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真鲷(Pagrus major)vasa基因5′端启动子克隆及表达载体构建被引量：2: 2011年; 采用染色体步移(Genome walking)的方法克隆了真鲷vasa基因5′侧翼序列,采用生物信息学方法分析潜在的顺式作用元件,并与斑马鱼核心启动子进行比对,在此基础上构建了绿色荧光蛋白表达载体。序列分析结果显示:克隆得到的真鲷vasa基因5′侧翼序列序列长度为2762bp,其中包括TATA-box、CAAT-box、SP-1、GAGA-1、OCT-1、v-Myb、Sox-5、SRY、HNF等可能对vasa基因转录调控起重要作用的顺式作用元件。潜在的核心启动子区与斑马鱼核心启动子具有同源性(61.1%),推测可能对转录调控具有重要的作用。采用PCR方法扩增起始密码5′侧翼全长片段,连接入去除CMV启动子的绿色色荧光蛋白载体,最终成功构建真鲷vasa基因5′侧翼表达载体,为进一步研究分析启动子效率和绿色荧光蛋白在PGCs中的特异表达提供了基础。; 林帆刘清华李军隋娟肖志忠徐世宏马道远肖永双; 关键词：真鲷 VASA 启动子 PGCS

真鲷vasa调控序列对于生殖细胞标记的研究: 原始生殖细胞(PGCs)是两性生殖细胞的前体,研究原始生殖细胞对于了解动物繁殖发育,物种资源保护和恢复具有重要的意义。近年来,原始生殖细胞的标记,分离,冷冻保存及代理繁殖研究已引起了广泛的重视。然而,鱼类中,; 林帆刘清华肖志忠徐世宏李军; 关键词：真鲷 VASA PGCS GFP; 文献传递

一种大菱鲆胚胎发育期原始生殖细胞(PGCs)的定位标记方法: 本发明涉及PGCs的定位标记方法，具体的说是一种大菱鲆胚胎发育期原始生殖细胞（PGCs）的定位标记方法。采集大菱鲆各个阶段胚胎样品固定，固定后用50%甲酰胺于-20-40℃保存，待用；将上述保存各个阶段胚胎样品去卵膜之后...; 刘清华李军林帆徐世宏; 文献传递

真鲷精子在外源DNA下的生理特性和转染效果: 2014年; 为研究真鲷(Pagrus major)精子在外源DNA下的生理特性和转染效果,探索真鲷精子介导转基因技术,作者通过计算机辅助分析外源DNA环境下(不同孵育时间、DNA长度、DNA浓度)真鲷精子活率和运动速度的变化,进一步采用PCR和荧光探针的方法检测外源DNA与真鲷精子的结合情况,并通过人工授精来评价外源DNA能否转染精子并传递至F0代。结果表明:外源DNA浓度、孵育时间及DNA长度对精子活率无显著影响。在5μg/106个精子的高浓度10 kb DNA下孵育12 h,真鲷精子仍具有(75.89±5.55)%的精子活率,平均直线速度(70.97±6.37)μm/s,与对照组无显著差异,但精子平均曲线速度显著下降,比对照组低21.85μm/s。真鲷精子与带Fluorescein荧光素的DNA片段共孵育后,部分精子在荧光显微镜下观察到绿光。将DNA孵育后精子进行人工授精表明经过1μg DNA/106个精子孵育后的受精率和孵化率无显著下降,通过PCR法并没有在外源DNA处理的精子和F0代中检测到目的基因,表明外源DNA虽然能够吸附在真鲷精子表面,但并不足以携带进入卵子产生转基因后代。; 郑君飘刘清华徐世宏马道远肖志忠林帆肖永双李军; 关键词：精子

大菱鲆胃质子泵(H^+/K^+ ATPase)与消化机能发生的关系: 2014年; 胃质子泵(H+/K+ATPase)是胃酸分泌的关键酶。本试验采用RACE和PCR方法从大菱鲆的胃组织中提取RNA克隆得到了H+/K+ATPaseα亚基cDNA全长序列。结果表明:大菱鲆H+/K+ATPaseα亚基序列全长3467 bp,开放阅读框为2964 bp,编码988个氨基酸。与GenBank上其它物种比对发现,大菱鲆H+/K+ATPaseα亚基与斑鳜同源性最高,为89%。进化树分析发现,H+/K+ATPase在进化上具有物种特异性。经RT-PCR和荧光定量PCR检测,大菱鲆H+/K+ATPase在胚胎孵化后22d开始表达,晚于大菱鲆胃腺出现的时间(16 d),说明大菱鲆胃腺的发育完成并不代表胃功能的完善。另外,大菱鲆H+/K+ATPase除了在胃中大量表达之外,在食道中的表达量也很高。结合组织学观察,作者认为,大菱鲆H+/K+ATPase在食道中大量表达是因为在发育上食道是胃的前体,因此保留了分泌H+/K+ATPase的能力。同时通过整体原位杂交试验表明:大菱鲆H+/K+ATPase会首先在食道的末端和胃的贲门处表达。本研究为进一步了解海水鱼类的消化机制提供了理论基础。; 迟良徐世宏肖志忠马道远林帆赵春彦赵春彦武宁宁肖永双李军; 关键词：大菱鲆质子泵整体原位杂交海水鱼类进化树

牙鲆与夏鲆杂交及回交子代的受精细胞学及早期发育研究: 杂交是目前水产育种中应用最为广泛最有成效的育种途径.在进行牙鲆(Paralichthys olivaceus)和夏鲆(P.dentatus)杂交及回交的基础上，我们比较了亲本、正反交及两组回交子代受精细胞学及早期发育过程...; 隋娟何滔刘清华林帆李军徐世宏肖志忠马道远赵春彦; 关键词：牙鲆杂交技术受精卵

真鲷vasa调控序列对于生殖细胞标记的研究: 本研究通过染色体步移克隆真鲷vaSa启动子及相关调控序列，构建pPmvasGFP转基因载体和GFP-Pmvas3'UTR chimera.mRNA，利用青鳉做为模式动物，通过显微注射GFP-Pmvas3'UTR chim...; 林帆刘清华肖志忠徐世宏李军; 关键词：真鲷生殖细胞; 文献传递

一种大菱鲆胚胎发育期原始生殖细胞（PGCs）的定位标记方法: 本发明涉及PGCs的定位标记方法，具体的说是一种大菱鲆胚胎发育期原始生殖细胞（PGCs）的定位标记方法。采集大菱鲆各个阶段胚胎样品固定，固定后用50%甲酰胺于-20-40℃保存，待用；将上述保存各个阶段胚胎样品去卵膜之后...; 刘清华李军林帆徐世宏; 文献传递

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林帆