刘波
- 作品数：16 被引量：58H指数：5
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- siRNA沉默Smad3对人KFB细胞增殖、凋亡及合成MMP3的影响被引量：4
- 2009年
- 目的研究siRNA特异性沉默Smad3基因对人瘢痕疙瘩成纤维细胞(keloidfibroblast,KFB)增殖、凋亡及合成基质金属蛋白酶3(matrix metalloproteinase3,MMP3)的影响。方法设计合成3对Smad3特异性siRNA片段(Smad3-siRNA-Y1,Y2,Y3)和1对无关干扰片段,转染人KFB细胞,RT-PCR和Western blot方法检测Smad3-siRNA片段对Smad3基因的特异性沉默效果,MTT法检测其对细胞增殖的影响,流式细胞仪检测细胞周期及细胞凋亡的变化,免疫细胞化学法检测MMP-3表达量的变化。结果75nmol/L Smad3-siRNA-Y1处理KFB细胞48小时后可特异并有效地抑制Smad3基因的表达;抑制细胞增殖,使S期细胞减少,G0/G1期细胞增多;凋亡指数增加;细胞表达MMP-3增加。结论Smad3-siRNA可特异性抑制KFB细胞中Smad3基因表达,明显抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡,并加快其合成MMP3。
- 刘波张恒术果磊
- 关键词：RNA干扰SMAD3瘢痕疙瘩成纤维细胞
- TAT-Smad7-HA融合蛋白的表达及其转导活性验证
- 2008年
- 目的构建、表达、纯化、鉴定并标记TAT-Smad7-HA融合蛋白,验证其在体外培养的人原代瘢痕疙瘩成纤维细胞(keloid fibroblast cell,KFB)中的转导活性。方法分别将TAT-PTD、Smad7基因和HA片段依次连接入pET32a(+)质粒构建成pTAT-Smad7-HA重组原核表达载体,IPTG诱导表达后经亲和纯化、Western blot验证、肠激酶切割、目的片段回收和FITC标记后,将FITC-TAT-Smad7-HA融合蛋白作用于体外培养的人原代KFB以观察其转导活性。结果成功构建了TAT-Smad7-HA融合蛋白的原核表达载体pTAT-Smad7-HA,目的蛋白在诱导后获得了高效表达(占菌体总蛋白的25%以上),并成功进行了纯化(纯度达95%以上)、脱盐柱脱盐、Western blot验证、硫氧环蛋白切除及FITC标记,得到相对分子质量约为50×103的FITC-TAT-Smad7-HA融合蛋白,并进一步在体外培养的人KFB细胞中证实了其高转导活性。结论本实验获得了高纯度的FITC-TAT-Smad7-HA融合蛋白,并验证了其在KFB中的高转导活性。
- 刘波张恒术
- 关键词：瘢痕疙瘩TGF-Β/SMAD信号通路
- JAK2/STAT3通路在肝癌细胞侵袭及血管生成拟态中的作用被引量：3
- 2012年
- 目的探讨JAK2/STAT3通路在肝癌细胞QGY-7701侵袭及血管生成拟态中的作用。方法 JAK2抑制剂AG490(5、10μmol/L)处理肝癌细胞48 h,Transwell小室、体外成管实验分别检测各组细胞的体外侵袭能力和成管能力,RT-PCR检测Twist1及MMP-2 mRNA表达差异,Western blot检测STAT3、p-STAT3、Twist1和MMP-2蛋白表达差异。结果与对照组相比,Transwell小室穿膜细胞数减少,形成管道结构数目减少,Twist1及MMP-2 mRNA表达减少,Twist1、MMP-2和p-STAT3蛋白表达减少,差异均有统计学意义(P<0.05),STAT3蛋白表达无差异(P>0.05)。结论 AG490能有效抑制肝癌细胞侵袭及成管的能力,JAK2/STAT3通路在肝癌细胞侵袭及血管生成拟态中起促进作用。
- 庞林宾王洪林王晔飞李洪涛宋立文刘波
- 关键词：肝癌AG490血管生成拟态
- 增强型绿色荧光蛋白基因转染对原代培养的人成纤维细胞细胞周期的影响被引量：1
- 2007年
- 目的:观察转染增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因后对原代培养的人瘢痕疙瘩成纤维细胞细胞周期的变化,建立原代培养的人瘢痕疙瘩成纤维细胞的示踪方法。方法:在大肠杆菌中扩增pEGFP-N1质粒,采用电转仪将pEGFP-N1质粒转入原代培养的人瘢痕疙瘩成纤维细胞,应用荧光显微镜观察其转染过程及瞬时表达情况,流式细胞仪检测其转染效率和细胞周期的变化。结果:增强型绿色荧光蛋白基因在转染24h后得到了明显表达,48h后流式细胞仪检测其表达率为32.6%,细胞周期无明显的变化,且未影响成纤维细胞的贴壁过程。结论:经pEGFP -N1质粒转染的原代培养的人癜痕疙瘩成纤维细胞仍能在体外存活,对成纤维细胞的生长没有明显的影响。pEGFP-N1是转染原代培养的人成纤维细胞较为理想的瞬时表达载体,是研究成纤维细胞生物学行为的良好示踪剂。
- 果磊刘波张恒术任国胜
- 关键词：绿色荧光蛋白转染人成纤维细胞细胞周期
- 花姜酮对人肝癌SMMC-7721细胞侵袭及CXCR4表达的影响被引量：5
- 2013年
- 目的研究花姜酮对人肝癌SMMC-7721细胞生长侵袭能力的影响及对CXCR4 mRNA和蛋白表达的影响,探讨花姜酮抗肝癌侵袭可能的作用机制。方法分别应用花姜酮10μmol/L、20μmol/L处理人肝癌细胞,采用Transwell小室检测肝癌细胞的侵袭能力,RT-PCR、Western blotting实验检测CXCR4 mRNA及蛋白表达的变化。结果花姜酮处理人肝癌细胞48 h后,对照组细胞透膜数为(56.8±7.8)个/视野,10μmol/L组透膜数为(41.4±4.8)个/视野,20μmol/L组透膜数为(23.2±5.6)个/视野,随花姜酮浓度增加,细胞侵袭人工基底膜的能力显著降低(P<0.05),RT-PCR及Western blotting结果显示CXCR4 mRNA及蛋白表达随花姜酮浓度的增加而降低(P<0.05)。结论花姜酮可能通过降低CXCR4的表达抑制人肝癌SMMC-7721细胞的生长和侵袭能力。
- 刘波罗强刘芮王成王洪林易泽洪
- 关键词：肝癌CXCR4
- 经脐单孔腹腔镜与传统腹腔镜胆囊切除术安全性Meta分析被引量：5
- 2012年
- 目的探讨经脐单孔腹腔镜胆囊切除术(SILC)的安全性。方法计算机检索Cochrane图书馆(2011年第1期)、PubMed(1978-2011年)、EMBase(1978-2011年)、CNKI(1978-2011年)有关SILC与传统腹腔镜胆囊切除术(CLC)的随机对照试验。按照入选标准,有8项临床试验纳入本研究,由2名作者各自独立地对入选研究中有关试验设计、研究对象的特征、研究结果等内容进行摘录,并用RevMan5.1软件进行分析。结果与CLC相比较,SILC除手术时间延长外[MD=8.03,95%C(I6.02,10.03),P<0.01],术中出血量[MD=-2.41,95%可信区间为(-5.66,0.83),P=0.15]、术后住院时间[SMD=0.15,95%CI(-0.06,0.37),P=0.16]及并发症的发生率[RR=1.21,95%可信区间为(0.53,2.78),P=0.69]差异均无统计学意义。结论对于有条件的医院,经过严格筛选病人,SILC是一种安全有效的手术方式,尤其适用于对美容有强烈要求的病人。
- 王晔飞沈艾刘波王洪林
- 关键词：腹腔镜胆囊切除术META分析
- 电穿孔法转染原代培养的瘢痕疙瘩成纤维细胞的条件优化被引量：1
- 2007年
- 目的:通过电穿孔法将增强型绿色荧光蛋白基因真核表达载体pEGFP-N1质粒导入原代培养的人瘢痕疙瘩成纤维细胞,探讨影响外源基因电转染效率的参数,如电压、脉冲长度、DNA剂量以及转染后时间长度等。方法:在大肠杆菌中扩增pEGFP—N1质粒,选择不同的电压梯度、脉冲长度及DNA剂量,采用电转仪将pEGFP-N1质粒导入原代培养的人瘢痕疙瘩成纤维细胞,用荧光显微镜观察转染后不同时间pEGFP-N1瞬时表达情况及细胞存活情况,流式细胞仪检测其转染效率。结果:在电压为250v、脉冲数1、脉冲长度150μs、DNA质粒6μg时,电穿孔法将pEGFP-N1质粒导入瘢痕疙瘩成纤维细胞转染率最高,细胞存活率最高,转染后24h明显表达,48h后表达最强。结论:在适当的电压、脉冲长度下,选择适当的DNA用量,在转染后一定的时间范围内,电穿孔法转染原代培养的人瘢痕疙瘩成纤维细胞可使目的基因获得较高的转染率,且细胞死亡最少。电穿孔法是研究原代培养的人瘢痕疙瘩成纤维细胞生物学行为较为理想的转染方法。
- 果磊刘波魏东山任国胜
- 关键词：电穿孔法绿色荧光蛋白转染成纤维细胞
- Janus激酶抑制剂AG490对人肝癌SMMC-7721细胞侵袭转移的影响被引量：7
- 2011年
- 目的研究Janus激酶抑制剂AG490对人肝癌SMMC-7721细胞侵袭转移能力的影响,探讨JAK2/STAT3信号通路在肝癌侵袭调控中的作用。方法实验分为对照组、实验组(5、10μmol/L AG490处理的SMMC-7721细胞)。采用Transwell小室检测肝癌细胞的侵袭能力,RT-PCR检测MMP-2 mRNA和VEGF mRNA表达的变化,Western blot检测STAT3、MMP-2、VEGF蛋白的表达和活化。结果 AG490处理人肝癌细胞48 h后,对照组透膜细胞数为(74.6±6.3)/视野,5μmol/L AG490组透膜细胞数为(58.2±7.2)/视野,10μmol/L组透膜细胞数为(38.2±5.7)/视野,实验组与对照组相比,细胞侵袭人工基底膜的能力显著降低(P<0.05);与对照组相比,RT-PCR显示实验组MMP-2 mRNA和VEGF mRNA表达降低(P<0.05),Western blot显示实验组p-STAT3的活化降低,MMP-2及VEGF蛋白表达降低(P<0.05)。结论阻断STAT3蛋白的激活,能够降低MMP-2及VEGF基因蛋白的表达,抑制肝癌细胞在体外的侵袭能力。
- 刘波王洪林宋立文
- 关键词：肝癌AG490JAK2/STAT3信号通路
- FOXM1转录因子在人宫颈癌组织中的表达及其临床意义被引量：10
- 2014年
- 目的探讨FOXM1转录因子在宫颈癌组织中的表达水平及其临床意义。方法采用免疫组织化学染色法,检测38例宫颈癌、22例宫颈上皮内瘤样病变(CINⅠ～Ⅲ)和17例正常宫颈组织中FOXM1和Ki-67的表达水平。结果 FOXM1在正常宫颈、CIN和宫颈癌组织中的异常表达率分别为5.88%、63.6%和92.1%;FOXM1异常表达水平与宫颈癌患者的病理分化程度、临床分期、术后复发以及Ki-67表达水平均高度相关。结论 FOXM1可能与宫颈癌组织的异常增殖、恶性进展、分期和预后相关。
- 刘波黄世峰袁虹
- 关键词：宫颈癌免疫组织化学
- 封闭式负压引流在妊娠期注射黄体酮所致窦道中的应用1例
- 2008年
- 目的 阐述封闭式负压引流在无菌性窦道治疗的临床应用价值。方法 回顾性分析我科成功应用封闭式负压引流处理妊娠期注射黄体酮所致窦道一例。结果 封闭式负压引流半月后痊愈出院。结论 可供临床工作者处理类似病例时参考。
- 刘波张恒术果磊
- 关键词：妊娠期黄体酮脓肿窦道负压引流
