等离子体诱变技术,确定高产琥珀酸等离子体诱变的物理参数和最佳诱变条件,采用在培养基中添加溴甲酚紫作为酸碱指示剂的方法,测定发酵液前后在波长590 nm处的吸光值,高通量筛选出在该波长处吸光值变化较大的突变株。结果表明:在诱变菌株的存活率为8%的条件下获得的突变株的正突变率达到22%。用40 g/L的葡萄糖对突变株进行摇瓶分批发酵,筛选得到诱变菌E7产琥珀酸15.6 g/L,乳酸22.8 g/L,该菌具备良好的产琥珀酸与有机酸的能力。; 汪晨蔡恒张恒丽张凯欧阳平凯; 关键词：常压等离子体琥珀酸谷氨酸棒杆菌诱变

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张凯